背根神経節のトリミング、切断、埋め込みによるマルチコンパートメント(MC)デバイスでの培養

まず、収穫した背根神経節を取ります。清潔なベンチで、60ミリメートルのシャーレにトリミングメディアを入れます。解剖スコープとガラスビーズ滅菌器を配置し、スコープの隣にトリミングツール付きのオートクレーブツールボックスを置きます。

解剖スコープを使用して、後根神経節の周りの余分な組織を取り除き、後根神経節体に近い神経根をトリミングします。次に、2番目の60mmシャーレに新しいメディアを入れます。解剖スコープを使用して、トリミングされた後根神経節を約0.5ミリメートルに切断します。

切断した後根神経節を、氷上の培地を含む新鮮な24ウェルプレートに移します。次に、予混合されたヒドロゲルの65.1マイクロリットルと52.8マイクロリットルをそれぞれ体細胞と神経突起のコンパートメントにピペットで入れます。切断した後根神経節を体細胞コンパートメントに慎重に埋め込みます。

インキュベーター内のヒドロゲルを摂氏37度で30分間熱架橋します。次に、ハイドロゲルを90秒間UV架橋します。その後、後根神経節成長培地をハイドロゲルと後根神経節に加えます。

1時間後にメディアを完全に交換し、メディア内の反応性でないフォトイニシエータや残留フォトイニシエータを取り除きます。