閉じ込められた衝突ジェットミキサーは、より大きな混合チャンバー内で2つの高レイノルズ数の流れを互いに向けます。各ジェットの線形運動量は、ミクロンスケールの乱流渦の形成に散逸し、溶媒と反溶媒の流れが急速かつ均一に混合されます。脂質ナノ粒子の調製を開始するには、2つの5ミリリットルシリンジにエタノールを充填し、それぞれを閉じ込められたインポンピングジェットの入口ポート、つまりCIJミキサーにロックします。
シリンジを急速に押し下げ、ミキサーの廃液を廃棄物として収集します。エタノールフラッシュシリンジをCIJから取り外します。インレットアダプターを介して乾燥した窒素の流れを吹き付けて、CIJの内部チャネルを乾燥させます。
脂質ストック溶液を混合し、1.5ミリリットルの微量遠心チューブ内でエタノールで希釈します。pH 4 アセテート緩衝液 100 ミリモルを 10 ミリモルに希釈し、総容量 4 ミリリットルにします。抗溶媒ストリームを調製するには、1.5ミリリットルのチューブ内でRNAとアセテートバッファーを混合します。
1ミリリットルの注射器に500マイクロリットルの溶液を調製します。シリンジを反転させ、水性抗溶媒の流れから空気を排出します。.同様に、1ミリリットルの注射器に500マイクロリットルの脂質溶液を収集します。
次に、シリンジを反転させて、エタン溶媒の流れから空気を排出します。清潔なCIJミキサーをクエンチバスバイアルの上に置きます。2 つのシリンジを CIJ ミキサーの入口ポートに嵌合します。
両方のシリンジを急速に押し下げて、溶媒と抗溶媒の流れを混合し、クエンチバスで脂質ナノ粒子を収集します。シリンジを取り付けたまま、CIJミキサーをクエンチバスから取り出します。CIJを廃棄物容器にかざし、シリンジを取り外して、残りのホールドアップ量を廃棄物容器に流します。
次に、脂質ナノ粒子分散液を含むクエンチバスにキャップをし、バイアルを静かに渦巻かせます。
