モノクロマルチプレックス定量PCR(MMqPCR)を使用したテロメア長測定のためのサンプルおよびマスターミックス調製

まず、末梢血単核細胞から抽出したゲノムDNAサンプルをPCRストリップA、B、Cにそれぞれ添加します。次に、解凍した制御されたDNAアリコートを30秒間ボルテックスします。チューブを短時間遠心分離した後、標準曲線のPCRチューブストリップの最初のチューブに全容量を吸引します。

次に、70マイクロリットルのPCRグレードの水を、標準曲線PCRストリップの2番目から8本のチューブに加えます。次に、コントロールDNAを最初のチューブに再懸濁し、70マイクロリットルを2番目のチューブに吸引します。30秒間待ってから、溶液を2本目のチューブに再懸濁します。

マスターミックス試薬を採取し、PCRフード内で室温に戻します。次に、1マイクロリットルのサイバーグリーンアリコートをバッファーアリコートに追加します。すべてのアリコートを10秒間ボルテックスし、5秒間遠心分離します。

次に、すべてのマスターミックス試薬とプライマーを規定量で5ミリリットルのベタインチューブに加えます。マイナス20°CからDNAポリメラーゼを取り出した後、10秒間ボルテックスした後、5秒間遠心分離します。遠心分離したら、128マイクロリットルをマスターミックスにゆっくりと加えます。

5ミリリットルのマスターミックスチューブを30秒間ボルテックスし、脇に置きます。