OG - PはCONACyTの助成金（CB - 2008から101476）とFRABA（10分の686）によってサポートされていました。 AQ - Hは、国立衛生研究所、ハワードヒューズ医学研究所、ロバートウッドジョンソン財団とメリーランド州の幹細胞財団によってサポートされています。

<ol><li>マウスの手術の前にガラスの針を作る： <ol class="lalpha"><li>マイクロピペットプラーでキャピラリーガラス管を置く。 </li><li>ローカライズされた領域でガラス管を柔らかくするためにガラス管の中央を加熱する。 </li><li>ローカライズされた領域内のガラス管の直径の減少を引き起こすのに十分な初期の距離によってその長手軸に沿ってガラス管を引き伸ばす。 </li><li>それが壊れるまで、ガラス管を伸ばしてください。この方法では、2つの同一のシングルバレルの針が得られる。 </li></ol></li><li>マイクロフォージのガラス針を刺します。 30 °の角度では、ベベルの先端をするのに十分です。 </li><li>各針が正しい内径を持っていることを顕微​​鏡下で確認してください。親水性薬物のほとんどは30〜50μmの内径は、（図1）に最適です。 </li><li>ガラス針の広い端から鉱物油を使用してニードルをいっぱいに。それは、キャピラリーチューブの長さの約50％に達するまで、その鉱物油（MSDS、猫。M7700）は、毛細管現象によって入るしましょう​​。針の広い端を密封するためにプランジャーの周り高真空グリースを（ダウコーニング、猫。05054 - AB）を入れます。 </li><li>針の広い年末までにプランジャーを挿入し、油の小滴をガラス針の先端から出て見えるまでやさしくミネラルオイルを押してください。 </li><li>インジェクターのホルダーにガラスの針を固定します。 </li><li> 2.5パーセントAVERTIN（2,2,2 - トリブロムエタノール+ tert -アミルアルコール、1:1 w / v）を持つマウスを麻酔。 Dosisグラム腹腔内あたり25 -30μlの。 </li><li> 37動物の体温を保つために定位装置℃までのヒーターパッドを入れて</li><li>耳のバーや歯のホルダーを使用して定位装置で、マウスの頭部を置き、固定します。 </li><li>二度目の70％エタノール、0.1％グルコン酸クロルヘキシジンに続く0.1％グルコン酸クロルヘキシジン溶液でマウスのヘッドのクリーニングを行ってください。 </li><li>ランバの頭蓋骨の線にマウスの耳から外科ブレード第15位で皮膚を切開する。 </li><li>それを乾燥し、手術野の皮膚を引き出すために綿のスワップで頭蓋骨を磨く。 </li><li>ブレグマの縫合糸の頂点を指すようにガラス針の先端を使用してください。そこでは、インジェクター（座標&quot;ゼロ&quot;）の初期位置を設定する必要があります。 </li><li>頭蓋骨上の定位装置の&quot;X&quot;と&quot;Y&quot;軸を移動して掘削するポイントを設定します。 </li><li>選択した座標系で非常に慎重に穴をあけます。 Microdrillsと他の金属のツールは、以前は250滅菌処理を行った·ドライガラス玉滅菌器で60秒C（コールパーマー、カタログ番号EW - 10779〜00）。 </li><li>微細な鉗子で慎重に骨の最も深い層を除去し、duramatter膜を（もし漏れある脳脊髄液を参照される）ブレーク。 </li><li>その針が開けた穴を通過できることを確認します。 </li><li>あなたがパラフィルムの小片にそれを注入して配置する薬剤のピペット1μL。 </li><li>頭蓋骨の上にパラフィルムを置く。 </li><li>もし流体がガラス針に上昇していることが顕微鏡下で確認しながら、インジェクターのホイールを回転することによって薬剤を吸い上げる。 </li><li>パラフィルムを外し、ゼロの座標を再設定します。 </li><li>ガラス針の先端が軽く、脳の表面に触れると、ゼロで&quot;Z&quot;の座標を設定するまでホルダー下に、選択された座標に針を移動します。 </li><li>選択された深さで脳実質内にガラスの針を導入する。 </li><li> 〜1 NL /秒の速度で徐々に薬剤を注入する。 </li><li>欲望のボリュームが注入されると、2分間実質への薬物拡散をしましょう​​。その後スムーズにゆっくりと針を取り除くに進んでください。 </li><li>接着剤は、手術創および定位装置から動物を削除し、麻酔の回復のために清潔なベッドを含む予め温めておいたケージに動物を置く。 </li><li>術後鎮痛を提供するために、すべての動物は24時間5 mg / kgを皮下ケトロラクごとに12時間を受け</li></ol>代表的な結果： このプロトコルに従うとき、非常に精密な注入が得られ、非常に狭い針のトラックは、脳損傷を最小限に抑えています。この方式の代表的な結果として、我々は白質の広大1-4の脱髄を生成する脳梁にlysophosphatidylコリン（リゾレシチン）を注入した。ガラス針で生成脳損傷を最小限に抑えるために、我々は、脳梁にリゾレシチンのわずか20 NLを注入したが、同じくらい200以上のボリュームを必要に応じて、NLは、同じ方法で注入することができる。脱髄は、白質の腸管（図2）におけるミエリン塩基性蛋白質の発現の不在によって検出される。 <img src="/files/ftp_upload/2082/2082fig1.jpg" alt="図1" /> 図1。50μmの直径を有するガラス針。二つの短い目盛り間の距離規模で50μmの長さを表します。 <img src="/files/ftp_upload/2082/2082fig2.jpg" alt="図2" /> 脳梁に図2。リゾレシチン注入。脱髄は、ミエリン塩基性タンパク質の発現（点線部分）がないと表示されます。ガラスの針管（矢印）の小さなサイズに注意してください。バー= 100μmの

<ol>
	<li>Menn, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+of+oligodendrocytes+in+the+subventricular+zone+of+the+adult+brain.">Origin of oligodendrocytes in the subventricular zone of the adult brain.</a> J Neurosci. 26, 7907-7918 (2006).</li><li>Gonzalez-Perez, O., Romero-Rodriguez, R., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+Growth+Factor+Induces+the+Progeny+of+Subventricular+Zone+Type+B+Cells+to+Migrate+and+Differentiate+into+Oligodendrocytes.">Epidermal Growth Factor Induces the Progeny of Subventricular Zone Type B Cells to Migrate and Differentiate into Oligodendrocytes.</a> Stem Cells. 27, 2032-2043 (2009).</li><li>Hall, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+aspects+of+remyelination+after+demyelination+produced+by+the+intraneural+injection+of+lysophosphatidyl+choline.">Some aspects of remyelination after demyelination produced by the intraneural injection of lysophosphatidyl choline.</a> J Cell Sci. 13, 461-477 (1973).</li><li>Webster, G. R., Thompson, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observations+on+the+presence+of+lysolecithin+in+nervous+tissues.">Observations on the presence of lysolecithin in nervous tissues.</a> Biochim Biophys Acta. 63, 38-45 (1962).</li><li>Doetsch, F., Caille, I., Lim, D. A., Garc&#237;a-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subventricular+Zone+Astrocytes+Are+Neural+Stem+Cells+in+the+Adult+mammalian+Brain.">Subventricular Zone Astrocytes Are Neural Stem Cells in the Adult mammalian Brain.</a> Cell. 97, 1-20 (1999).</li><li>Doetsch, F., Petreanu, L., Caille, I., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EGF+converts+transit-amplifying+neurogenic+precursors+in+the+adult+brain+into+multipotent+stem+cells.">EGF converts transit-amplifying neurogenic precursors in the adult brain into multipotent stem cells.</a> Neuron. 36, 1021-1034 (2002).</li><li>Baraban, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+of+seizures+by+transplantation+of+cortical+GABAergic+interneuron+precursors+into+Kv1.1+mutant+mice.">Reduction of seizures by transplantation of cortical GABAergic interneuron precursors into Kv1.1 mutant mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 15472-15477 (2009).</li><li>Richardson, R. M., Barbaro, N. M., Alvarez-Buylla, A., Baraban, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developing+cell+transplantation+for+temporal+lobe+epilepsy.">Developing cell transplantation for temporal lobe epilepsy.</a> Neurosurg Focus. 24, E17-E17 (2008).</li><li>Alvarez-Dolado, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+inhibition+modified+by+embryonic+neural+precursors+grafted+into+the+postnatal+brain.">Cortical inhibition modified by embryonic neural precursors grafted into the postnatal brain.</a> J Neurosci. 26, 7380-7389 (2006).</li></ol>

利害の衝突は宣言されません。

方法は、脳に非常に正確な場所に薬物やウイルスベクターのほとんどを提供するために非常に便利ですこのビデオで示した。この技術の主な利点のいくつかは、ターゲットポイント、注射の正確さと脳の病変や消化管の損傷1、2、5、6の小さいサイズの信頼性です。かつて技術はmistargetingの範囲が50μm2、1以下をすべき標準化されています。細胞移植は、より広い、100から150μm?...

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		<div>
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		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Capillary glass tube</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Wiretrol I</td>
<td>5-000-1001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micropipette puller</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Kopf</td>
<td>Model 730</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microforge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>Model 48000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mineral oil</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MSDS</td>
<td>M7700</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>High-vacuum grease</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dow Corning</td>
<td>05054-AB</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Anesthesia: 2.5% Avertin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>2,2,2-tribromoethanol + tert-amyl alcohol, 1:1 w/v</td>
</tr>
<tr>
<td>Heater pad</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mastex</td>
<td>Model 900</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Stereotactic device</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Kopf</td>
<td>Model Kopf-900</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Surgical scalpel blade # 15</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Medi-Cut</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micro driller</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ideal Micro Drill</td>
<td>67-1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fine forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Scientific Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1-&mu;L Micropipette</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Rainin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Parafilm M.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Surgical microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Zeiss</td>
<td>Vasiorkop with Contraves system</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microinjector</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Narishige</td>
<td>Model MO-10</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

targeting of deep brain structures with microinjections for delivery of drugs, viral vectors, or cell transplants

脳実質へMicroinjectionsは薬物、ウイルスベクターまたは細胞移植を実現する重要な手続きです。注射針は、その軌道の間に生成される脳の病変だけでなく、脳が小さいだけでなく、時には複数の注射が必要な場合には特に、マウスの脳内の主要な関心事である。ここでは、大幅に脳の損傷を軽減し、齧歯類の脳に正確なターゲティングが可能な50μmの内腔を持つガラスキャピラリー針を製造する方法を示しています。このメソッドは、少量の配信が可能になります（20〜100 NLから）、出血のリスクを軽減し、脳実質への薬剤の受動拡散を最小限に抑えます。キャピラリーガラス管の異なるサイズを使用して、または針の内腔を変更することにより、物質や細胞のいくつかのタイプを注入することができます。ガラス毛細管とMicroinjectionsはインジェクション技術と小型げっ歯類での最小限の巻き添え被害をターゲティング脳深部に有意な改善を表しています。

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Targeting of Deep Brain Structures with Microinjections for Delivery of Drugs, Viral Vectors, or Cell Transplants

この記事では、50μmのルーメンでガラスキャピラリー針を作成する方法を示しています。この手法は、大幅に、脳の損傷を軽減薬の受動拡散を最小限に抑え、齧歯類の脳に正確なターゲティングが可能になります。

薬の配達のためのMicroinjections、ウイルスベクター、または細胞移植で脳深部構造のターゲティング

Microinjections into the brain parenchyma are important procedures to deliver drugs, viral vectors or cell transplants.  The brain lesion that an ...

targeting-deep-brain-structures-with-microinjections-for-delivery

Research

JoVE Journal

Neuroscience

12.4K ビュー.  University of Colima. この記事では、50μmのルーメンでガラスキャピラリー針を作成する方法を示しています。この手法は、大幅に、脳の損傷を軽減薬の受動拡散を最小限に抑え、齧歯類の脳に正確なターゲティングが可能になります。