This work was supported by the KU Leuven PF &#8216;IMIR&#8217;, the FWO Research community on biology and ecology of bacterial and fungal biofilms (FWO: WO.026.11N) and by the FWO project G.0804.11. SK gratefully acknowledges KU Leuven for the PDMK 11/089 fellowship and FWO for the postdoctoral fellowship. We are grateful to Nico Vangoethem for his assistance with preparation of the figures. We would like to acknowledge Celia Lobo Romero for technical assistance during in vivo experimental procedures.

注：全ての動物実験は、KUルーベン（プロジェクト番号090/2013）の倫理委員会によって承認された。 KU Leuvenの動物保護ガイドラインに従って動物を維持します。 1. C.アルビカンスの成長<ol><li>二十四時間、動物実験開始前に、酵母抽出物の造粒物10g、細菌学的ペプトン20g及び造粒寒天を15g添加することにより、YPDプレートを準備する。 Milli-Q水とオートクレーブと900ミリリットルのボリュームを構成する。 </li><li>無菌の40％のグルコースの50ミリリットルを追加します。完全に混合し、ペトリ皿に注ぐ。冷却して凝固さ寒天プレートにしておきます。 注：本研究では、二つの株、すなわち野生型C.を使用アルビカンス SC5314 - GLUCネガティブ（WTと呼ぶ）歪みとC.野生型Cである。 アルビカンス SKCA23株、 SKCA23- Aという名前のこの株（.IN Clp10 :: Act1p-gLUC59プラスミド22で形質転換アルビカンス SC5314CTgLuc）Glucを（このプロモーターは、真菌の成長ならびに菌糸段階、酵母中で活性である）ACT1（アクチン）プロモーターの制御下にある内因PGA59遺伝子に融合した。この株は、教授のパトリック·ヴァンDijck、ルーヴェンカトリック大学、ルーヴェン、ベルギーの研究室から要求することができる。プラスミドClp10 :: Act1p-gLUC59プラスミド22は親切に教授C. D&#39;Enfert、パスツール研究所、パリ、フランスから寄贈されました。 </li><li> 、-80℃でグリセロールストックと店舗の両方での株の維持。 </li><li> YPDプレート上の任意の実験ストリーク株に先立ち。 37℃で一晩プレートをインキュベート。 </li></ol> 2.カテーテルの小品準備<ol><li>実験の前に、必要とされているどのように多くのカテーテルを決定します。これは、マウス当たり6カテーテル片（左3カテーテルおよび動物（ 図2Aの右側の3カテーテル）まで注入することが可能である。 </li><li>二十四時間後、動物の手術の前に、パックを開く生物学的安全キャビネットの下トリプルルーメンカテーテルを含む年齢。無菌のピンセットを持つすべての不要な部分を削除し、滅菌メスでカテーテルに取り付け部分をカット。プラスチックパッケージの下に定規を置き、定規の目盛り（図1）によると、正確に1cmのポリウレタンカテーテル片をカット。 注：これは、カテーテル片のこのタイプの燐光とBLI 18,19に適していないことを言及することが重要である。 </li><li> 2ミリリットルのマイクロチューブに15カットカテーテル片（ステップ2.2）の最大を置きます。常に密着性の期間の後、デバイスに取り付けカンジダ細胞の量を列挙するために使用されている余分3枚を準備。 </li><li> 100パーセントウシ胎児血清（FBS）の約1.8ミリリットルと補足カテーテル。 </li><li>激しくボルテックスし、100％のFBSの追加の100〜200μlを添加する。完全に血清を持つすべてのカテーテルの部分をカバーしています。 </li><li> 37℃で一晩インキュベートする。 </li&gt; </ol> 3.動物および免疫系の抑制<ol><li>標準の食料と水を自由に自由にアクセスできる個別に換気フィルタートップケージにメスのBALB / cマウス（生後約8週間）してください。 </li><li>動物の飲料水にデキサメタゾン（0.4ミリグラム/ L）を添加することにより、動物の手術の前に、免疫系の24時間の抑制を開始する。ホストの任意の細菌汚染を避けるために、抗生物質、例えば 、アンピシリンナトリウム粉末（0.5グラム/ L）を飲料水を補う。 </li><li> （最大6日間まで）全体の実験中の動物の免疫抑制してください。 </li></ol> 4.上のエクスビボC.アルビカンスの接着FBSでコーティングされたポリウレタン基質<ol><li>新鮮な1.5ミリリットルのマイクロチューブに各血清でコーティングされたカテーテルピースを転送します。 </li><li>いくつかのC.は削り取るアルビカンス細胞をYPDプレート（ステップ1）上で増殖させ、1mlのPBSでそれらを中断する。 </li><li> 缶を希釈する別々のマイクロ遠心チューブ内：ジダ細胞（100 1）。希釈されたサンプルの10μlのを取り、細胞計数室でそれを適用する。少なくとも16小さな正方形を数える。 </li><li> 5×10 4細胞/ mlの最終濃度になるようにRPMI 1640培地中のカンジダ·セル（個別株）を準備する。 </li><li>各血清でコーティングされたカテーテル片に細胞懸濁液1mlを加える。 </li><li>激しくボルテックスし、カテーテルが培地中に沈め、トップ上に浮いていないことを確認。 </li><li> 90分間37℃（接着の期間）にカテーテルをインキュベートする。 </li><li>無菌のピンセットでカテーテルを取り出し、1mlのPBSで二回洗っ。このステップの間に洗浄流体は非常に優しくカテーテルのフラッシュ中に垂直位置にカテーテルを保つことによって内腔を通って行くことを確認してください。重要なことは、付着した細胞の除去につながる可能性が強い流れを使用しないでください。 </li><li> TUごとに1枚（きれいな微量遠心チューブにそれぞれ洗浄したカテーテルを転送）である。 </li><li>氷の上に置き、手術までそこに保つ。 </li></ol> 5.麻酔<ol><li>メデトミジンの100μL（1mg / ml）をし、無菌生理食塩水の825μlのケタミンの75μlの（100ミリグラム/ ml）を混合することによって麻酔を準備します。 45〜60 mg / kgをケタミンおよび0.6〜0.8 mg / kgをメデトミジンの用量で、その結果、10グラムの体重あたりの麻酔薬カクテルの、腹腔内（IP）60〜80μLを管理します。 </li><li>麻酔の逆転のために、を0.5mg / kgの用量で、その結果、解毒剤として、腹腔投与、4.95ミリリットルの生理食塩水に10g体重あたり100μlを50μlのアチパメゾール（5 mg / mlの）で希釈する。 </li><li>麻酔の注射後、別々のケージに動物を配置し、それが完全に眠っているのを待ちます。 </li><li>光肌のピンチとつま先のピンチすることによって、動物の適切な麻酔を確認して、皮膚への損傷を引き起こさない。いずれの観察運動は、動物が十分に手術を行うために麻酔をかけていないことを示します。このような場合は、COUを待つ長い動物までの分のPLEは、皮膚や足指のピンチの際に動きの兆候を示していない。 </li></ol> 6.動物の手術<ol><li>転送は、加熱パッド上に置いクリーン組織にケージから動物を麻酔し、37℃に予め加温した（ 図2A（1））。 注：安価な代替は、電気的に加熱毛布を使用することです。これは、動物の手術前に電子レンジで暖機しなければならない等温パッドを使用することも可能である。 </li><li>目に眼軟膏を適用します。 </li><li>電気かみそりで動物の腰を剃る。すべての動物の毛を削除して、クリーンな組織上の動物を転送する。 （1％のヨウ素イソプロパノール又は70％アルコール中の0.5％クロルヘキシジンを、 例えば ）皮膚を消毒し、約1分間乾燥消毒領域を残す（ 図2A（2））。 </li><li>皮膚（左に1つ、動物の右側に1つ）の小さな切開する（約0.5＆＃8211; 1センチ）（ 図2A（3））。 </li><li> 2回の皮下トンネルを作成するためにハサミで皮下組織を解剖。各トンネルは約1.5センチと1cm幅にする必要があります。 </li><li>各トンネルで、以前にカンジダに感染して3カテーテル片を、挿入します。カテーテルは、水平配置で隣同士に嘘ことを確認し、彼らは全部で6カテーテルフラグメントの移植可能にするためにお互いをカバーしていないこと（ 図 2a を （4））。 </li><li>縫合糸で切開を閉じます。また、傷口を閉じるためにDERMABONDを使用しています。 </li><li> 70％アルコール中で、ヨウ素イソプロパノール（1％）で0.5％クロルヘキシジンで非常に穏やかに創傷を消毒する。 </li><li>に直接傷に局所麻酔薬（キシロカインゲル、2％）を適用します。 </li><li> 10gの体重を腹腔内に100μl：麻酔の逆転（プロトコル5、ステップ2）を管理する。 </li><li>きれいなケージに移し動物は、以前に加熱板上に置いた。動物を維持動物が完全に目を覚ましになるまで別々と暖かい。一方、次の動物の動作やインプラントを続行。一旦全ての操作動物が完全に目を覚ましている。 1ケージに移す。定期的に動物を監視します。 </li></ol> 7.生物発光イメージング：セレンテラジン（CTZ）の調製G.、基板ヨモギルシフェラーゼ <ol><li>酸性化したエタノールに5 mg / mlのCTZを溶解するか、製造元の指示に従ってにより新鮮なセレンテラジン（CTZ）ストック溶液を準備します。 </li><li>滅菌PBSで原液を1:10に希釈して1.2 mMの作業溶液を準備します。 注：カテーテルを囲む領域の皮下に100μlのCTZ作業溶液を注入。 CTZの皮下注射用のインスリンシリンジに使用します。 </li><li>常に暗闇でCTZを保つ（ 例えば 、アルミホイルでCTZを含むマイクロチューブをカバー）。実験の期間中、-80℃で保存溶液を保管してください。 </li></ol&gt; 8.生物発光イメージング<ol><li> BLIカメラを初期化します。 </li><li>インダクションボックスを使って動物を麻酔。 2から3パーセントで、酸素中のN 2 O / O 2、または空気をイソフルランの混合ガスを使用してください。 </li><li>誘導後、インダクションボックス内および1.5から2パーセントでイメージングチャンバー内の麻酔の維持。 </li><li>イメージングセッションを開始する前に、10cmのFOVに対応する位置Aにイメージングプレートを置く。確認ボックスに眠っている動物を配置することによって麻酔コンセントや動物の右の位置という。 </li><li>動物は、カメラの真下をFOVに、所望の撮影位置になるまで、いくつかの写真を撮る。 </li><li> 2のインスリン注射器CTZ作業溶液をそれぞれ含有する100μlのを準備します。 </li><li>ベンチに一匹を置き、ガス麻酔を提供するノーズコーンを介して眠ってそれを維持する。 </li><li>カテーテルは皮下に、周囲の所定の位置に注射器の針が持参し注入するCTZ同時にカテーテルの上に。 </li><li>注射直後、カメラボックス内の暖かいプレートに動物を配置し、生物発光画像取得を開始します。 </li><li>最大信号強度に到達するまで20〜60秒（信号強度に応じて）の範囲の取得時間との連続した​​スキャンを取得する。次のフレームの取得中に、このROIを通じて光子束を各カテーテルトリオの上にROIを配置し、測定することにより、先に取得したフレームのBLIの信号強度を測定する。 </li><li>次の動物（S）について、ステップ7から繰り返します。 </li><li>イメージングの後、彼らのケージに動物を返す。バイオフィルム形成の長手方向の、非侵襲的フォローアップのために実験中BLIを繰り返す。 </li><li>リビングイメージのソフトウェアを使用してBLIデータを分析します。各カテーテルトリオの上に固定サイズの長方形のROIを配置し、各ROIを通じて光子束（輝き）を測定する。すべての動物のためにこれを繰り返します。 </li><li>レポート毎秒光子束として各カテーテルトリオのBLI信号強度。平均と各グループの毎秒の光子束のSDをプロットし、対数スケールでBLIデータを表す。ログに10変換されたデータを統計分析を実行します。 </li></ol> 9.カテーテル外植<ol><li> 1mlのPBS、各カテーテル装置のための1つを含むマイクロ遠心チューブを準備し、氷上でそれらを保つ。 </li><li>頸椎脱臼により動物を安楽死させる（ 図2（b）（1））。 </li><li> 70％アルコール中で、ヨウ素イソプロパノール（1％）で0.5％のクロルヘキシジンと背中の皮膚を消毒する。 </li><li>カテーテル上記切開（約3cm）を確認します。 </li><li>皮下組織を切断し、カテーテル断片を、滅菌ピンセット（ 図2B、（2））を用いて、皮下組織の下から1枚ずつを削除します。 </li><li>垂直位置に優しくカテーテルを処理し、滅菌PBSの1ミリリットルで二回それを洗う。それぞれにカテーテルを置き（ステップ1で調製）を別々のマイクロ遠心チューブに一枚​​。 </li></ol>コロニー形成単位数（CFUを）と結果の統計分析によって10の定量バイオフィルム関連細胞<ol><li>超音波処理カテーテルは、以前に水浴超音波処理40,000 Hzで10分間PBSを1mlに入れ、氷の上に置きます。 </li><li>超音波処理の後、精力的に氷上で再び30秒と場所ボルテックス。 </li><li> PBS900μlのを含む二つの追加マイクロ遠心チューブを準備します。 </li><li>あなたの元のサンプル（カテーテルが含まれている1）から100の希釈し、氷上ですべてのマイクロチューブを保つ：1:10 1を加えます。 </li><li>元のサンプルのプレートを100μl、1：10〜1：重複でYPD寒天プレート上で100希釈液。 </li><li> 37℃で2日間プレートをインキュベートし、CFUをカウント。 </li><li> YPD寒天プレート上で生育したコロニー（コロニーの計数可能量、最大300個のコロニー/プレート）をカウントし、適切DILUでそれらを掛けるションファクター（1X-オリジナル、10倍または100倍希釈）。さらに、カテーテルを含む1mlチューブにコロニーの最終量に相当する、10倍、各カテーテル片を掛け。 10セル/標準偏差（SD）を有するカテーテルピースを記録するためにコロニーの最終量を持参してください。平均±SDとしてデータを発現する。 </li><li>上記の計算と統計分析を実行するために、スプレッドシート、および/または統計プログラムに各カテーテルおよび特定のグループのすべての値を置きます。比較するために、特定のグループを示す、 すなわち WT 対変異体または2日対 。 6日バイオフィルム形成とLOG10変換されたデータにテューキー事後テストで対応のないt検定と分散分析を行う。 <ol><li> p値によって有意水準を発現する。として表されるp値 &lt;0.05は、以下の場合は、この研究では有意性を示す：* P &lt;0.05、** P &lt;0.005、*** P &lt;0.0005。 </li></ol></li></ol>

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著者は、彼らが競合する経済的利益を持っていないことを宣言。

宿主免疫系は、in vitroモデルで説明することはできないバイオフィルム形成に必須の因子であるので、微生物バイオフィルム専用の研究のための動物モデル、及び特に齧歯類モデルの使用は、非常に重要である。本研究では、比較的簡単な皮下C.を記述簡単に研究室に採用することが可能と強力な技術的なスキルを必要としないアルビカンスバイオフィルムマウスモデル、...

カンジダは皮膚や消化管及び膣内フローラの一部として、たとえば、健康な個体の異なるサイトで見ることができるの共生生物、ある。しかし、入院、および特に患者の免疫無防備状態は、感染1の広い範囲を引き起こす可能性がある。そのような個体では、免疫力が低下し、 カンジダ細胞が血流に普及し、生命を脅かす感染を引き起こすより深い組織に侵入することができます。また、中心静脈および尿道カテーテルなどの非生物基質の存在は、人工心臓弁、関節、 カンジダアタッチメント 2のためのニッチを提供することができる。そのような基材への密着性は、主に多糖類2からなる、細胞外の高分子材料に埋め込 ​​まれた酵母と菌糸細胞の層を表し、さらにバイオフィルム開発のための前提条件である。C.アルビカンスカテーテル -関連の感染症高い死亡率と関連している。バイオフィルムの一般的な特徴は、そのようなアゾール3,4-として知られている抗真菌剤、に彼らの減少した感受性である。このようなエキノカンジンおよびアンホテリシンBのリポソーム製剤などの抗真菌薬の唯一の新しいクラスは、カテーテル関連感染症5-7に対して活性であることが判明した。そのため抗真菌薬にバイオフィルムの回復力のため、治療的アプローチは、非常に多くの場合、カテーテルの除去およびソールソリューションとして、その後の交換につながる、制限されています。 Cの私たちの現在の理解の大半albicansのバイオフィルムの発達は、上述したデバイス、 すなわち、シリコーン、ポリウレタン2の製造に用い、非生物ポリスチレン等の基板、またはプラスチック上のin vitro研究に由来する。これらのモデルは非常に進んでいるし、可能な限り生体内での状況を模倣しようとする。しかしながら、これらのシステムは、連続的な血流及びtを含まない彼のホスト、免疫系。これは、中心静脈カテーテル（CVC）モデル8-10、口腔カンジダ11の義歯の口内炎モデルおよびカテーテル関連カンジダ12用のマウスモデルとしてのin vivoモデル系の開発をもたらした。さらに、C. albicansのバイオフィルムの開発は、膣13と口腔14からのものとして粘膜表面上の生体内で検討した。私たちの研究室では、皮下C.の設立で貢献Sprague Dawleyラット15の背面に感染したカテーテル片の移植物に基づいているアルビカンスバイオフィルムモデル。このモデルは、成功したフルコナゾールにバイオフィルムの感受性をテストし、薬5,16をエキノカンジン、ジクロフェナク及びカスポファンギン17の組合せ療法の効果を研究するために我々の研究室で使用された。より最近では、我々は、BALB / cマウス18,19で使用するためにこのシステムを適合される。でin vivoモデル他との比較が、この皮下モデルの主な利点は、埋め込 ​​まれたカテーテル片を内腔の内側に開発動物ごとに複数のバイオフィルムを研究する可能性がある。 実験動物の数を減らすために、我々は、Cの開発を研究するためにこのモデルを適応しているアルビカンスバイオフィルム非侵襲的に生物発光イメージング（BLI）18,19を使用します。この方法は、動物の犠牲を回避する、（我々の場合に移植カテーテルの面積）は、関心のある領域における特定のBLIシグナルを測定することによって、バイオフィルムを定量するために用いることができる強力な技術であることが判明した。 C.などにより、特定のluxオペロン20の導入遺伝子および生物発光反応に必要な基質の両方を発現することができる細菌の比較では、ほとんどの真核生物、 アルビカンスは、と結合し、ルシフェラーゼ遺伝子の異種発現に依存している例えば、D-ルシフェリンまたはセレンテラジン21などの特定の基質、の外用投与。おそらく、真菌細胞壁およびCの存在に起因しアルビカンスの形態形成、ルシフェラーゼ酵素の基質の細胞内送達は、主な課題21でした。この問題を解決するために、Enjalbert ら 22は、合成C.株を設計し自然分泌型ガウヨモギルシフェラーゼ遺伝子（GLUC）のアルビカンスコドン最適化バージョンは 、C。に融合させたアルビカンスPGA59遺伝子は、GPI-は、細胞壁アンカータンパク質。なぜなら、細胞壁でのルシフェラーゼの存在、基質の細胞内アベイラビリティに関する問題を回避することができる。この特定のシステムはC.によって引き起こされる表面的な感染症を研究するために使用したアルビカンス 22。ごく最近、BLIは、また、口腔咽​​頭カンジダ症およびそのpossiblの進行を追跡するために使用された、電子処理23。このような所見は、自由生活細胞だけでなく、デバイス関連感染によって引き起こされる感染症を研究するための有望な技術としてBLIの使用をサポート。 本研究では、Cを記述するBLIを使用したポリウレタンカテーテルBALB / cマウスでピースとその定量化にalbicansのバイオフィルムの開発。私たちは、生きた動物のマウスに移植すると、その後のバイオフィルムの開発に続く接着の期間中にポリウレタンカテーテルのin vitroでの植民地化の詳細なプロトコルを提供する。別にC.によって放出されるBLI信号を測定するからアルビカンス細胞は、我々はまた、バイオフィルムの真菌負荷の定量化のための標準的な手法との比較のためにコロニー形成単位を決定する。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="877">
	<tbody>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:329px;">Name of Reagent</td>
			<td style="width:199px;">Company</td>
			<td style="width:113px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:236px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:329px;">Yeast extract granulated</td>
			<td style="width:199px;">Merck</td>
			<td style="width:113px;">MERC1.03753.0500</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:329px;">Bacteriological peptone</td>
			<td style="width:199px;">Oxoid</td>
			<td style="width:113px;">LP037B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:329px;">Agar granulated</td>
			<td style="width:199px;">Difco</td>
			<td style="width:113px;">214530</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:329px;">D-(+)-glucose</td>
			<td style="width:199px;">Fluka</td>
			<td style="width:113px;">49159-5KG</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">Phosphate buffered saline&#160;</td>
			<td style="width:199px;">Prepared in the laboratory</td>
			<td style="width:113px;"></td>
			<td>for 1L of 10x PBS: 80 g NaCl, 2 g KCl, 14.4 g Na2HPO4, 2.4 g KH2PO4</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:329px;">RPMI1640 with L-glutamine and without sodium carbonate&#160;</td>
			<td style="width:199px;">Sigma</td>
			<td style="width:113px;">R6504-1L</td>
			<td>Prepare according the protocol for Candida albicans drug susceptibility testing&#160;</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:329px;">3-(N-Morpholino)propanesulfonic acid (MOPS)</td>
			<td style="width:199px;">Sigma</td>
			<td style="width:113px;">M1254</td>
			<td>MOPS is used to adjust the pH of RPMI medium (pH 7.0)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:329px;">fetal bovine serum (FBS)</td>
			<td style="width:199px;">Sigma</td>
			<td style="width:113px;">F7524</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:329px;">Polyurethane tripe-lumen intravenous catheter piece (2.4 mm diameter, Certofix Trio S730)&#160;</td>
			<td style="width:199px;">BBraun</td>
			<td style="width:113px;">CV-15703</td>
			<td>Polyurethane part cut into 1 cm pieces</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:329px;">Dexamethasone</td>
			<td style="width:199px;">Fagron SAS, France</td>
			<td style="width:113px;">611139</td>
			<td>Immunosuppressant (stock solution 10 mg/ml)</td>
		</tr>
		<tr height="42">
			<td height="42" style="height:42px;width:329px;">Ampicillin&#160;</td>
			<td style="width:199px;">Duchefa Biochemie, The Netherlands</td>
			<td style="width:113px;">A0104</td>
			<td>Antibacterial prophylaxis</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:329px;">Ketamine 1000</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td style="width:113px;">804 119</td>
			<td>Anesthetic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:329px;">Domitor</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td style="width:113px;">134737-1</td>
			<td>Anesthetic</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:329px;">Antisedan</td>
			<td>Pfizer</td>
			<td style="width:113px;">134783-2</td>
			<td>Reversal of anesthesia</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:329px;">Xylocaine gel (2%) - this is Linisol</td>
			<td style="width:199px;">AstraZeneca</td>
			<td style="width:113px;">352 1206</td>
			<td>Local anesthetic for the skin</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Terramycin/ polymyxin-b ophthalmic ointment</td>
			<td style="width:199px;"></td>
			<td style="width:113px;"></td>
			<td>To prevent drying and infection of eyes</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;"></td>
			<td style="width:199px;"></td>
			<td style="width:113px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:329px;">Coelenterazine&#160;</td>
			<td style="width:199px;">Prolume (Nanolight)</td>
			<td style="width:113px;">NF-CTZ-FB</td>
			<td>Light sensitive agent (must be kept in the dark)</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Iodine isopropanol (1%)</td>
			<td style="width:199px;">3M&#8482; DuraPrep&#8482;&#160;</td>
			<td style="width:113px;"></td>
			<td>Disinfectant for the skin</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">0.5 % chlorhexidine in 70 % alcohol.&#160;&#160;</td>
			<td style="width:199px;">Cedium</td>
			<td style="width:113px;"></td>
			<td>Disinfectant for the skin</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:329px;"></td>
			<td style="width:199px;"></td>
			<td style="width:113px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:329px;">Equipment</td>
			<td style="width:199px;"></td>
			<td style="width:113px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:329px;">Cell counting chamber</td>
			<td style="width:199px;"></td>
			<td style="width:113px;"></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:329px;">Insulin syringes (0.3 ml)</td>
			<td style="width:199px;">Terumo Myjector 29G</td>
			<td style="width:113px;">324826</td>
			<td>For injection of coelenterazine</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:329px;">Electric razor</td>
			<td style="width:199px;"></td>
			<td style="width:113px;"></td>
			<td>For small animals</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:329px;">Sterile surgical tools</td>
			<td style="width:199px;"></td>
			<td style="width:113px;"></td>
			<td>Scissors, 2 pairs of tweezers, scalpel</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:329px;">Heating pad</td>
			<td style="width:199px;">Leica</td>
			<td style="width:113px;">14042321474</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:329px;">Skin suture</td>
			<td style="width:199px;">Johnson&#38;Johnson</td>
			<td style="width:113px;">K890H</td>
			<td>Surgical thread, needle</td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Water bath sonicator</td>
			<td>Branson 2210</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;width:329px;">BLI camera (IVIS Spectrum)&#160;</td>
			<td style="width:199px;">Perkin Elmer, Alameda</td>
			<td style="width:113px;">IVISSPE</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Living Image software&#160;</td>
			<td style="width:199px;">Perkin Elmer, Alameda</td>
			<td style="width:113px;"></td>
			<td>(version 4.2)&#160;</td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

candida albicans biofilm development on medically-relevant foreign bodies in a mouse subcutaneous model followed by bioluminescence imaging

生物的および/ ​​または非生物表面上のカンジダ·アルビカンスのバイオフィルムの開発は、入院患者のための具体的な脅威を表します。これまでのところ、C.アルビカンスのバイオフィルムは、 インビトロで 、主に研究されてきたが、 インビボ条件下で 、この動的なプロセスをよりよく理解するための重要な必要性がある。私たちは、Cを勉強するin vivoでの皮下ラットモデルを開発しましたalbicansのバイオフィルム形成 。我々のモデルで、（9までの）多数のカンジダ感染したデバイスは、動物の背中部分に注入される。それは私たちが一匹で複数の独立したバイオフィルムを研究することができますように、これは中心静脈カテーテルのモデルシステムを介して私たちに大きな利点を提供します。最近、我々はC.を研究するこのモデルを適応BALB / cマウスにおけるアルビカンスバイオフィルムの発達。本モデルで、C成熟アルビカンスバイオフィルムは48時間以内に発症し、典型的な3次元バイオフィルムのアーキテクチャを示しています。真菌のバイオフィルムの定量化伝統的に死後に分析し、ホスト犠牲を必要としている。これは速度論的研究を行うために多くの動物を使用する必要があるため、我々は、長手方向に成熟で、生体内フォローアップまでの非侵襲的生物発光イメージング（BLI）を適用私たちの皮下モデルで開発アルビカンスバイオフィルム。C. albicansの細胞は細胞壁に付着ガウヨモギルシフェラーゼ遺伝子（Glucを ） を発現するように操作した。生物発光シグナルを測定することができる光に加え、基質セレンテラジン変換ルシフェラーゼによって生成される。 BLI信号が外植カテーテルから得られた細胞数に似ていた。 in vivoでのバイオフィルム形成に定量化するための非侵襲的イメージングは、より良い理解するために、ここに貢献だけでなく、宿主-病原体相互作用に基づいて、研究のためのインビボ条件下でスクリーニングし、抗真菌薬の検証のための即時のアプリケーションを提供し、カテーテル関連感染症の病因のる。

この研究では、マウスにおけるin vivo C. albicansのバイオフィルム開発中にカテーテルインプラントと植片の外科的手順を示しています。さらに、我々は古典的なCFUの列挙ではなく、またBLIによってのみならず、成熟したバイオフィルムの定量化を表示します。 図1Aに示すように、非燐光ポリウレタンカテーテル片1cmのデバイスに切断し、その後血清で?...

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Candida albicans Biofilm Development on Medically-relevant Foreign Bodies in a Mouse Subcutaneous Model Followed by Bioluminescence Imaging

We present an experimental procedure of Candida albicans biofilm development in a mouse subcutaneous model. Fungal biofilms were quantified by determining the number of colony forming units and by a non-invasive bioluminescence imaging, where the amount of light that is produced corresponds with the number of viable cells.

生物発光イメージングが続くマウス皮下モデルにおける医学関連の異物にカンジダ·アルビカンスバイオフィルム発展

Candida albicans biofilm development on biotic and/or abiotic surfaces represents a specific threat for hospitalized patients. So far, C. albicans ...

candida-albicans-biofilm-development-on-medically-relevant-foreign

Research

JoVE Journal

Medicine

Candida albicans Biofilm Development on Medically-relevant Foreign Bodies in a Mouse Subcutaneous Model Followed by Bioluminescence Imaging

12.9K ビュー.  Institute of Botany and Microbiology, VIB, KU Leuven. We present an experimental procedure of Candida albicans biofilm development in a mouse subcutaneous model. Fungal biofilms were quantified by determining the number of colony forming units and by a non-invasive bioluminescence imaging, where the amount of light that is produced corresponds with the number of viable cells.

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Monitoring Tumor Metastases and Osteolytic Lesions with Bioluminescence and Micro CT Imaging

Following intracardiac delivery of MDA-MB-231-luc-D3H2LN cells to Nu/Nu mice, systemic metastases developed in the injected animals. Bioluminescence imaging using IVIS Spectrum was employed to monitor the distribution and development of the tumor cells following the delivery procedure including DLIT reconstruction to measure the tumor signal and its location.
Development of metastatic lesions to the bone tissues triggers osteolytic activity and lesions to tibia and femur were evaluated longitudinally using micro CT. Imaging was performed using a Quantum FX micro CT system with fast imaging and low X-ray dose. The low radiation dose allows multiple imaging sessions to be performed with a cumulative X-ray dosage far below LD50. A mouse imaging shuttle device was used to sequentially image the mice with both IVIS Spectrum and Quantum FX achieving accurate animal positioning in both the bioluminescence and CT images. The optical and CT data sets were co-registered in 3-dimentions using the Living Image 4.1 software. This multi-mode approach allows close monitoring of tumor growth and development simultaneously with osteolytic activity.

An experimental mouse model of bone metastasis was established following intracardiac delivery of luciferase expressing mammary tumor cells. Tumor development and resulted osteolytic lesion were monitored longitudinally with bioluminescence and micro CT imaging.

生物発光とマイクロCTイメージングで腫瘍転移と溶骨性病変の監視

Following intracardiac delivery of MDA-MB-231-luc-D3H2LN cells to Nu/Nu mice, systemic metastases developed in the injected animals. Bioluminescence ...

医学

Multi-photon Imaging of Tumor Cell Invasion in an Orthotopic Mouse Model of Oral Squamous Cell Carcinoma

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient management strategies. Orthotopic mouse models of oral cancer have been developed to facilitate the study of factors that impact invasion and serve as model system for evaluating anti-tumor therapeutics. In these systems, visualization of disseminated tumor cells within oral cavity tissues has typically been conducted by either conventional histology or with in vivo bioluminescent methods. A primary drawback of these techniques is the inherent inability to accurately visualize and quantify early tumor cell invasion arising from the primary site in three dimensions. Here we describe a protocol that combines an established model for squamous cell carcinoma of the tongue (SCOT) with two-photon imaging to allow multi-vectorial visualization of lingual tumor spread. The OSC-19 head and neck tumor cell line was stably engineered to express the F-actin binding peptide LifeAct fused to the mCherry fluorescent protein (LifeAct-mCherry). Fox1nu/nu mice injected with these cells reliably form tumors that allow the tongue to be visualized by ex-vivo application of two-photon microscopy. This technique allows for the orthotopic visualization of the tumor mass and locally invading cells in excised tongues without disruption of the regional tumor microenvironment. In addition, this system allows for the quantification of tumor cell invasion by calculating distances that invaded cells move from the primary tumor site. Overall this procedure provides an enhanced model system for analyzing factors that contribute to SCOT invasion and therapeutic treatments tailored to prevent local invasion and distant metastatic spread. This method also has the potential to be ultimately combined with other imaging modalities in an in vivo setting.

A comprehensive overview of the techniques involved in generating a mouse model of oral cancer and quantitative monitoring of tumor invasion within the tongue through multi-photon microscopy of labeled cells is presented. This system can serve as a useful platform for the molecular assessment and drug efficacy of anti-invasive compounds.

口腔扁平上皮癌の同所性マウスモデルにおける腫瘍細胞の浸潤の多光子イメージング

Loco-regional invasion of head and neck cancer is linked to metastatic risk and presents a difficult challenge in designing and implementing patient ...

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

It is well recognized that tumor hypoxia plays an important role in promoting malignant progression and affecting therapeutic response negatively. There is little knowledge about in situ, in vivo, tumor hypoxia during intracranial development of malignant brain tumors because of lack of efficient means to monitor it in these deep-seated orthotopic tumors. Bioluminescence imaging (BLI), based on the detection of light emitted by living cells expressing a luciferase gene, has been rapidly adopted for cancer research, in particular, to evaluate tumor growth or tumor size changes in response to treatment in preclinical animal studies. Moreover, by expressing a reporter gene under the control of a promoter sequence, the specific gene expression can be monitored non-invasively by BLI. Under hypoxic stress, signaling responses are mediated mainly via the hypoxia inducible factor-1&alpha; (HIF-1&alpha;) to drive transcription of various genes. Therefore, we have used a HIF-1&alpha; reporter construct, 5HRE-ODD-luc, stably transfected into human breast cancer MDA-MB231 cells (MDA-MB231/5HRE-ODD-luc). In vitro HIF-1&alpha; bioluminescence assay is performed by incubating the transfected cells in a hypoxic chamber (0.1% O2) for 24 hr before BLI, while the cells in normoxia (21% O2) serve as a control. Significantly higher photon flux observed for the cells under hypoxia suggests an increased HIF-1&alpha; binding to its promoter (HRE elements), as compared to those in normoxia. Cells are injected directly into the mouse brain to establish a breast cancer brain metastasis model. In vivo bioluminescence imaging of tumor hypoxia dynamics is initiated 2 wks after implantation and repeated once a week. BLI reveals increasing light signals from the brain as the tumor progresses, indicating increased intracranial tumor hypoxia. Histological and immunohistochemical studies are used to confirm the in vivo imaging results. Here, we will introduce approaches of in vitro HIF-1&alpha; bioluminescence assay, surgical establishment of a breast cancer brain metastasis in a nude mouse and application of in vivo bioluminescence imaging to monitor intracranial tumor hypoxia.

In vivo Bioluminescence Imaging of Tumor Hypoxia Dynamics of Breast Cancer Brain Metastasis in a Mouse Model

Bioluminescence imaging of hypoxia inducible factor-1&alpha; activity is applied to monitor intracranial tumor hypoxia development in a breast cancer brain metastasis mouse model.

マウスモデルにおける乳がんの脳転移の腫瘍の低酸素動態の in vivo生物発光イメージングに

It is well recognized that tumor hypoxia plays an important role in promoting malignant progression and affecting therapeutic response negatively. There ...

Ultrasound Imaging-guided Intracardiac Injection to Develop a Mouse Model of Breast Cancer Brain Metastases Followed by Longitudinal MRI

Breast cancer brain metastasis, occurring in 30% of breast cancer patients at stage IV, is associated with high mortality. The median survival is only 6 months. It is critical to have suitable animal models to mimic the hemodynamic spread of the metastatic cells in the clinical scenario. Here, we are introducing the use of small animal ultrasound imaging to guide an accurate injection of brain tropical breast cancer cells into the left ventricle of athymic nude mice. Longitudinal MRI is used to assessing intracranial initiation and growth of brain metastases. Ultrasound-guided intracardiac injection ensures not only an accurate injection and hereby a higher successful rate but also significantly decreased mortality rate, as compared to our previous manual procedure. In vivo high resolution MRI allows the visualization of hyperintense multifocal lesions, as small as 310 &#181;m in diameter on T2-weighted images at 3 weeks post injection. Follow-up MRI reveals intracranial tumor growth and increased number of metastases that distribute throughout the whole brain.

A breast cancer brain metastasis mouse model is established with ultrasound imaging-guided intracardiac injection of MDA-MB231/Br-GFP cells. Development of multifocal intracranial metastases has been monitored longitudinally using high-resolution 9.4 T MRI.

縦MRIが続く乳がんの脳転移のマウスモデルを開発するために、超音波画像誘導心臓内注射

Breast cancer brain metastasis, occurring in 30% of breast cancer patients at stage IV, is associated with high mortality. The median survival is only 6 ...

Acute Brain Trauma in Mice Followed By Longitudinal Two-photon Imaging

Although acute brain trauma often results from head damage in different accidents and affects a substantial fraction of the population, there is no effective treatment for it yet. Limitations of currently used animal models impede understanding of the pathology mechanism. Multiphoton microscopy allows studying cells and tissues within intact animal brains longitudinally under physiological and pathological conditions. Here, we describe two models of acute brain injury studied by means of two-photon imaging of brain cell behavior under posttraumatic conditions. A selected brain region is injured with a sharp needle to produce a trauma of a controlled width and depth in the brain parenchyma. Our method uses stereotaxic prick with a syringe needle, which can be combined with simultaneous drug application. We propose that this method can be used as an advanced tool to study cellular mechanisms of pathophysiological consequences of acute trauma in mammalian brain in vivo. In this video, we combine acute brain injury with two preparations: cranial window and skull thinning. We also discuss advantages and limitations of both preparations for multisession imaging of brain regeneration after trauma.

Acute brain trauma is a severe injury that has no adequate treatment to date. Multiphoton microscopy allows studying longitudinally the process of acute brain trauma development and probing therapeutical strategies in rodents. Two models of acute brain trauma studied with in vivo two-photon imaging of brain are demonstrated in this protocol.

縦二光子イメージングに続いてマウスの急性脳外傷

Although acute brain trauma often results from head damage in different accidents and affects a substantial fraction of the population, there is no ...

Evaluation of Tumor-infiltrating Leukocyte Subsets in a Subcutaneous Tumor Model

Specialized immune cells that infiltrate the tumor microenvironment regulate the growth and survival of neoplasia.&#160; Malignant cells must elude or subvert anti-tumor immune responses in order to survive and flourish. Tumors take advantage of a number of different mechanisms of immune &#8220;escape,&#8221; including the recruitment of tolerogenic DC, immunosuppressive regulatory T cells (Tregs), and myeloid-derived suppressor cells (MDSC) that inhibit cytotoxic anti-tumor responses. Conversely, anti-tumor effector immune cells can slow the growth and expansion of malignancies: immunostimulatory dendritic cells, natural killer cells which harbor innate anti-tumor immunity, and cytotoxic T cells all can participate in tumor suppression. The balance between pro- and anti-tumor leukocytes ultimately determines the behavior and fate of transformed cells; a multitude of human clinical studies have borne this out. Thus, detailed analysis of leukocyte subsets within the tumor microenvironment has become increasingly important. Here, we describe a method for analyzing infiltrating leukocyte subsets present in the tumor microenvironment in a mouse tumor model. Mouse B16 melanoma tumor cells were inoculated subcutaneously in C57BL/6 mice. At a specified time, tumors and surrounding skin were resected en bloc and processed into single cell suspensions, which were then stained for multi-color flow cytometry. Using a variety of leukocyte subset markers, we were able to compare the relative percentages of infiltrating leukocyte subsets between control and chemerin-expressing tumors. Investigators may use such a tool to study the immune presence in the tumor microenvironment and when combined with traditional caliper size measurements of tumor growth, will potentially allow them to elucidate the impact of changes in immune composition on tumor growth. Such a technique can be applied to any tumor model in which the tumor and its microenvironment can be resected and processed.

This protocol describes a method for the detailed evaluation of leukocyte subsets within the tumor microenvironment in a mouse tumor model. Chemerin-expressing B16 melanoma cells were implanted subcutaneously into syngeneic mice. Cells from the tumor microenvironment were then stained and analyzed by flow cytometry, allowing for detailed leukocyte subset analyses.

皮下腫瘍モデルにおける腫瘍浸潤白血球サブセットの評価

Specialized immune cells that infiltrate the tumor microenvironment regulate the growth and survival of neoplasia.&#160; Malignant cells must elude or ...

Bioluminescence Imaging of an Immunocompetent Animal Model for Glioblastoma

In contrast to commonly reported human glioma xenograft animal models, GL261 murine glioma xenografts recapitulate nearly all relevant clinical and histopathologic features of the human disease. When GL261 cells are implanted intracranially in syngeneic C57BL/6 mice, the model has the added advantage of maintaining an intact immune microenvironment. Stable expression of luciferase in GL261 cells allows non-invasive cost effective bioluminescence monitoring of intracranial tumor growth. We have recently demonstrated that luciferase expression in GL261 cells does not affect the tumor growth properties, tumor cell immunomodulatory cytokine expression, infiltration of immune cells into the tumor, or overall survival of animals bearing the intracranial tumor. Therefore, it appears that the GL261 luciferase glioma model can be useful in the study of novel chemotherapeutic and immunotherapeutic modalities. Here we report the technique for generating stable luciferase expression in GL261 cells and how to study the in vitro and in vivo growth of the tumor cells by bioluminescence imaging.

GL261 glioma cells provide a useful immunocompetent animal model of glioblastoma. The goals of this protocol are to demonstrate proper techniques for monitoring intracranial tumor growth using in vivo bioluminescence imaging, and to verify the utility of luciferase-modified GL261 cells for studying tumor immunology and immunotherapeutic approaches for treating glioblastoma.

神経膠芽腫のための免疫担当動物モデルの生物発光イメージング

In contrast to commonly reported human glioma xenograft animal models, GL261 murine glioma xenografts recapitulate nearly all relevant clinical and ...

A Neonatal Mouse Spinal Cord Compression Injury Model

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal cord. A major current area of research is focused on the mechanisms of adaptive plasticity that underlie spontaneous or induced functional recovery following SCI. Spontaneous functional recovery is reported to be greater early in life, raising interesting questions about how adaptive plasticity changes as the spinal cord develops. To facilitate investigation of this dynamic, we have developed a SCI model in the neonatal mouse. The model has relevance for pediatric SCI, which is too little studied. Because neural plasticity in the adult involves some of the same mechanisms as neural plasticity in early life1, this model may potentially have some relevance also for adult SCI. Here we describe the entire procedure for generating a reproducible spinal cord compression (SCC) injury in the neonatal mouse as early as postnatal (P) day 1. SCC is achieved by performing a laminectomy at a given spinal level (here described at thoracic levels 9-11) and then using a modified Yasargil aneurysm mini-clip to rapidly compress and decompress the spinal cord. As previously described, the injured neonatal mice can be tested for behavioral deficits or sacrificed for ex vivo physiological analysis of synaptic connectivity using electrophysiological and high-throughput optical recording techniques1. Earlier and ongoing studies using behavioral and physiological assessment have demonstrated a dramatic, acute impairment of hindlimb motility followed by a complete functional recovery within 2 weeks, and the first evidence of changes in functional circuitry at the level of identified descending synaptic connections1.

This article describes a method for generating a reproducible spinal cord compression injury (SCI) in the neonatal mouse. The model provides an advantageous platform for studying mechanisms of adaptive plasticity that underlie spontaneous functional recovery.

新生児マウス脊髄圧縮損傷モデル

Spinal cord injury (SCI) typically causes devastating neurological deficits, particularly through damage to fibers descending from the brain to the spinal ...

Quantitative Visualization of Leukocyte Infiltrate in a Murine Model of Fulminant Myocarditis by Light Sheet Microscopy

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently labelled structures in large biological specimens, and is down to cellular resolution. Meanwhile, the constant refinement of underlying protocols and the enhanced availability of specialized commercial systems enable us to investigate the microstructure of whole mouse organs and even allow for the characterization of cellular behavior in various live-cell imaging approaches. Here, we describe a protocol for the spatial whole-mount visualization and quantification of the CD45+ leukocyte population in inflamed mouse hearts. The method employs a transgenic mouse strain (CD11c.DTR)that has recently been shown to serve as a robust, inducible model for the study of the development of fulminant fatal myocarditis, characterized by lethal cardiac arrhythmias. This protocol includes myocarditis induction, intravital antibody-mediated cell staining, organ preparation, and LSFM with subsequent computer-assisted image post-processing. Although presented as a highly-adapted method for our particular scientific question, the protocol represents the blueprint of an easily adjustable system that can also target completely different fluorescent structures in other organs and even in other species.

Here, we describe a light-sheet microscopy approach to visualize the cardiac CD45+ leukocyte infiltrate in a murine model of aseptic fulminant myocarditis, which is induced by the intratracheal diphtheria toxin treatment of CD11c.DTR mice.

光シート顕微鏡による劇症心筋炎のマウスモデルにおける白血球浸潤の定量的可視化

Light-sheet fluorescence microscopy (LSFM), in combination with chemical clearing protocols, has become the gold standard for analyzing fluorescently ...

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and drugs. It is widely used in many studies on the physiological functions of vascular smooth muscle, the pathogenesis of vascular diseases such as hypertension, and the development of smooth muscle relaxant drugs. The mouse is a widely used model animal with a large pool of disease models and genetically modified strains. We introduced this method to measure the isometric contraction of mouse mesenteric artery in detail. A 1.4-mm segment of mouse mesenteric resistance artery was isolated and mounted on a myograph chamber by passing two steel wires through its lumen. After equilibration and normalization steps, the vessel segment was potentiated by a high-K+ solution twice prior to the contraction assay. As an example of the application of this method in drug development, we measured the relaxant effect of a novel natural substance, neoliensinine, isolated from a Chinese herb, embryos of the lotus seed (Nelumbo nucifera Gaertn.) on mouse mesenteric arteries. The vessel segments mounted on the myograph chamber were stimulated with a high-K+ solution. When the force tension reached a stable sustained phase, cumulative doses of neoliensinine were added to the chamber. We found that neoliensinine had a dose-dependent relaxant effect on smooth muscle contraction, thus suggesting that it bears potential activity against hypertension. In addition, as the vessel segment can survive at least 4 hours after mounting and maintain contractility induced by the high-K+ solution for many times, we suggest that the wire myograph system may be used for the time-consuming process of drug screening.

The wire myograph technique is used to investigate vascular smooth muscle functions and screen new drugs. We report a detailed protocol for measuring the isometric contractility of the mouse mesenteric artery and for screening new relaxants of vascular smooth muscle.

ワイヤー図法を使用してマウスの腸間膜動脈の等尺性収縮力測定

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...