Zスコア卵胞密度分析による若い女性の卵巣組織の処理と卵巣予備能の決定

まず、生検後に手術室から卵巣組織を5ミリリットルのサプリメント1X DPBSを含むチューブに収集します。滅菌メスを使用して、卵巣の表面から約2ミリメートルの立方体の卵巣組織の小片を切り取ります。次に、組織を350マイクロリットルのBouin溶液に室温で2時間浸します。

インキュベーション後、組織を70%エタノールで3回洗浄します。組織を包埋して切片化した後、ヘマトキシリンとエオシンの染色を行い、分析用のデジタル画像を取得します。QuPathなどの適切なソフトウェアを使用してファイルを開きます。

ファイルをQuPathのメインウィンドウにドラッグし、画像タイプを「明視野H&E」に設定します。スケールバーを使用して、表面上皮から1ミリメートルを定義します。楕円ツールをクリックして、毛根に注釈を付けます。

この1ミリメートルの領域内の卵胞の数を、原始成熟段階から一次成熟段階まで数えます。サンプルID、年齢、各スライドの卵胞の数、セクションの厚さ、およびカウントされたNセクションを、Follicle Z-Score Calculator ExcelファイルのFollicle in millimeter cubeという名前のシートに入力します。カウントされた各セクションで卵胞の最大の10%を特定したら、ラインツールをクリックして、卵母細胞膜を通る2本の垂直線を引きます。

「Measure」を選択し、「Show annotation measurements」をクリックして、これらの卵子の平均直径を決定します。長さ (マイクロメートル単位) というラベルの付いた列の下に測定値を記録します。各スライドの最大 10% 卵胞の平均卵子径をマイクロメートル単位で、Follicle Z-Score Calculator Excel ファイルに入力します。

QuPathの画面中央に画像を配置し、ImageJアイコンをクリックします。次に、[スナップショットを ImageJ に送信] を選択します。ImageJ で、ブラシ ツールを使用して境界線から 1 mm の境界線を区切り、[Image]、[Type] の順にクリックし、[8 ビット] を選択します。

次に、線ツールをクリックして、スケールバーに線を引きます。「解析」を選択し、次に「スケールの設定」を選択し、スケールバーに示されている長さを「既知の距離」フィールドに入力して、「OK」をクリックします。次に、[画像]をクリックし、[明るさ/コントラスト]を調整して、[自動]を選択します。次に、[画像]をクリックし、[しきい値]を調整して[自動]を選択します。

ワンドツールをクリックして領域を選択し、Ctrl Mを押します。領域値をFollicle Z-Score CalculatorExcelファイルに入力します。すべてのデータが卵胞Zスコア計算機Excelファイルに集計されたら、同じExcelファイル内のZスコア卵胞/ミリメートルキューブという名前のシートに移動して、卵巣予備能が減少しているかどうかを判断します。子供の卵巣の表面上皮ははっきりと見え、染色手順後、卵巣予備能はその下に存在していました。

卵胞密度は卵巣予備力のZスコアの計算に使用され、Zスコアが負の1.7未満は卵巣予備能の減少を示します。