RNAテンプレートC-Star縮合体からのRNAアプタマーの転写

まず、RNA-Templating C-star縮合物を洗浄し、抽出した縮合物の溶液を少なくとも5分間沈殿させます。次に、液面の上からピペッティングして凝縮液の除去を最小限に抑えながら、上清の約半分の量を抽出します。同量の0.3モル塩化ナトリウムをトリスEDTAに添加して、除去した上清を交換し、ピペッティングで混合します。

上清の除去とバッファーの交換のサイクルを合計3サイクル繰り返します。T7転写混合物については、ジメチルスルホキシドに10ミリモルDFHBIのストック溶液を調製します。次に、RNAseおよびDNAseフリー水を使用して、アリコートを最終濃度600マイクロモルに希釈します。

転写キットのコンポーネントを氷上で解凍します。次に、滅菌ピペットチップを使用して、表示されたコンポーネントを室温でオートクレーブ滅菌したマイクロ遠心チューブにピペットで移します。溶液をピペッティングで穏やかに混合し、すぐにRNA転写産物の合成に使用します。

これを行うには、RNA-Templating C-Starsから調製した洗浄済み凝縮液3.3マイクロリットルを顕微鏡イメージングに適したチャンバーにピペットで移します。そして、新たに調製した転写混合物の総量を追加します。転写混合物を凝縮物に添加した直後から、18時間にわたって顕微鏡画像を取得します。

RNAアプタマーの転写については、顕微鏡検査によるフロリゲンの蛍光の経時的な増加により、成功した結果が確認されました。