まず、各細菌株の計算量を混合して、ミリリットルあたり最大約500万コロニー形成単位まで合計します。混合物を7, 000 Gで摂氏4度で7分間遠心分離します。次に、上澄みを慎重にピペットで排出します。
ペレットを低緩衝能力とグルコースでハンクの平衡塩溶液に再懸濁します。次に、分化したヒト膣上皮細胞を含む臓器チップをポッドから取り外します。チップの基礎チャネルの出口をピペットチップで塞ぎます。
ピペットプランジャーを押し下げることなく、200マイクロリットルの抗生物質を含まない分化培地を基底チャネル入口に追加します。ピペットチップをピペットから外し、媒体がチャネル内を自由に流れるようにします。次に、37マイクロリットルの細菌接種液をチップの頂端チャネル入口にピペットで注入し、その出口から吸引する。
先端を引っ張ります。次に、アピカルチャンネルの入口と出口の両方をピペットチップで差し込みます。コントロールチップについては、緩衝能力の低いハンク平衡塩溶液を37マイクロリットルピペットで注入し、グルコースを頂端チャネル入口に注入します。
チップの表面に媒体を吸引した後、チップを150ミリメートルのシャーレに入れます。L.crispatusとG.vaginalisのコロニーは、プレーティングから48時間以内に検出され、健康な細菌と腸内細菌叢の両方が膣チップに生着したことが確認されました。L.crispatusを接種した膣チップのpHは、未接種対照チップのpHと同程度であり、G.vaginalisと共培養すると、pHが有意に上昇した。
