核単離のための凍結ヒト筋間脂肪組織サンプルの粉砕と均質化

まず、キャニスターに液体窒素を充填し、乳棒、乳棒マイクロスクープ、へら、ガラスダウン、ステンレス鋼乳棒、および作業プラットフォーム上の自動ダウナーを配置します。氷で満たされたビーカーでグラスダウンを予冷します。乳棒とへらが入った2つの乳鉢に液体窒素を入れて、器具を冷やします。

その間、ガラスダウンに1ミリリットルの均質化バッファーを追加します。両方の乳鉢に液体窒素を入れ、50ミリグラムのヒト筋肉間脂肪組織サンプルを乳鉢の1つに注ぎます。粉砕するには、乳棒をティッシュにそっと押し付けて、細かく砕きます。

組織が粉砕されると、液体窒素の乳鉢の4分の1から半分がまだ残っています。モルタルを傾けて、モルタルの唇に粉砕された組織を集めます。液体窒素が蒸発したら、粉砕した組織を均質化バッファーを含むガラスダウンにすくい取ります。

自動ダウナーで。ガラスをステンレス製の乳棒を上下に動かし、順方向に10ストローク、続いて逆方向に10ストロークします。溶液が曇り、目に見える組織の破片がなくなったら、氷上で予冷した1.7ミリリットルの低結合チューブに移します。

400マイクロリットルの均質化バッファーでダウンをすすぎ、低結合チューブに移します。