OG - P는 CONACyT S 그랜트 (CB - 2008-101476)과 FRABA (10분의 686)에 의해 지원되었다. AQ - H는 건강의 국립 연구소, 하워드 휴즈 의학 연구소의 로버트 우드 존슨 재단과 메릴랜드 줄기 세포 재단에 의해 지원.

<ol><li> 마우스 수술 전에 유리 바늘 만들기 : <ol class="lalpha"><li> micropipette의 풀러의 모세관 유리 튜브를 넣어. </li><li> 지역화된 영역의 유리 튜브를 부드럽게하는 유리 튜브의 가운데를 열. </li><li> 지역화된 영역의 유리 튜브의 직경의 감소를 일으킬 수있는 충분한 초기 거리하여 세로 축을 따라 유리관을 스트레치. </li><li> 그것이 휴식 때까지 유리 튜브를 스트레칭 유지. 이런 방식으로 두 개의 동일한 하나의 배럴의 바늘은 얻을 수 있습니다. </li></ol></li><li> microforge에 유리 바늘을 넣어. 30 ° 각도만큼 베벨 팁을하는 것입니다. </li><li> 각각의 바늘이 정확한 내경을 가지고있는 현미경으로 확인합니다. 친수성 약물의 대부분 30-50 μm의 내경은 (그림 1) 이상적인 제품입니다. </li><li> 유리 바늘의 넓은 끝에서 광유로 바늘을 입력합니다. 그걸로 모세관 튜브의 길이의 ~ 50 %에 도달할 때까지 미네랄 오일 (MSDS, 고양이. M7700) 모세관 현상에 의해 입력하자. 입어 높은 진공 바늘의 넓은 끝을 밀봉하는 플런저 주변 그리스 (다우 코닝, 고양이. 05054 - AB). </li><li> 바늘의 넓은 말까지 플런저를 넣고 기름의 작은 방울이 유리 바늘 끝을 들락날락 때까지 부드럽게 미네랄 오일을 밀어. </li><li> microinjector의 소유자에 유리 바늘을 고정합니다. </li><li> 2.5 % Avertin (2,2,2 - tribromoethanol + tert - 아밀 알코올, 1시 1분 W / V)와 마우스를 마취. Dosis g intraperitoneal 당 25 30μL. </li><li> 37 동물의 체온을 유지하는 stereotactic 장치 ° C.에 히터 패드를 넣어 </li><li> 장소 및 귀 바, 치아 홀더를 사용하여 stereotactic 장치에서 마우스 머리를 확보. </li><li> 두 번째 시간을 70 % 에탄올과 0.1 % Chlorhexidine 글루 콘 산 다음에 0.1 % Chlorhexidine 글루 콘 산 솔루션으로 마우스 머리를 청소하십시오. </li><li> Lamba 스컬 라인에 마우스 귀를에서 수술 블레이드 # 15 피부를 절개. </li><li> 그것을 건조하고 수술 현장에서 피부를 잡아 면봉 스왑으로 두개골을 폴란드어. </li><li> Bregma의 봉합의 정점에서 시점에 유리 바늘의 팁을 사용하십시오. 여기 주입기 (좌표 &quot;제로&quot;)의 초기 위치를 설정해야합니다. </li><li> &quot;X&quot;와 두개골을 통해 stereotactic 장치의 &quot;Y&quot;축을 이동하여 몰락하는 지점을 설정합니다. </li><li> 선택한 좌표에 매우 조심스럽게 구멍을 드릴. Microdrills 및 기타 금속 도구는 이전에 다음 ID 250에 소독을했다 ° 마른 유리 구슬 살균기와 함께 60 초 동안 C (콜 팔머, 고양이. 번호 EW - 10779-00). </li><li> 좋은 포셉 조심스럽게 뼈의 가장 깊은 층을 제거하고 duramatter 막을 (당신이 밖으로 누출 일부 대뇌 척수를 볼 수 있습니다) 휴식과 함께. </li><li> 그 바늘이 뚫고 구멍 갈 수 확인합니다. </li><li> 당신은 parafilm의 작은 조각에 주사하고 데려가고 싶다는 약물의 피펫 1 μl. </li><li> 두개골에 parafilm 놔. </li><li> 당신은 액체가 유리 바늘로 올라간다는 것을 현미경으로 확인하면서, microinjector 휠을 회전하여 약물을 빨아. </li><li> parafilm를 제거하고 제로 좌표를 다시 설정합니다. </li><li> 유리 바늘 끝이 부드럽게 뇌의 표면을 만지 제로에서 &quot;Z&quot;좌표를 설정할 때까지 홀더 아래, 선택한 좌표에 바늘을 이동합니다. </li><li> 선택 깊이에서 뇌 실질에 유리 바늘을 소개합니다. </li><li> 천천히 ~ 1 NL / 초의 속도로 약물을 주사. </li><li> 원하는 볼륨이 분사되면, 2 분 실질에 마약 확산하자. 그런 다음 부드럽게 천천히 바늘을 제거하는 진행합니다. </li><li> 접착제는 수술 상처와 stereotactic 장치에서 동물을 제거하고 마취 복구를 위해 깨끗한 침대를 포함하는 미리 예열 케이지에 동물을 넣어. </li><li> 이후 수술 진통제를 제공하기 위해 모든 동물은 24 H. 5 MG / kg 피하 Ketorolac 매 12 시간을 받았습니다 </li></ol> 대표 결과 : 이 프로토콜을 따라하면, 매우 정확하게 주사는 취득과 매우 좁은 바늘 트랙 뇌 손상을 최소화합니다. 이 방법의 대표적인 결과로, 우리는 흰 물질의 책자 1-4 demyelination를 생산 코퍼스의 callosum에 lysophosphatidyl 콜린 (lysolecithin)을 주입했다. 유리 바늘에 의해 생산되는 뇌 손상을 최소화하기 위해, 우리는 코퍼스의 callosum에 lysolecithin의 20 NL을 주입, 200 NL만큼 필요한 경우에는 높은 볼륨이 동일한 방법으로 주입 수 있습니다. Demyelination은 흰색 물질 책자 (그림 2)에서 myelin 기본 단백질 표현의 부재에 의해 감지됩니다. <img src="/files/ftp_upload/2082/2082fig1.jpg" alt="그림 1" /> 그림 1. 50 μm의 직경 유리 바늘. 이 짧은 거려 사이의 거리규모에 50 μm의 길이를 나타냅니다. <img src="/files/ftp_upload/2082/2082fig2.jpg" alt="그림 2" /> 코퍼스의 callosum 그림 2. Lysolecithin 분사. Demyelination은 myelin 기본 단백질 표현 (점선 영역) 없음으로 표시됩니다. 유리 바늘 트랙트 (화살표)의 작은 크기를합니다. 바 = 100 μm의

<ol>
	<li>Menn, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Origin+of+oligodendrocytes+in+the+subventricular+zone+of+the+adult+brain.">Origin of oligodendrocytes in the subventricular zone of the adult brain.</a> J Neurosci. 26, 7907-7918 (2006).</li><li>Gonzalez-Perez, O., Romero-Rodriguez, R., Soriano-Navarro, M., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Epidermal+Growth+Factor+Induces+the+Progeny+of+Subventricular+Zone+Type+B+Cells+to+Migrate+and+Differentiate+into+Oligodendrocytes.">Epidermal Growth Factor Induces the Progeny of Subventricular Zone Type B Cells to Migrate and Differentiate into Oligodendrocytes.</a> Stem Cells. 27, 2032-2043 (2009).</li><li>Hall, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Some+aspects+of+remyelination+after+demyelination+produced+by+the+intraneural+injection+of+lysophosphatidyl+choline.">Some aspects of remyelination after demyelination produced by the intraneural injection of lysophosphatidyl choline.</a> J Cell Sci. 13, 461-477 (1973).</li><li>Webster, G. R., Thompson, R. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Observations+on+the+presence+of+lysolecithin+in+nervous+tissues.">Observations on the presence of lysolecithin in nervous tissues.</a> Biochim Biophys Acta. 63, 38-45 (1962).</li><li>Doetsch, F., Caille, I., Lim, D. A., Garc&#237;a-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Subventricular+Zone+Astrocytes+Are+Neural+Stem+Cells+in+the+Adult+mammalian+Brain.">Subventricular Zone Astrocytes Are Neural Stem Cells in the Adult mammalian Brain.</a> Cell. 97, 1-20 (1999).</li><li>Doetsch, F., Petreanu, L., Caille, I., Garcia-Verdugo, J. M., Alvarez-Buylla, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=EGF+converts+transit-amplifying+neurogenic+precursors+in+the+adult+brain+into+multipotent+stem+cells.">EGF converts transit-amplifying neurogenic precursors in the adult brain into multipotent stem cells.</a> Neuron. 36, 1021-1034 (2002).</li><li>Baraban, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Reduction+of+seizures+by+transplantation+of+cortical+GABAergic+interneuron+precursors+into+Kv1.1+mutant+mice.">Reduction of seizures by transplantation of cortical GABAergic interneuron precursors into Kv1.1 mutant mice.</a> Proc Natl Acad Sci U S A. 106, 15472-15477 (2009).</li><li>Richardson, R. M., Barbaro, N. M., Alvarez-Buylla, A., Baraban, S. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Developing+cell+transplantation+for+temporal+lobe+epilepsy.">Developing cell transplantation for temporal lobe epilepsy.</a> Neurosurg Focus. 24, E17-E17 (2008).</li><li>Alvarez-Dolado, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cortical+inhibition+modified+by+embryonic+neural+precursors+grafted+into+the+postnatal+brain.">Cortical inhibition modified by embryonic neural precursors grafted into the postnatal brain.</a> J Neurosci. 26, 7380-7389 (2006).</li></ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

방법은 두뇌에 매우 정확한 장소에 약물이나 바이러스 벡터의 대부분을 제공하는 매우 유용합니다이 비디오에서 보여주었다. 이 기술의 주요 장점 중 일부는 표적 지점, 주사의 정확성 및 뇌 병변 및 요로 손상 1, 2, 5, 6의 작은 크기의 신뢰성입니다. 일단 기술이 mistargeting의 범위 표준화되어 있어야 50 μm의 또는 2, 1 이하. 세포 이식은 또한 더 넓은, 100-150 μm의 7-9, 바늘을 ?...

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		<div>
		<table border="1">
		<thead>
		<tr>
		<th>Material Name</th>
		<th>Type</th>
		<th>Company</th>
		<th>Catalogue Number</th>
		<th>Comment</th>
		</tr>
		</thead>
		<tbody>
		
<tr>
<td>Capillary glass tube</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Wiretrol I</td>
<td>5-000-1001</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micropipette puller</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Kopf</td>
<td>Model 730</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microforge</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>World Precision Instruments</td>
<td>Model 48000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Mineral oil</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>MSDS</td>
<td>M7700</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>High-vacuum grease</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Dow Corning</td>
<td>05054-AB</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Anesthesia: 2.5% Avertin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>2,2,2-tribromoethanol + tert-amyl alcohol, 1:1 w/v</td>
</tr>
<tr>
<td>Heater pad</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Mastex</td>
<td>Model 900</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Stereotactic device</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Kopf</td>
<td>Model Kopf-900</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Surgical scalpel blade # 15</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Medi-Cut</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Micro driller</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Ideal Micro Drill</td>
<td>67-1000</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Fine forceps</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Fine Scientific Tools</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>1-&mu;L Micropipette</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Rainin</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Parafilm M.</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Surgical microscope</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Zeiss</td>
<td>Vasiorkop with Contraves system</td>
<td>&nbsp;</td>
<tr>
<td>Microinjector</td>
<td>&nbsp;</td>
<td>Narishige</td>
<td>Model MO-10</td>
<td>&nbsp;</td>		</tbody>
		</table>
		</div>

targeting of deep brain structures with microinjections for delivery of drugs, viral vectors, or cell transplants

뇌 실질에 Microinjections 마약, 바이러스성 벡터 또는 세포 이식을 전달하는 것이 중요 절차입니다. 주사 바늘는 궤도 도중에 생성되는 뇌 병변뿐만 아니라 두뇌가 작은뿐만 아니라 때로는 여러 개의 주사가 필요합니다 특히 마우스 두뇌의 주요 관심사입니다. 우리는 여기서 크게 뇌 손상을 감소하고 쥐 두뇌에 정확한 타겟팅을 수있는 50 μm의 루멘과 유리 모세관 바늘을 생산하는 방법을 보여줍니다. 이 방법은 작은 볼륨의 전달 (20-100 NL에서)는, 출혈 위험을 줄일 수 있도록하고, 뇌 실질 조직에 약물의 수동적 확산을 최소화합니다. 모세관 유리 튜브의 다른 크기를 사용하거나 바늘 루멘을 변경하여, 물질과 세포의 여러 종류의 주입 수 있습니다. 유리 모세관과 Microinjections는 분사 기술과 소형 설치류에 최소한의 피해 타겟팅 깊은 두뇌에 상당한 개선을 나타냅니다.

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Targeting of Deep Brain Structures with Microinjections for Delivery of Drugs, Viral Vectors, or Cell Transplants

이 문서에서는, 우리는 50 μm의 루멘과 유리 모세관 바늘을하는 방법을 보여줍니다. 이 기술은 크게, 뇌 손상을 감소 약물의 수동적 확산을 최소화하고 쥐 두뇌에 정확한 타겟팅을 수 있습니다.

마약, 바이러스성 벡터, 또는 세포 이식 전달 Microinjections 깊은 뇌 구조의 타겟팅

Microinjections into the brain parenchyma are important procedures to deliver drugs, viral vectors or cell transplants.  The brain lesion that an ...

targeting-deep-brain-structures-with-microinjections-for-delivery

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Neuroscience

12.4K 조회수.  University of Colima. 이 문서에서는, 우리는 50 μm의 루멘과 유리 모세관 바늘을하는 방법을 보여줍니다. 이 기술은 크게, 뇌 손상을 감소 약물의 수동적 확산을 최소화하고 쥐 두뇌에 정확한 타겟팅을 수 있습니다.