まず、突然変異体とX134植物の種子を収穫し、水分含有量が約13〜15%に達するまで室温で自然乾燥させます皮むき機を作動させた後、フィーダーに10gの米粒を導入して、グルームシェルを効率的に除去します。皮をむいた米の種子を精米機に移し、機械を60秒間操作して、アリューロン層を排除して精白米を生成します。次に、精米した米をティッシュグラインダーに入れます。
粉砕周波数を60Hzに調整し、グラインダーを15秒間2サイクル運転して米粉を製造します。挽いた米粉をペトリ皿に入れ、37°Cに予熱したオーブンに12時間入れます。次に、2mLの微量遠心チューブに米粉100mgを加え、チューブを軽くたたきます。
180 Lの精製水をチューブに加え、サンプルをウォーターバスで20分間沸騰させます。サンプルが冷えたら、4 mLのAMG含有膵臓アルファアミラーゼをチューブに導入します。次に、ボルテックスオシレーターで内容物を混合し、チューブを37°Cで16時間連続的に攪拌しながらインキュベートします。
次に、4 mLのエタノールを加え、ボルテックスを使用してサンプルを混合します。次に、チューブを1, 500 Gで10分間遠心分離します。上清をデカントした後、2 mLの50%エタノールを加え、続いて6 mLの50%IMSをチューブに加えて混合します。
チューブを遠心分離した後、上清を慎重に注ぎ落とし、チューブを反転させて余分な液体を排出します。チューブを氷浴に入れ、2 mLの2モル水酸化カリウムを加え、サンプルを20分間攪拌してフロックを再懸濁し、レジスタントスターチを溶解します。pH 3.8に調整した1.2モルの酢酸ナトリウム緩衝液を8mLチューブに加え、マグネチックスターラーを使用して混合します。
その後、直ちに0.1mLのAMGを混合物に導入し、十分に混合します。サンプルを50°Cのウォーターバスで30分間インキュベートし、ボルテックスを使用して断続的に混合します。インキュベーション後、チューブを1,500Gで10分間遠心分離します。
次に、0.1mLの上清を新しいガラス管に移します。3 mLのグルコースオキシダーゼペルオキシダーゼ試薬を加え、サンプルを50°Cで20分間インキュベートします。各ブランクサンプル溶液と標準溶液200 Lを96ウェルプレートに慎重にピペットで移します。
ブランク溶液に対する510 nmで各サンプルの吸光度を測定し、式を使用してレジスタントスターチ含有量を計算します。最後に、50gの調理済み米と200mLの水を参加者に提示します。食後、さまざまな時点で静脈血サンプルを採取し、血糖分析を行います。
レジスタントスターチ含有量は、野生型と比較してSBEIIb変異体で5.2%と有意に高かった。準備された米の摂取は、15分と30分でグルコース反応が遅くなり、減少し、それぞれ9.7%と3.7%減少しました。
