まず、Chlorella sorokinianaおよびHaematococcus pluvialisの成長動態を研究するための接種材料を準備します 標準的な実験室の手順に従って、必要な量の無菌培地を準備します。フォトバイオリアクターとフラスコの両方の光源を目的の色スペクトルに設定します。外部光の干渉を防ぐために、両方のシステムを覆います。
日長設定を調整した後、二酸化炭素持続時間をフォトバイオリアクターに接続して、クロレラに12時間二酸化炭素を供給します。次に、培養容器に接種して、開始細胞密度を300,000細胞/ミリリットル、または550ナノメートルで光学密度0.180を達成します。Chlorella sorokinianaの場合は12時間、Haematococcus pluvialisの場合は8時間の間隔で定期的に培養をサンプリングします。
サンプルの40ミリリットルをプラスチック製の円錐形遠心分離チューブに入れます。チューブを3000Gで15°Cで20分間遠心分離します。上清をデカントし、純度90%のアセトン溶液を3ミリリットル加えて細胞を再懸濁し、酸化を防ぐためにアルミホイルで覆われたガラス管に細胞を移し、ボルテックスを使用して混合します。
懸濁したサンプルを氷浴でそれぞれ5分間の2サイクル超音波処理し、サンプルを摂氏4度で16時間休ませます。休ませた後、同じ条件でサンプルを5分間ずつ2サイクル再度超音波処理し、サンプルを3000Gで15°Cで20分間遠心分離します。パスツールピペットを使用して顔料抽出物を分離し、光から保護された別のきれいなチューブに移します。
次に、顔料抽出物を石英セルに入れ、600、647、および664ナノメートルの分光光度計で読み取ります。式を使用してクロロフィル濃度を計算します。Chlorella sorokinianaのクロロフィル含有量は、高二酸化炭素添加、紫色光、高光強度の条件下で、処理4で最も高かった。
主効果プロットは、光強度が二酸化炭素や紫色の光の影響と比較して低いことを示しました。Chlorella sorokinianaでは、実験全体を通じてクロロフィルAとクロロフィルBの一貫した増加が見られ、クロロフィルAは50時間でクロロフィルBを上回りました。50時間後には、Haematococcus pluvialisでクロロフィル濃度の低下が観察され、クロロフィルBは有意に減少しましたが、クロロフィルAは高いままでした。
