まず、3マイクロリットルのH3K4me1抗体を150マイクロリットルの抗体バッファーが入ったチューブにピペットで入れます。希釈した抗体を、Concanavalin A ビーズに隔離されたマウス筋芽細胞を含む8つのPCRチューブストリップの各チューブにピペットで移します。チューブを数回反転させて、内容物をよく混ぜます。
次に、チューブを摂氏4度のシーソーモーションシェーカーに一晩置きます。翌日、磁気ラックでサンプルを清澄化した後、上清をピペットで取り出します。上清を吸引した後、希釈した二次抗体を50マイクロリットルを各サンプルチューブに加えます。
サンプルチューブを反転して混合し、シーソーモーションシェーカーで室温で1時間インキュベートします。清澄化されたサンプルの上清を捨てます。次に、200マイクロリットルのDIGウォッシュバッファーを各チューブにピペットで入れます。
チューブを磁気ラックに戻し、上清をピペットで取り出します。次に、pA/G-Tn5aを含む300 DIGバッファーを各チューブに100マイクロリットル加えます。インキュベーションが完了したら、チューブを磁気ラックに戻します。
次に、清澄化された上清をピペットで取り出します。次に、200マイクロリットルの300 DIGバッファーを各チューブに追加します。サンプルチューブをシェーカーに常温で3分間置きます。
最後の洗浄後、磁気的に清澄化された各チューブから上清を完全にピペットで排出します。次に、50マイクロリットルのタグメンテーションバッファーを追加します。最後に、PCR装置の蓋加熱機能を使用せずに、37°CのPCR装置でチューブを1時間インキュベートします。
