テロメア長測定のためのモノクロマルチプレックス定量PCR(MMqPCR)用96ウェルプレートの調製

まず、2つの96ウェルプレート、ローディングトラフ、およびマルチチャンネルピペットチップをPCRフード内に配置します。各プレートにラベルを付けた後、プレート1を180度回転させて、プレート2を技術者に向けたまま、列番号が逆さまになるようにします。次に、調製したMM qPCRマスターミックスの5ミリリットルチューブをローディングトラフに注ぎます。

ピペットチップを使用して、チューブからのすべての溶液が移されていることを確認します。チップをマルチチャンネルピペットに取り付け、各チップの基部を押してしっかりと密閉します。リバースピペッティングを使用して、マスターミックスを最初にすべての偶数カラムまたはすべての奇数カラムに分注し、2つのプレートを交互に分注します。

PCRストリップをボルテックスして遠心分離した後、プレート上に配置する順序でチューブラックに並べます。次に、両方のプレートを180度回転させて、列番号が技術者に対して逆になるようにします。マルチチャンネルピペットを使用して、PCRストリップ内の溶液を再懸濁します。

リバースピペッティングを使用して、各プレートの最初の3つのカラムにPCRストリップAを充填し、マスターミックスの配置のように偶数列または奇数列を交互に入力します。90マイクロリットルに設定された200マイクロリットルのピペットを使用して、PCRストリップSに7番目の標準希釈チューブを完全に再懸濁し、プレート上の4番目から6番目のカラムを満たします。プレートを充填した後、ベンチの上部でプレートを軽くたたいて、ウェル内の液体が下部に沈殿することを確認します。

次に、プレートの上部をシーリングフィルムで覆い、フィルムのすべての端を指先で押し下げて、しっかりと密閉します。プレートの中身を混ぜるには、フードトップで30秒間渦巻きます。次に、密封されたプレートをプレートスピナーに2分間置き、ウェルの開口部を中央に向けて配置します。

次に、プレートをサーモサイクラーにセットし、カラム番号が読みやすいことを確認します。サーモサイクラートップを閉じる前に、各プレートの上部を清潔なティッシュで清掃してください。次に、両方のマシンのサーモサイクラーソフトウェアの[実行開始]ボタンをクリックします。

プロンプトが表示されたら、この実験のデータのラベル付けと追跡に使用される分析ファイルのタイトルを入力します。