彼らの実験動物の内視鏡的評価の間に彼らのコラボレーションのためのサラKossak、ミッチェルGuanzon、宋Yeunヤン​​とLi郭嘉、に感謝します。

1。内視鏡システムの設定<ol><li>製造者の指示に従って、マウスを麻酔前に内視鏡システムをセットアップします。このプロトコルの人間のために設計されたビデオ·尿管鏡（ 図1）を使用します。挿入管の外径が9.9 Frの（5.3 mm）で、その遠位端が8.5 Frの（2.8ミリメートル）であり、計装チャネルの内径は6 Frと（1.2 mm）である。 </li><li>内視鏡の使用は病気の伝染にリンクされていないが[9]、胞子を形成する微生物を扱う場合、70％エタノール10または適切な技術を持つ内視鏡やレンズを消毒。静菌無菌潤滑剤と非スクラッチは、内視鏡の先端部を飽和させるために組織を拭いて準備します。 </li><li>計装チャンネルの上部に空気の全3ミリリットルの注射器（または適切なCO 2の混合ガス）を取り付けます。 </li><li>電源を入れ、通常の白色光のホワイトバランスを設定して、適用可能なだけでなく、狭帯域光観察（NBI）モード。それは特徴的な異常な血管新生11を持っている潰瘍性及び腫瘍性病変を含む粘膜の微細な血管構造を、強調しているように2001年以降、NBIは画像診断上の利点を提供してきました。 NBI-フィルタモードでは、ヘモグロビンを有する構造を強調して390から445 nmおよび530から550ナノメートルに捕捉された光の波長を制限します。 </li><li>あなたの調査結果を記録するために、評価スコアリングフォーム（ 図2）を印刷。 （セクション6.1を参照）試験前予想される正常およびNBI画像（ 図3A）と定義し、各基準の等級に慣れる。 </li><li>必要に応じて、色素内のためにリン酸緩衝生理食塩水（PBS）での着色剤ベースのソリューションを用意してください。色素内視鏡検査では、検査は、粘膜の変化を強調するために造影剤として染料を用いて行われる。メチレンブルー（0.1％）と、インジゴカルミン（0.1％）ソリューション（ 図3B）を使用します。ノートそのメチレンブルー基を酸化するアミノ酸残基の、間接的な架橋、および試料分析を妨げる可能性DNA分解12を生成することができる酸化還元剤である。 </li></ol> 2。マウスの全身麻酔<ol><li>麻酔薬および投与経路を選択してください。免疫系と薬や研究目的の潜在的な干渉に関する動物資源施設や施設内動物管理使用委員会（IACUC）から獣医師に相談してください。一部の薬は、げっ歯類13を含む、動物においてサイトカインプロファイルの発現に影響を及ぼし得る。適切なコントロールと一緒に、生存内視鏡検査用の端末手順やイソフルランのための注射ブロモエタノールを使用してください。 </li><li>誘導のために、0.2〜0.5リットル/分の速度で100％酸素でイソフルランの4〜5％の管理、メンテナンスのために百分の0.5から2を使用しています。このプロトコルは、すべての動物には適していません。貴施設の獣医師に相談してください適切な指示と訓練のため。動物福祉のための最高水準を達成するために、関連する動物実験委員会の勧告に従うこと。マウスが完全に麻酔をかけている場合ことを確認してください。 </li><li> 「ストラップ」実験室用接着テープを用いて背側又は腹側位置に支持面テーブルに麻酔したマウス。あなたの内視鏡画面上の解剖学的向きに注意してください。その下肢と尾を固定します。テープのバンドはまた、人工呼吸器から離れて移動するのを防止するが、胸郭呼吸の動きを規制回避するために胸部上に配置することができる。 </li></ol> 3。詳細な内視鏡検査<ol><li>肛門からスコープを進め、その後、直腸に内視鏡を挿入する前に肛門周囲病変を探してください。 </li><li>コー​​ト無菌外科潤滑剤を内視鏡。 CCD（電荷結合素子）センサーの表面被覆しないようにしてください。 </li><li>内視鏡を挿入し、録画を開始します。撮影した動画は、Mに便利です検査後、必要に応じて内視鏡検査のeticulous評価。粘膜/腸への刺激を最小限にするために、時間の最小限の長さで内視鏡検査を行うようにしてください。 </li><li>ゆっくりと腸の壁を離れて設定するために注射器を用いて空気を適用します。マウスのサイズによっては、空気1〜2mlのを使用しています。過剰な送気を避けるため、それは、麻酔したマウスの呼吸困難や死を引き起こす可能性があります。 </li><li>あなたは空気やスコープの穏やかな回転に道を開く、前方視鏡を進める。あなたが腸管腔が表示されない場合は、内視鏡を進めないでください。ミシン目または結腸/直腸裂傷（&lt;8月10日週齢）特に若いマウスでは、この段階で発生する可能性があります。必要に応じて写真を撮る。 </li><li>スコープが進むと（定義された天然に存在する粘膜出血は外傷性内視鏡検査に関連付けられていない）出血自発があるかどうか、評価します。内視鏡は直腸および結腸に入るときに自然出血を観察することができる。 </li><li>として結腸壁の透明性をSESS。透明度は、結腸および周囲の他の内臓（ 図4）の壁内に血管を視覚化する能力として定義される。範囲の穏やかな運動は、（フォワード、バック、時計回り、反時計回りに）血管が他の内臓の文脈で見ることができるかどうかを決定するのに役立ちます。腸間膜脂肪組織にも見ることができる。骨盤腔の内部直腸は腹腔内の結腸壁よりも小さい透明表示された場合は注意してください。 </li><li>局所性病変（浮腫エリア、びらん、潰瘍、腫瘍塊）の種類と数を決定するために検査します。これは、結腸の炎症スコアと開発されてきた小数識別子を使用してスコアリング状に記録される。 </li><li>コロンは、近位結腸に尾側に屈曲する領域が到達すると、徐々に内視鏡を撤回した後、破砕性粘膜による起こる出血接点（の存在を探す内視鏡）は、進行性または除去される。これは意図的に、大腸表面をこすりする必要はありません。健康的な大腸粘膜は、適切な内視鏡検査後に出血していません。 </li></ol> 4。生検<ol><li>生検が必要な場合、計測専用の内視鏡管路を介して生検鉗子を挿入する。腸管穿孔を防ぐために、内視鏡画面上の鉗子の進歩を監視します。 </li><li>約60〜80℃のカップにカップの角度に鉗子の生検カップを開き、関心のある領域にそれらを指示。過度に開かれた鉗子や圧力は健康的な透明腸壁の生検によって誘発される穿孔、その結果腸組織の余分な層を把握することがあります。穿孔が発生した場合は、動物実験委員会の勧告に従って麻酔中の動物を安楽死させる。穿孔は内毒素血症や腹​​膜炎につながる。 </li><li>生検カップを閉じ、閉じた鉗子を維持しながら、それらを引き出します。 </li><li>レモ組織や鉗子に優しいソリューションで組織を洗い流すことによって鉗子から標本を見る。 RNAは、後にし、PBS、共通のワーキングソリューションです。必要に応じて、サンプルを取り除くために、針を使用しています。鉗子カップを侵食やエッジをカットすることは避けてください。 </li></ol> 5。麻酔からの回復<ol><li>それが回復するまで検査が終了すると、マウスに暖かい環境を提供する。電灯、または37℃の温パッドセットのいずれかを使用過熱を防ぐため、周辺血管拡張は、動物の回復を損なう。完全に回復するまで、密接にマウスを監視します。 </li></ol> 6。進識別子を持つ大腸の健康の総合内視鏡スコアリングシステム<ol><li>のために：（パラメータの定義、およびプロトコル進加重スコアリングシステムを使用したマウス大腸の炎症および腫瘍の内視鏡アセスメント ）スコアリングフォーム（ 図2）、以下のパラメータ定義を使用偏りのない評価と詳細な記録保存のためのガイドラインとしての例や、オプションの「遠位近位内視鏡大腸炎スコアリングシステム」（D-PECS）。 </li><li>スコアリングシステムフォーム（ 図2）に記載されている大腸の炎症の4つのパラメータがスコア。細心の注意を払って肛門周囲、腸の透明性、出血、腸（存在する場合）のタイプ、および局所性病変（びらん、潰瘍性、および/または腫瘍）の存在と量を評価する。 </li><li>研究目的のために腫瘍を評価する場合、数量、位置、および大きさを調べ、結腸マップおよびスコアリング状の棒グラフを使用して記載している。得られたスコアや病変の数（該当する）の数値の和が背景大腸の炎症、病変の最も優勢種類、病変の数を決定します。 </li></ol>

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E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+digital+flexible+ureteroscope:+in+vitro+assessment+of+optical+characteristics.">The digital flexible ureteroscope: in vitro assessment of optical characteristics.</a> J. Endourol. 25, 519-522 (2011).</li><li>Machida, H., Sano, Y., Hamamoto, Y., Muto, M., Kozu, T., Tajiri, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Narrow-band+imaging+in+the+diagnosis+of+colorectal+mucosal+lesions:+a+pilot+study.">Narrow-band imaging in the diagnosis of colorectal mucosal lesions: a pilot study.</a> Endoscopy. 36, 1094-1098 (2004).</li><li>Dohoo, I., Martin, W., Stryhn, H., McPike, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cohort+studies.">Cohort studies.</a> Veterinary Epidemiologic Research. , 151-162 (2003).</li><li>Yiou, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathophysiology+of+pelvic+floor+disorders:+evidence+from+a+histomorphologic+study+of+the+perineum+and+a+mouse+model+of+rectal+prolapse.">The pathophysiology of pelvic floor disorders: evidence from a histomorphologic study of the perineum and a mouse model of rectal prolapse.</a> J. Anat. 199, 599-607 (2001).</li></ol>

財務、開示された利益相反がない。

マウスでの内視鏡技術の改良やトラブルシューティングに関するいくつかの考慮事項があります。柔軟な内視鏡検査の使用中に習得する必要がある手順の重要な側面は、アンギュレーションとトルクコントロールの調整で腹部膨満とマウスの呼吸障害を防止するために必要空気量の調整、およびビューコントロールのマイナー技術的な側面を含んで。トルク制御は、腸穿孔の危険性を最小限?...

マウス内視鏡検査は、十年以上1-3有用な研究ツールとして行われている。いくつかはまた、軟性S状結腸鏡検査を使用していたが、現在までに、マウス内視鏡検査を採用するほとんどの研究は、硬性内視鏡を使用している。マウスの内視鏡検査は、すぐに結果を提供し、腸の正常、炎症の重症度、並びに体重減少、下痢、および組織のような間接的な尺度、（病変が斑状である場合、最適以下である）と比較して、腫瘍進行の程度をより客観的推定、一方大腸の全体的な健康についての洞察を提供しています。安楽死させなければとコロンは、分析1のために収穫されるために、動物を必要とする伝統的な組織学的検査とは対照的に、最も顕著なのは、内視鏡検査は、時間をかけて実験動物モデルを繰り返し評価を可能にする。これらの利点にもかかわらず、マウスの内視鏡技術の使用は普及しておらず、implementatiための標準化されたプロトコルの欠如によって制限される上および病理学的所見のスコア化。適切に実装され、マウスの内視鏡検査は、さらに我々の理解や炎症性腸疾患、大腸炎、および結腸直腸腫瘍を含む複数の慢性胃腸疾患状態の動物モデルの特徴付けを容易にするための大きな可能性を秘めています。 ネズミの内視鏡技術の有用性は、標準化された審査手続の存在と腸の異常のための一貫性のある、非冗長、かつ信頼性のスコアリングシステムを必要とし、その再現性と客観性、にかかって。大腸4-6の内視鏡的評価のためだけでなく、マウスでの大腸腫瘍は4,7,8のための少なくとも3わかりやすいスコアリングシステムが発表されている。しかし、これらの報告されたアプローチやスコアリングシステムは、研究間で容易に比較することはできません。多くの場合、病変の分類のために使用される基準の明確な定義は存在せず、基準が与えられたとき、それらは広く変化。また、大腸腫瘍、単一の測定ツールに同時に発生し、結果にインタラクティブな効果を持つことができる最も一般的な結腸病変の2、両方の評価を統合しないと報告スコアリングシステムは存在しない。最後に、大腸炎のために存在する内視鏡的スコアリングシステムは、多くの場合、限られた差別を伴う炎症のカテゴリーがある（ すなわち 。短整数スケール、多くの場合、1〜4の上の狭いスコアリングオプション）が正しく、疾患の進行のシナリオを表しており、パラメトリック統計解析の使用を可能にする。 本論文では、マウスの大腸炎および結腸腫瘍の重症度を評価し、肛門周囲、直腸、および遠位結腸の解剖学的評価にこの技術を採用するための標準化されたプロトコルを記述するための軟性内視鏡の使用を記載している。私たちは、外傷や画像アーティファクトを最小限に抑えるために、内視鏡検査の際に効果的なトラブルシューティングを説明し、我々は再現性のスコアリングシステムを説明検証公表された臨床パラメータに基づいて。スコアリングシステムは、（特定の診断値との調査結果を強調するために12の炎症、腫瘍のマッピングの可能性等級とプロットオプション、および新規の小数単位系（すなわち、小数の識別子）との差別の高いレベルを使用して、腸の炎症や腫瘍の両方の評価を統合すなわち腫瘍発生、内視鏡検査などの際の合併症）。小数識別子の使用は、さらに下流の分析に関連するデータセットの迅速な追跡を可能にする。最後に、我々は大腸炎および大腸炎関連癌（デキストラン硫酸ナトリウム（DSS）誘発性大腸炎、 クロストリジウム·ディフィシル感染症、及びアゾキシメタン/ DSS誘発結腸癌）の複数のマウスモデルにおいてスコアリングシステムの信頼性と妥当性テストを実行します。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="696">
	<colgroup>
		<col />
		<col />
		<col />
		<col />
	</colgroup>
	<tbody>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Isoflurane, USP</td>
			<td style="width:160px;">Webster Veterinary&#160;</td>
			<td style="width:217px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:240px;">Surgical lubricant</td>
			<td style="width:160px;">Savage laboratories</td>
			<td style="width:217px;">surgilube, 0281-0205-45</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:240px;">Phosphate Buffered Saline</td>
			<td style="width:160px;">Thermo Scientific&#160;</td>
			<td style="width:217px;">SH30256</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:240px;">RNAlater</td>
			<td style="width:160px;">Ambion</td>
			<td style="width:217px;">AM7021</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:240px;">Methylene Blue 1% Aqueous Solution</td>
			<td style="width:160px;">Fisher Science Education</td>
			<td style="width:217px;">S96393</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;width:240px;"></td>
			<td style="width:160px;"></td>
			<td style="width:217px;"></td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Flexible digital ureteroscope</td>
			<td style="width:160px;">Olympus America</td>
			<td style="width:217px;">URF-V</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Video system center</td>
			<td style="width:160px;">Olympus America</td>
			<td style="width:217px;">VISERA Pro OTV-S7 Pro</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Xenon light source</td>
			<td style="width:160px;">Olympus America</td>
			<td style="width:217px;">VISERA Pro CLV-S40 Pro</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Video recorder</td>
			<td style="width:160px;">MediCapture, Inc.</td>
			<td style="width:217px;">MediCap USB200</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Flexible biopsy cup forceps</td>
			<td style="width:160px;">Olympus America</td>
			<td style="width:217px;">FBC-3115</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:240px;">Anesthesia machine</td>
			<td style="width:160px;">Euthanex Corporation</td>
			<td style="width:217px;">EZ-7000 Classic System</td>
			<td style="width:79px;"></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

flexible colonoscopy in mice to evaluate the severity of colitis and colorectal tumors using a validated endoscopic scoring system

研究目的のための現代的な内視鏡検査の使用が大幅に胃腸病態の我々の理解を促進してきた。特に、実験的内視鏡検査は、慢性炎症性腸疾患の機構および結腸直腸癌の進行を評価するもののような単一の実験動物で繰り返し評価を必要とする研究のための非常に有用であった。ただし、研究間で使用されている方法は、非常に多様である。少なくとも3の内視鏡スコアリングシステムは、マウス大腸炎のために出版され、結腸直腸腫瘍の評価のためのプロトコルが付随大腸の炎症の存在に対処するために失敗した公開されている。この研究は同時に、炎症や腫瘍の両方の評価を統合し、再現性の内視鏡スコアリングシステムを開発し、検証します。肛門周囲の知見に基づいて、大腸の炎症の程度や重症度の1）評価（、WALの透明性：この新規なスコアリングシステムは、3つの主要コンポーネントがありますL、粘膜出血、および局所性病変）、2）腫瘍病変（グリッドマップとバーグラフ）と、観察された病変の割り当てられたカテゴリでは、小数点単位に基づいて病理学的研究の関連性による臨床例の3）数値的なソートを定量的に記録し、内視鏡の合併症（小数点識別子）。ここに提示された映像や原稿は、近位の内視鏡大腸炎（D-PECSから遠位を区別するためのシステムオプションを指定して、研究者は十分に検証され、再現性の高い内視鏡の方法論を用いて、独自の実験用マウスを獲得できるようにするために、動物実験委員会が承認したプロトコルに従って、調製した）。

この研究で提示されたプロトコル、画像はオリンパスURF-V軟性内視鏡14及びNBI 11,15を用いて調製した。ビデオ画像は、MPEG-2形式とJPG、TIF、PNG、または標準のUSBフラッシュポータブルメモリへの転送可能、最大1280×1024ピクセルと、DICOM形式の画像で保存された。 NBIは、ヘモグロビン含有組織の視覚的なコントラストを向上させます。通常の光と、NBIイメージングは、大腸粘膜の?...

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Flexible Colonoscopy in Mice to Evaluate the Severity of Colitis and Colorectal Tumors Using a Validated Endoscopic Scoring System

過去数年間、新世代内視鏡は、ネズミ大腸炎および結腸直腸腫瘍を評価するための重要な診断研究助剤として浮上している。私たちはここに、マウスにおける炎症と大腸腫瘍の内視鏡的な評価だけでなく、大腸炎および大腸腫瘍の内視鏡的重症度を記録するために小数の識別子を使用して新たなスコアリングシステムのための詳細なプロトコルを提示する。

検証済みの内視鏡スコアリングシステムを使用して、大腸炎および結腸直腸腫瘍の重症度を評価するためにマウスでの柔軟な大腸内視鏡検査

The use of modern endoscopy for research purposes has greatly facilitated our understanding of gastrointestinal pathologies. In particular, experimental ...

flexible-colonoscopy-mice-to-evaluate-severity-colitis-colorectal

Research

JoVE Journal

Medicine

31.5K ビュー.  Case Western Reserve University School of Medicine, Cleveland. 過去数年間、新世代内視鏡は、ネズミ大腸炎および結腸直腸腫瘍を評価するための重要な診断研究助剤として浮上している。私たちはここに、マウスにおける炎症と大腸腫瘍の内視鏡的な評価だけでなく、大腸炎および大腸腫瘍の内視鏡的重症度を記録するために小数の識別子を使用して新たなスコアリングシステムのための詳細なプロトコルを提示す?...

ビデオ: Flexible Colonoscopy in Mice to Evaluate the Severity of Colitis and Colorectal Tumors Using a Validated Endoscopic Scoring System

Establishment and Propagation of Human Retinoblastoma Tumors in Immune Deficient Mice

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited time. These cultured tumorspheres may exhibit markedly different cellular phenotypes when compared to the original tumors. Demonstration that cultured cells have the capability of forming new tumors is important to ensure that cultured cells model the biology of the original tumor. 
Here we present a protocol for propagating human retinoblastoma tumors in vivo using Rag2-/- immune deficient mice. Cultured human retinoblastoma tumorspheres of low passage or cells obtained from freshly harvested human retinoblastoma tumors injected directly into the vitreous cavity of murine eyes form tumors within 2-4 weeks. These tumors can be harvested and either further passaged into murine eyes in vivo or grown as tumorspheres in vitro. Propagation has been successfully carried out for at least three passages thus establishing a continuing source of human retinoblastoma tissue for further experimentation. 
Wesley S. Bond and Lalita Wadhwa are co-first authors.

A method is described to propagate human retinoblastoma tumors in mice. Tumor cells are directly injected into the eyes of immune deficient mice. Secondary tumors have been successfully established using both cells directly harvested from human tumors and cultured tumorspheres.

免疫不全マウスにおけるヒト網膜芽細胞腫の腫瘍の確立と伝播

Culturing retinoblastoma tumor cells in defined stem cell media gives rise to primary tumorspheres that can be grown and maintained for only a limited ...

医学

Use of Animal Model of Sepsis to Evaluate Novel Herbal Therapies

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several techniques, including infusion of exogenous bacterial toxin (endotoxemia) or bacteria (bacteremia), as well as surgical perforation of the cecum by cecal ligation and puncture (CLP)1-3. CLP allows bacteria spillage and fecal contamination of the peritoneal cavity, mimicking the human clinical disease of perforated appendicitis or diverticulitis. The severity of sepsis, as reflected by the eventual mortality rates, can be controlled surgically by varying the size of the needle used for cecal puncture2. In animals, CLP induces similar, biphasic hemodynamic cardiovascular, metabolic, and immunological responses as observed during the clinical course of human sepsis3. Thus, the CLP model is considered as one of the most clinically relevant models for experimental sepsis1-3.
Various animal models have been used to elucidate the intricate mechanisms underlying the pathogenesis of experimental sepsis. The lethal consequence of sepsis is attributable partly to an excessive accumulation of early cytokines (such as TNF, IL-1 and IFN-&gamma;)4-6 and late proinflammatory mediators (e.g., HMGB1)7. Compared with early proinflammatory cytokines, late-acting mediators have a wider therapeutic window for clinical applications. For instance, delayed administration of HMGB1-neutralizing antibodies beginning 24 hours after CLP, still rescued mice from lethality8,9, establishing HMGB1 as a late mediator of lethal sepsis. The discovery of HMGB1 as a late-acting mediator has initiated a new field of investigation for the development of sepsis therapies using Traditional Chinese Herbal Medicine. In this paper, we describe a procedure of CLP-induced sepsis, and its usage in screening herbal medicine for HMGB1-targeting therapies.

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection, and can be simulated by a surgical technique termed cecal ligation and puncture (CLP). Here we describe a method to use CLP-induced animal model to screen medicinal herbs for therapeutic agents.

新しいハーブ治療法を評価するために敗血症の動物モデルの使用

Sepsis refers to a systemic inflammatory response syndrome resulting from a microbial infection. It has been routinely simulated in animals by several ...

Non-invasive Assessment of the Efficacy of New Therapeutics for Intestinal Pathologies Using Serial Endoscopic Imaging of Live Mice

Animal models of inflammatory bowel disease (IBD) and colorectal cancer (CRC) have provided significant insight into the cell intrinsic and extrinsic mechanisms that contribute to the onset and progression of intestinal diseases. The identification of new molecules that promote these pathologies has led to a flurry of activity focused on the development of potential new therapies to inhibit their function. As a result, various pre-clinical mouse models with an intact immune system and stromal microenvironment are now heavily used. Here we describe three experimental protocols to test the efficacy of new therapeutics in pre-clinical models of (1) acute mucosal damage, (2) chronic colitis and/or colitis-associated colon cancer, and (3) sporadic colorectal cancer. We also outline procedures for serial endoscopic examination that can be used to document the therapeutic response of an individual tumor and to monitor the health of individual mice. These protocols provide complementary experimental platforms to test the effectiveness of therapeutic compounds shown to be well tolerated by mice.

We describe methods for longitudinal monitoring of the efficacy of therapeutics for the treatment of colonic pathologies in mice using a rigid endoscope. This protocol can be readily used for the characterization of the therapeutic response of an individual tumor in live mice and also for monitoring potential disease relapse.

生きたマウスのシリアル内視鏡イメージングを使用して、腸の異常のための新しい治療の有効性の非侵襲的評価

Animal models of inflammatory bowel disease (IBD) and colorectal cancer (CRC) have provided significant insight into the cell intrinsic and extrinsic ...

Dry Powder and Nebulized Aerosol Inhalation of Pharmaceuticals Delivered to Mice Using a Nose-only Exposure System

Obstructive respiratory diseases like asthma and chronic obstructive pulmonary disease (COPD) are currently treated by inhaled anti-inflammatory and bronchodilator drugs. Despite the availability of multiple treatments, both diseases are growing public health concerns. The majority of asthma patients are well controlled on current inhaled therapies but a substantial number of patients with severe asthma are not. Asthma affects an estimated 300 million people worldwide and approximately 20 percent have a severe form of the disease. In contrast to asthma, there are few effective therapies for COPD. An estimated 10% of the population has COPD and the trend in death rates is increasing for COPD while decreasing for other major diseases. Although developing drugs for inhaled delivery is challenging, the nose-only inhalation unit enables direct delivery of novel drugs to the lung of rodents for pre-clinical efficacy and safety/toxicology studies. Inhaled drug delivery has multiple advantages for respiratory diseases, where high concentration in the lung improves efficacy and minimizes systemic side effects. Inhaled corticosteroids and bronchodilators benefit from these advantages and inhaled delivery may also hold potential for future biologic therapies. The inhalation unit described herein can generate, sample for characterization, and uniformly deposit a drug aerosol in the lungs of rodents. This enables the pre-clinical determination of the efficacy and safety of drug doses deposited in the lungs of rodents, key data required before initiating clinical development.

The inhalation unit described herein can generate, sample for characterization, and uniformly deposit a drug aerosol in the lungs of rodents. This enables the pre-clinical determination of the efficacy and safety of drug doses deposited in the lungs; key data enabling clinical inhaled drug development.

乾燥粉末および医薬品の霧状エアロゾルを吸入すると、鼻のみの露光装置を用いてマウスに配信します

Obstructive respiratory diseases like asthma and chronic obstructive pulmonary disease (COPD) are currently treated by inhaled anti-inflammatory and ...

Taste Exam: A Brief and Validated Test

The emerging importance of taste in medicine and biomedical research, and new knowledge about its genetic underpinnings, has motivated us to supplement classic taste-testing methods in two ways. First, we explain how to do a brief assessment of the mouth, including the tongue, to ensure that taste papillae are present and to note evidence of relevant disease. Second, we draw on genetics to validate taste test data by comparing reports of perceived bitterness intensity and inborn receptor genotypes. Discordance between objective measures of genotype and subjective reports of taste experience can identify data collection errors, distracted subjects or those who have not understood or followed instructions. Our expectation is that fast and valid taste tests may persuade researchers and clinicians to assess taste regularly, making taste testing as common as testing for hearing and vision. Finally, because many tissues of the body express taste receptors, taste responses may provide a proxy for tissue sensitivity elsewhere in the body and, thereby, serve as a rapid, point-of-care test to guide diagnosis and a research tool to evaluate taste receptor protein function.

This protocol measures human taste responses and includes a brief anatomical assessment, a short taste test, and a validation method using the subject&#39;s reported sensation and taste receptor genotype.

味試験: 検証して簡単なテスト

The emerging importance of taste in medicine and biomedical research, and new knowledge about its genetic underpinnings, has motivated us to supplement ...

The Pilocarpine Model of Temporal Lobe Epilepsy and EEG Monitoring Using Radiotelemetry System in Mice

Temporal lobe epilepsy (TLE) is a common neurological disorder in adulthood. For translational studies of chronic epilepsy, pilocarpine-induced status epilepticus (SE) is frequently selected to recapitulate spontaneous recurrent seizures (SRS). Here we present a protocol of SE induction by intraperitoneal (i.p.) injection of pilocarpine and monitoring of chronic recurring seizures in live animals using a wireless telemetry video and electroencephalogram (EEG) system. We demonstrated notable behavioral changes that need attention after pilocarpine injection and their correlation with hippocampal neuronal loss at 7 days and 6 weeks post-pilocarpine. We also describe the experimental procedures of electrode implantation for video and EEG recording, and analysis of the frequency and duration of chronic recurrent seizures. Finally, we discuss the possible reasons why the expected results are not achieved in each case. This provides a basic overview of modeling chronic epilepsy in mice and guidelines for troubleshooting. We believe this protocol can serve as a baseline for suitable models of chronic epilepsy and epileptogenesis.

This manuscript describes a method of inducing status epilepticus by systemic pilocarpine injection and of monitoring spontaneous recurrent seizures in live animals using a wireless telemetry video and electroencephalogram system. This protocol can be utilized for studying the pathophysiologic mechanisms of chronic epilepsy, epileptogenesis, and acute seizures.

側頭葉てんかんと脳波監視テレメーター システムを使用してマウスのピロカルピン モデル

Temporal lobe epilepsy (TLE) is a common neurological disorder in adulthood. For translational studies of chronic epilepsy, pilocarpine-induced status ...

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a diverting enterostomy. The etiology of this disease remains ill-defined but appears to differ from that of classical inflammatory bowel diseases such as Crohn's disease and ulcerative colitis. Research aimed to decipher the pathophysiological mechanisms leading to the development of this disease has been severely hampered by the lack of an appropriate murine model. This protocol generates a murine model of DC that facilitates the study of the immune system's role and its interaction with the microbiome in the development of DC. In this model using C57BL/6 animals, distal parts of the colon are excluded from the fecal stream by creating a distal colostomy, triggering the development of mild to moderate inflammation in the excluded bowel segments and reproducing the hallmark lesions of human DC with a moderate systemic inflammatory response. In contrast to the rat model, a large number of genetically-modified murine models on the C57BL/6 background are available. The combination of these animals with our model allows the potential roles of individual cytokines, chemokines, or receptors of bioactive molecules (e.g., interleukin (IL)-17; IL-10, chemokine CXCL13, chemokine receptors CXCR5 and CCR7, and the sphingosine-1-phosphate receptor 4) to be assessed in the pathogenesis of DC. The availability of congenic mouse strains on the C57BL/6 background largely facilitates transfer experiments to establish the roles of distinct cell types involved in the etiology of DC. Finally, the model offers the opportunity to assess the influences of local interventions (e.g., modification of the local microbiome or local anti-inflammatory therapy) on mucosal immunity in affected and non-affected bowel segments and the on systemic immune homeostasis.

Murine distal colostomy provides a murine model for human diversion colitis, a predominantly lymphocytic colitis in colon segment excluded from the fecal stream.

マウスの遠位人工肛門、転用 c57bl/6 マウス大腸炎の新たなモデル

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

Using a Knee Arthrometer to Evaluate Tissue-specific Contributions to Knee Flexion Contracture in the Rat

Normal knee range of motion (ROM) is critical to well-being and allows one to perform basic activities such as walking, climbing stairs and sitting. Lost ROM is called a joint contracture and results in increased morbidity. Due to the difficulty of reversing established knee contractures, early detection is important, and hence, knowing risk factors for their development is essential. The rat represents a good model with which the effect of an intervention can be studied due to the similarity of rat knee anatomy to that of humans, the rat's ability to tolerate long durations of knee immobilization in flexion, and because mechanical data can be correlated with histologic and biochemical analysis of knee tissue.
Using an automated arthrometer, we demonstrate a validated, precise, reproducible, user-independent method of measuring the extension ROM of the rat knee joint at specific torques. This arthrometer can be used to determine the effects of interventions on knee joint ROM in the rat.

The goal of the protocol is to measure the extension range of motion of the rat knee. The effects of various diseases that increase the stiffness of the knee joint and the effectiveness of treatments can be quantified.

膝 Arthrometer を使用してラットの膝関節屈曲拘縮への組織固有の貢献を評価するには

Normal knee range of motion (ROM) is critical to well-being and allows one to perform basic activities such as walking, climbing stairs and sitting. Lost ...

Murine Appendectomy Model of Chronic Colitis Associated Colorectal Cancer by Precise Localization of Caecal Patch

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal cancer, inflammatory bowel disease, and Parkinson&#8217;s disease. To study the function of the appendix, a gut disease-associated murine appendectomy model has been established and its step-by-step protocol is described here. This report introduces a facile protocol for caecal patch removal in mice followed by the chemical induction of chronic colitis-associated colorectal cancer using a combination of dextran sulfate sodium (DSS) and azoxymethane (AOM). IgA specific cells and IgA concentration were significantly reduced upon removal of the caecal patch in male C57BL/6 mice&#160;compared to those in the sham group. Simultaneously administering 2% DSS and AOM resulted in nearly 80% mice survival in both sham and appendectomy groups without significant body weight loss. Histological results confirmed colonic inflammation and different degrees of adenocarcinoma. This model can be used for the study of the functional role of the appendix in maintaining gut microbiota homeostasis and pathogenesis of gut colitis and malignancies, as well as for the potential development of drug targeting therapies.

The presented protocol describes a facile surgical removal of the appendix (caecal patch) in a mouse followed by the induction of inflammatory bowel disease-associated colorectal cancer. This murine appendectomy model enables investigation of the biological role of the appendix in the pathogenesis of human gastrointestinal disease.

慢性大腸炎関連大腸癌のマウス虫垂切除モデル、ケーカルパッチの正確な局在化

The human appendix has been recently implicated to play important biological roles in the pathogenesis of various complex diseases, such as colorectal ...

Establishing In Situ Closed Circuit Perfusion of Lower Abdominal Organs and Hind Limbs in Mice

Ex vivo perfusion is an important physiological tool to study the function of isolated organs (e.g. liver, kidneys). At the same time, due to the small size of mouse organs, ex vivo perfusion of bone, bladder, skin, prostate, and reproductive organs is challenging or not feasible. Here, we report for the first time an in situ lower body perfusion circuit in mice that includes the above tissues, but bypasses the main clearance organs (kidney, liver, and spleen). The circuit is established by cannulating the abdominal aorta and inferior vena cava above the iliac artery and vein and cauterizing peripheral blood vessels. Perfusion is performed via a peristaltic pump with perfusate flow maintained for up to 2 h. In situ staining with fluorescent lectin and Hoechst solution confirmed that the microvasculature was successfully perfused. This mouse model can be a very useful tool for studying pathological processes as well as mechanisms of drug delivery, migration/metastasis of circulating tumor cells into/from the tumor, and interactions of immune system with perfused organs and tissues.

A protocol is described for in situ perfusion of the mouse lower body, including the bladder, the prostate, sex organs, bone, muscle and foot skin.

マウスにおける下腹部および後肢の脳閉回路灌流における確立

Ex vivo perfusion is an important physiological tool to study the function of isolated organs (e.g. liver, kidneys). At the same time, due to the small ...