循環腫瘍細胞の培養のためのヒト髄膜細胞(HMC)馴化培地の調製と脳脊髄液の収集

まず、T175フラスコにPoly-L-Lysineをプレコートします。フラスコを摂氏37度のインキュベーターに1時間置きます。次に、滅菌血清ピペットを使用してリジン溶液を吸引します。

ピペット30ミリリットルは、フラスコにヒト髄膜細胞を含む完全な髄膜培養培地です。細胞を摂氏37度でインキュベートし、5%の二酸化炭素を補給します。細胞が約75%から80%のコンフルエントに達したら、HMC培養培地を50ミリリットルの円錐管に集めて保存します。

次に、完全な髄膜培養培地をチューブに1対1の比率で加えます。最後に、成長因子をチューブにピペットで挿入し、HMC コンディショニング培地を作成します。脳脊髄液を処理するには、まず氷上の15ミリリットルの円錐形チューブに入れて冷却します。

予冷した遠心分離機で257 Gの遠心分離機で、摂氏4度で5分間遠心分離します。細胞ペレットを乱さずに上清をピペットで取り出し、さまざまなチューブで分注します。次に、細胞ペレットに1ミリリットルのPBSを加えて再懸濁します。

細胞を1,500Gで摂氏4度で5分間遠心分離します。PBS上清を吸引し、チューブの底に約50マイクロリットルを残します。細胞を培養する前に、細胞懸濁液で細胞カウントを行います。

いくつかの成長因子は、ヒト髄膜細胞で培養した培地でアップレギュレーションされました。