軟髄膜疾患マウスからのCSFコレクションとその後のクローン拡大

まず、軟髄膜疾患(LMD)を患っている免疫不全の女性NSGマウスを特定します。麻酔をかけたマウスを手術台に置きます。マウスの鼻を定位装置の修正されたL字型の円錐に配置し、鼻孔が遮られないようにします。

皮膚を両方の耳介の腹面を横切って皮膚を優しく前方に引っ張り、テープで鼻円錐に固定します。手術用ハサミの先端を耳介から後頭骨を横切って下向きにガイドします。触診した凹面のすぐ上に5〜7ミリメートルの小さな正中線切開を作成します。

先端が1〜2ミリメートルの鈍い先端の鈍い鉗子で、大槽に優しく圧力をかけます。先端を閉じた位置に導入し、硬膜に下向きの圧力をかけながら開きます。硬膜がはっきりと識別でき、露出した領域内に関連する血管が見えるまで、鈍的解剖を続けます。

次に、鉗子を開いたままにして、周囲の筋肉組織を引っ込めます。次に、27〜29ゲージの針を1ミリリットルの注射器に取り付けます。シリンジを硬膜の下に挿入して、斜角を視覚化します。

シリンジプランジャーを徐々に引っ込めて、できるだけ多くの脳脊髄液を収集します。液体を微量遠心チューブに移します。すぐに氷の上に置きます。

サンプルを257 gで摂氏4度で5分間遠心分離します。上清を吸引した後、500マイクロリットルの滅菌PBSを細胞ペレットにピペットで移します。ペレットを257 gで室温で5分間遠心分離します。

上清を捨ててから、ペレットをHMCコンディショニング培地を含む96ウェルプレートに移します。