The authors thank Mona Chambers, Geoffrey Hidalgo and Maurissa Two Two for their technical assistance. We also thank Dr. Earl White for amino acid analysis, Dr. Roger Simonds for analysis of pollen for pesticides, and Drs. Stanley S. Schneider, Vanessa Corby-Harris and Kirk Anderson for their reviews and discussion of earlier versions of the manuscript and many helpful suggestions.

1. AHBとEHBコロニーからBeebreadの取得<ol><li>ミツバチコロニーに花粉トラップを配置し、花粉を集める。コー​​ヒーグラインダーを用いて（葯から脱落花粉と同様に）微粉末に花粉を挽く。 </li><li>ミツバチが提供花粉にのみ餌になるようで囲まフライトエリア（EFA）にAHBとEHBの5コロニーそれぞれを確立します。ミツバチがそれらの間で交差しないことができるようにEHBとAHBコロニーとの間で漂流から労働者を防ぐために、別々のセクションにEFAを分割。 3,500-4,000働きバチ、EFAの各セクションの蜜、蜂蜜、未熟ひなと空の櫛を持つワックス櫛で個々のEHBまたはAHBコロニーを置きます。 注：設立時のコロニーが花粉を格納していません。花粉が記憶されているレートは、コロニー内の敷設女王を含まないことによって増加させることができる。 </li><li> EFAの各セクションの花粉でトレイを配置することにより、コロニーへのグランド花粉フィード。そのforaginように、各トレイに花粉の約60グラムを広めるGミツバチはcorbicular負荷としてそれを収集し、beebreadとしての植民地で花粉を保存することができます。 3週間毎日各トレイに新鮮な花粉を提供し続ける。 </li><li>ヨーロッパのbeebread（EBB）として、及びAfricanized beebread（ABB）としてAfricanizedコロニーからヨーロッパのコロニーからbeebreadを参照してください。 </li></ol>ケージ2.摂食ミツバチ<ol><li>環境の部屋で別の出現ケージ内AHBとEHBコロニーから密封された労働者のひなの場所フレームは32-34℃、相対湿度40％に設定した.. </li><li>労働者が出現し、約24時間経過したときは、12プレキシガラスバイオアッセイケージ（寸法= 11.5×7.5 X 16.5センチメートル3）を確立し、各ケージに100新たに浮上してEHBまたは100新たに登場したAHB働きバチのいずれかを追加します。 AHB給餌ABB、EHBフェッドABB、AHBフェッドEBBとEHB給餌EBB：以下の治療の組み合わせを生成するために、各ケージ内のEBBまたはABBどちら細胞（ケージ当たり24〜30細胞）の数がわかっているコームのセクションを配置します。 （4トリートメント; 6処置当たりケージ。全部で24のケージ）。 </li><li>各ケージにボリュームによって配合水のバイアルと50％の蜂蜜と水のソリューションを追加します。 11日の試験期間のために毎日蜂蜜と水のバイアルを補充。 </li></ol> 3.サンプリング働きバチとBeebreadと消費の推定<ol><li>サンプル10は、新たに前にケージに置くことにEHBとAHB労働者を浮上した。 0日蜂のようにこれらを参考にして、彼らが血リンパタンパク質濃度のベースラインとして機能している。 </li><li>彼らは4,7、および11日間EBBまたはABBに供給した後、各ケージから10ミツバチを削除します。 </li><li>個々のマイクロ遠心チューブでライブミツバチを置き、アイスパック上に設定。血リンパのタンパク質濃度の分析のための4つのミツバチのサブサンプルを選択します。 </li><li>デイ·11日に蜂をサンプリングした後、まだbeebreadが含まれているコーム細胞の数を数える。これはbeebread消費の相対的な尺度である。 </li><li>各ケージ内の細胞からの残りbeebreadを取り外し、SEPARに保存ケージに応じてマイクロ遠心チューブを食べた。 pHは、可溶性タンパク質の濃度、及びアミノ酸含量について分析するまで-80℃でbeebreadサンプルを保持する。 </li></ol> 4.花粉とBeebreadのpHの推定<ol><li> EFAでミツバチに供給された花粉の6ランダム0.3グラムのサンプルを取り、蒸留水300μlのでそれを溶解する。 0.01の精度で防水ダブルジャンクショ​​ンのpH槍を用いてpHを測定します。 </li><li>各ケージに11日間の給餌期間後に残っbeebreadの0.3グラムのサンプルを取る。蒸留水300μlのbeebreadを溶解し、花粉（4.1）のために説明したように、pHを測定する。 </li></ol> 5.タンパク質分析<ol><li> 6花粉のサンプルと各ケージからEBBとABBのサンプルを取る。 -20℃で保存サンプルは、可溶性タンパク質濃度を分析するまで。 </li><li> 0.1 Mリン酸緩衝液（PBS）1000μlの花粉またはbeebreadどちら20mgを混合する。 </li><li> Voは1分間571.2×gで10秒間遠心のための混合物をRTEX。 </li><li> 96ウェル平底EIA / RIAのポリスチレンプレートのウェルにおける上清と場所の10μlのサンプルを削除します。 3つのウェルに各サンプルを複製します。 </li><li>翼の結合点近くで胸部の右横の部分に（加熱し、針のように鋭いポイントに引っ張られていた）20μlの毛細管を挿入することにより、各ケージから収集した蜂から血リンパを描画します。腹部tergites間膜内に同じチューブを挿入することにより、必要に応じて、追加の血リンパを収集します。 </li><li> 0.1 M PBSの9μlに血リンパの1を添加する。可溶性タンパク質の分析まで-20℃で血リンパ液に保管してください。 </li><li>商業ブラッドフォードのタンパク質アッセイキットを使用して花粉、beebread、そして血リンパ試料中の全可溶性タンパク質濃度を決定します。製造元の指示に従ってください。 </li><li>可溶性タンパク質cを推定するために、標準曲線を確立ウシ血清アルブミン（BSA）中の既知のタンパク質濃度のタンパク質の吸光度を測定することにより試料中のoncentration。分光光度計を用いて595nmでのタンパク質の吸光度を測定します。 </li></ol> 6.アミノ酸分析<ol><li>各コロニーの櫛細胞からのプールの個々のサンプルは、分析のためのEBBとABBの代表的なサンプルを作成します。 </li><li> 50 mgの花粉を取るかbeebreadサンプルはオートサンプラーバイアルに秤量し、及びD 4 -アラニンからなる50 ng /μLで内部標準溶液100μlとともに、バイアルに1mlの蒸留水を追加し、D 23 -lauric酸、 13 C 6 -グルコースとD 39 -arachidiac酸。 </li><li> 5分間のサンプルおよび超音波処理に蓋を。 </li><li> beebreadまたは花粉試料1mlを加え、続いて1mlの蒸留水を添加することにより平衡化し、1mlのメタノールを添加することにより、HLBカートリッジを調整する。 5.0％のMeOH / H 2 OおよびELU 1mlでカートリッジを洗浄する80％のMeOH / H 2 O 1 mlのテ</li><li>窒素気流下で乾燥するまで試料を蒸発させる。ピリジンを50μl及びN、O-ビス（トリメチルシリル）トリフルオロアセトアミド+トリメチルクロロシラン（BSTFA + TMCS）の100μlのサンプルを再構成する。 </li><li> 30分間70℃でサンプルをキャップとインキュベートする。 </li><li>サンプルを冷却し、きれいなオートサンプラーバイアルに転送できるようにする。 </li><li>キャップおよび質量選択検出器に試料を配置し、両方の揮発性化合物及び有機酸のためのサンプルを分析するためにガスクロマトグラフにインターフェース。 1.0μmの膜厚でカラム（30 MX 0.25ミリメートルID）を使用してBSTFA + TMCSとのTMS誘導体化以下の砂糖および有機酸を分離します。 </li><li> 、2分間50℃のカラムオーブンを設定した後、5℃/分で290℃まで直線的に温度を上昇させる。そして7分間保持する。それぞれ、250℃および290℃のGCインジェクタとGC / MSインターフェースの設定。 <ol><li> FLOでのキャリアとしてヘリウムを使用してください1.0ミリリットル/分のwの速度。 230°CまでのMS源温度を設定します。 </li></ol></li><li>チューン、パーフルオロトリブチルアミン（PFTBA）で毎日の質量分析装置を校正。プレゼンスとアミノ酸の濃度に関するデータを取得するためにフルスキャン（35から700 AMU）、陽イオンモードでPFTBA1μlの注入を使用してください。 </li></ol>

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M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Morphometric+and+genetic+changes+in+a+population+of+Apis+mellifera+after+34+years+of+Africanization.">Morphometric and genetic changes in a population of Apis mellifera after 34 years of Africanization.</a> Genet. Mol. Res. 8 (2), 709-717 (2009).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

上記の方法を用いて、我々は、AHB製beebreadはAHBとEHB両方でより大量に消費されたことがわかった。 EHBとAHBはbeebreadの各タイプの同様の量を消費しますが、AHBは、より高い血リンパタンパク質力価を有した。 AHBにおける体液タンパク質レベルの両方が、同じ飼料26を与えたにもかかわらずEHBを上回った場合に我々の方法に基づく知見は、以前の報告と同様であった。 EHBとAHBの両方によって異なる速度で消費されたEBBとABBの消費量を測定することは、各亜種における体液のタンパク質濃度は、食物消費を増加させることによって上昇させることができなかったことが判明した。看護師の蜂の時代の労働者と高原の設定ポイントがEHBよりAHBで高くなるよう体液タンパク質濃度のために高原があるようです。 花粉ストレージの速度を最適化するbeebread生産のためのコロニーを確立するためのいくつかの重要な条件がある。まず、共同loniesはオープンひなを持つフレームを必要としています。養うために開いたひながなければ、労働者は非常に花粉を収集することはありません。追加のひなが発生しないので、第二に、コロニーがqueenlessでなければなりません。ひな飼育花粉を大量に必要とし、唯一の過剰花粉が格納される。 EFAに設立された小さなコロニーでは、コロニーがqueenlessする必要がので、ひなエリアが拡大された場合beebreadとして格納されるために少し花粉があるでしょう。最後に、形成されるbeebreadために、花粉corbicular負荷として収集する必要があり、櫛セルに格納される。花粉が花粉トラップ内に回収される場合、それらはcorbicular負荷として、それを収集することができますので、それが蜂に提示する前に微粉末に粉砕しなければならない。 beebreadの消費量を測定する方法ではなく絶対的な推定値より質的に生成。細胞が完全にミツバチのパンを空にしたときにカウントされた唯一の消費でした。総蜂パンの消費のより正確な推定値がハチbrのを除去することによって得られるであろう細胞からのE​​ADと研究期間の前後に重量を測定することができたパテにそれを作る。しかし、我々は、彼らが植民地で、おそらく研究期間中にそれを処理し続けるようにミツバチがそれを餌にすることができるように細胞内の蜂パンを維持したい。ミツバチが一部の細胞でそれらに供給された希釈された蜂蜜を入れているため重量が増加している可能性があるため、調査前と後の櫛部の重量差は、消費量の推定値として使用されませんでした。 労働者も蜂のパンに希釈した蜂蜜のいくつかを追加した可能性があります。これらの理由から、給餌期間の前後蜂パンのほぼ等量を含有する細胞を計数し、定性​​的な測定値を生成した。それでも、11日後にEBBと比べてカウント空のABB細胞数のbeebreadの2種類の間の顕著な違いがあった。 格納された花粉がbeebreadがディ可能になったときに決定ミツバチが継続的に細胞に花粉を追加するためfficult。ミツバチが花粉を集めたいのでbeebreadを製造するために使用したコロニーを開いたひなの枠で設立された。コロニーが確立された後にのみ約9日間養うために幼虫があったので、しかし、コロニーがqueenlessた。コロニーがEFAにあった3週間の期間の残りの部分では、ミツバチが集めた花粉を貯蔵し、beebreadに変換される。ケージでミツバチに送り、またbeebread花粉の処理を継続している場合があり、追加の11日間櫛細胞において保存された花粉を維持する。蜂のパンへの花粉の転化率は約7日間8かかります。 EHBとAHBに送らbeebreadはより低いpHを有し、花粉給餌に比べてタンパク質濃度を減少させた。変換beebread後の花粉の変化の同様の知見は、他の人7,10,27によって報告されている。濃度Oの違いがあったという点で、我々の結果は、しかし、これまでの報告とは異なっbeebreadと花粉の間にF特定のアミノ酸。両方のタンパク質およびアミノ酸濃度の変化は、タンパク質分解酵素の活性に起因する可能性があり、ソースのは、ミツバチ自身またはbeebread 7,8,28,29に設立された微生物群集可能性があります。 タンパク質濃度を測定するために使用される方法は、以前にAfricanizedおよびヨーロッパミツバチ26上の食事性タンパク質の効果を決定するために記載したものと同様であった。メソッドの拡張として、私たちは花粉とbeebreadに可溶性タンパク質を推定することができました。これらの方法は、以前の報告7,10,27と同様の所見を生成した。今回の知見は、AHBをより効率的にEHBよりも食事タンパク質を同化することを、これはそれが移住して30〜32を確立されているほとんどの地域でのAHBの生態優位性の重要な要因となる可能性があることを追加の証拠を提供する。

栄養は、ミツバチコロニーの健康と活力でそして集団としての設立に基本的な役割を果たしている。食物から栄養素は、エネルギーとひな飼育、体温調節のために必要な生化学成分、採餌し、免疫応答を提供する。ミツバチコロニーについて、コロニー集団を成長し、自分の健康を維持するために必要な栄養素は蜜や花粉から来る。ネクターは、炭水化物を提供し、花粉は、タンパク質、脂質、ビタミン、ミネラル1と残りの栄養要件を提供しています。 ミツバチの亜種は、このような労働者の長寿、ひな飼育、および社会的な免疫2-6のメカニズムなど栄養的に基づいて、コロニーレベルのパラメータに異なる場合があります。これらの違いは、食品、特に花粉はコロニーによって処理され、個人の中で消化されている方法にリンクされる場合があります。花粉櫛セルに格納され、微生物を介して媒介される乳酸発酵は、化学的に変更される<sup&gt; 7-10。発酵した花粉はbeebreadと呼ばれている。そこに彼らが集める花粉から栄養素を取得し、保存する能力において亜種間の遺伝子型の違いかもしれないし、これは、コロニーの成長と生存に影響を与える可能性があります。食品加工や栄養取得による遺伝子型の効果は同じ食べ物11-14を消費しながら、他のものより栄養素やカロリーを得るために、いくつかの個体を引き起こす他の生物に記載されています。 ここでは、ミツバチの異なる亜種によって作らbeebreadの組成及び消費量を比較するために使用される方法について説明します。働きバチで生じた体液タンパク質力価を測定するための方法もまた記載されている。 beebreadの栄養組成に関するこれまでの研究では、ヨーロッパのミツバチ（EHB）10,15,16を用いて行った。しかし、それらは同じ花粉を餌場合でも、異なる亜種のミツバチによって作らbeebreadに違いがあるかもしれません。これらの潜水艦のでEHBとAHBを比較したpeciesは食品加工や栄養買収17に関連している可能性があり明確な行動や生理的な違いがあります。最も顕著な違いの中には、AHBが収集し、EHBより多くの花粉を消費し、ひな18により容易にそれを変換するように見えるということです。 AHBコロニーはEHBよりも高いスウォーミング率を持っており、食糧資源が限られた19〜23になったときに持ち逃げ。失踪はEHBに稀である。 AHBもEHB 24よりも高い代謝率を持っている。それはbeebreadに変換された後、EHBとAHB間のコロニーレベル差のための栄養基礎花粉回収率にも、その栄養成分（ 例えば 、アミノ酸、タンパク質）に関連するかもしれない。 Beebread消費量と得られたタンパク質の取得もEHBとAHB間のコロニーレベル差で役割を果たし得る。開発された方法を用いて、EHBとAHBは、同一の花粉源からbeebreadた。 beebreadその後、EACのミツバチにフィードバックされましたH亜種とミツバチが自分の亜種またはbeebreadのソースに独特の方法で、beebreadからタンパク質を取得するかどうかを判断することができます。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0" width="792">
	<tbody>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;width:308px;">Name of the Material/Equipment</td>
			<td style="width:153px;">Company</td>
			<td style="width:140px;">Catalog Number</td>
			<td style="width:191px;">Comments/Description</td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">waterproof double junction pH spear&#160;</td>
			<td>Thermo Fisher</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td>Scientific</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Coffee Grinder</td>
			<td>Mr. Coffee&#160;</td>
			<td>model 1DS77</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Dulbecco&#39;s phosphate buffer solution</td>
			<td>Emd-millipore</td>
			<td>BSS-1005-B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">EIA/RIA polystyrene plate</td>
			<td>Sigma-Aldrich-Corning</td>
			<td align="left">CLS3590-100EA</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">microcapillary pipets</td>
			<td>Kimble Glass Inc.</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Quick Start Bradford Protein Assay Kit 2&#160;</td>
			<td>Bio-Rad</td>
			<td>#500-0202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td>Laboratories</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Spectrophotometer</td>
			<td>Biotek Synergy HT&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Mass Selective Detector&#160;</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>5973N</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">HLB cartridge</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">gas chromatograph&#160;</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>6930</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">&#160;gas chromatography column&#160;</td>
			<td>A J&#38;W Scientific&#160;</td>
			<td>DB-1701</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">d4-alanine&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>488917</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="24">
			<td height="24" style="height:24px;">d23-lauric acid</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>451401</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="25">
			<td height="25" style="height:25px;">13C6-glucose</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>389374</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Pyridine&#160;</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>270970</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">N,O-Bis (trimethylsilyl)trifluoroacetamide +&#160;&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;">Trimethylchlorosilane (BSTFA + TMCS)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>33148</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="21">
			<td height="21" style="height:21px;">Perfluorotributylamine (PFTBA)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>442747-U</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="23">
			<td height="23" style="height:23px;">d39-arachidiac acid</td>
			<td>Cambridge Isotope&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr height="20">
			<td height="20" style="height:20px;"></td>
			<td>Laboratories</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

methods for comparing nutrients in beebread made by africanized and european honey bees and the effects on hemolymph protein titers

ミツバチはbeebreadとしてハイブに、彼らが集めた花粉や店舗からの栄養素を得る。私たちは、ミツバチが収集し、特別に構築囲まれた飛行領域にコロニーを置くことによってbeebreadに変換花粉源を制御するための方法を開発しました。方法は、花粉やbeebreadのタンパク質およびアミノ酸組成を分析するために開発された。またbeebreadの消費量を測定した方法が出現した後、4,7及び11日間beebreadを食べた後の大人の労働者蜂の血リンパタンパク質力価を決定するために使用した方法について説明します。方法は、遺伝子型はbeebreadハチが消費率及びそれからタンパク質を取得するための花粉への変換に影響するかどうかを決定するために適用した。二つの亜種（ヨーロッパとAfricanizedミツバチ、それぞれEHBとAHB）は、同じ花粉源を備えた。開発された方法に基づいて、両方の亜製beebread花粉より低いタンパク質濃度およびpH値を有していた。一般に、アミノ酸コンEHBまたはAHBいずれかによって行わbeebreadでcentrationsは同様であったと花粉よりもbeebreadで高いレベルで発生した。 AHBとEHBの両方がEHBによってよりもAHBによってなさbeebreadのかなり多くを消費する。 EHBとAHBはbeebreadの各タイプの同様の量を消費しますが、AHBにおける体液タンパク質濃度は、EHBを上回りました。 AHBとEHB間のタンパク質獲得の違いは、それぞれの亜種が進化の地域に関連した環境適応を反映することがあります。これらの違いが原因ひな飼育とコロニー成長への影響の新世界でAHB集団の成功確立に貢献することができる。

<html> Beebreadは、pHおよびタンパク質濃度について、およびアミノ酸分析前に約4ヶ月間分析する前に、月未満の-80℃で保存した。 Beebreadは、pHおよびタンパク質濃度（ 図1）における花粉異なっていた。タンパク質濃度であったようbeebreadのpHは、花粉より低かった。 EHBとAHBの両方がEBB（ 図2）よりも多くのABBを消費した。 AHBの体液中の可溶性タンパク質のレベルに関係なく消費beebreadのタイプのEHB（ 図3）よりも有意に高かった。 EHBとAHBはbeebreadの各タイプの同様の量を消費していても体液タンパク質レベルにおけるこれらの相違が発生した。サンプリング時のハチの年齢はかなり血リンパ中の可溶性タンパク質濃度に影響を与えた。タンパク質濃度は差がなかった日-7または11と比較して一日-4ハチに有意に低かった。 ミツバチのために必須である10個のアミノ酸の_contentは&quot;&gt;、ヒスチジンが、すべての花粉で検出された。ほとんどの場合、beebreadで測定されたアミノ酸濃度（ 図4）。例えば、濃度の花粉よりも高かったロイシンおよびスレオニンは花粉と比較beebreadで約60％増加した、およびバリンの濃度は、約25％高かった。アラニン、アスパラギン酸、グルタミン、およびメチオニンレベルはまた花粉よりbeebreadにおいて高かった。アミノ酸濃度は間で大きく異ならなかったフェニルアラニンおよびシステインを除いて、ABBとEBB。フェニルアラニンレベルはEBBまたは花粉のいずれかと比較ABBにおいて約2倍高かった。システイン濃度は、ABBまたは花粉と比較EBBで低かった。トリプトファンはより高い濃度でのみ存在するアミノ酸であったEBBまたはABBに比べて花粉。花粉におけるプロリンの濃度とABBはEBBを上回りました。 図1：花粉とヨーロッパ（EHB）またはAfricanized（AHB）ミツバチによって作らbeebread中のpHの比較（A）および可溶性タンパク質濃度（B）。花粉のpHは、分散分析によって決定されるようbeebreadよりも有意に高かった（F 2,12 = 3725に、p &lt;0.0001）W-チューキーの多重比較検定を行った。花粉中のタンパク質濃度は、EHB（EBB）またはAHB（ABB）製beebreadにおけるよりも有意に高かった（F 2,27 = 16.49であり; p &lt;0.0001）。同じ文字が続く手段は0.05レベルで有意差はありません。 <img alt="図2" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52448/52448fig2highres.jpg" width="600" /> 図2：セルの平均割合完全にケージミツバチによる11日の間隔で消費されたbeebreadを含むLS。beebreadが同じ花粉源を用いて、いずれかのヨーロッパ（EHB）またはAfricanized（AHB）ミツバチによって作られた。手段は各治療の5ケージから推定した。分散の一方向分析（F 3,16 = 7.3、p = 0.003）およびTukeyのW検定によって決定されるように同じ文字を有するものは、0.05レベルで有意に異なっていない。この図は、25から変更されている。 <img alt="図3" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52448/52448fig3highres.jpg" width="600" /> 図3：4、7、および11日間のヨーロッパ（EBB）またはAfricanized（ABB）ミツバチによって作らヨーロッパ（EHB）またはAfricanizedから血リンパ中のタンパク質の平均濃度（AHB）ミツバチ供給beebreadの反復測定分析。分散は4トリートメントルームの間で有意差が示されたtment基（F 3,20 = 19.7、p &lt;0.001）。 AHB給餌ABB中の可溶性タンパク質のレベルは、EHB給餌ABBた（p = 0.008）またはEBBた（p = 0.018）よりも有意に高かった。サンプリング時のハチの年齢はかなり血リンパ中の可溶性タンパク質濃度に影響を与えた。レベルは7日目に（p &lt;0.0001）または11た（p = 0.001）と比較して一日4ハチで有意に低かった。 7日目とday11蜂た（p = 0.149）で差がなかった。この図は、25から変更されている。 <img alt="図4" fo:content-width="6in" src="/files/ftp_upload/52448/52448fig4highres.jpg" width="600" /> 図4：アミノ酸の濃度（花粉のグラム当たりμgのかbeebread）花粉中またはそれ EBB から作られたbeebreadは、ヨーロッパのミツバチによって作らbeebreadされており、ABBはAfricanizedミツバチによって作られた。トリプトファン、システイン、フェニルアラニン、プロリン、プレで明瞭にするために別々にプロットしたその量をセンディング。この図は、25から変更されている。

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Methods for Comparing Nutrients in Beebread Made by Africanized and European Honey Bees and the Effects on Hemolymph Protein Titers

Here are methods to quantify nutrients in pollen before and after its conversion to beebread by two subspecies of honeybees. We describe techniques to measure beebread consumption and resulting protein titers in both subspecies.

Africanizedと欧州のハニーミツバチによって作らBeebreadで栄養素を比較するための方法及び体液タンパク質力価への影響

Honey bees obtain nutrients from pollen they collect and store in the hive as beebread. We developed methods to control the pollen source that bees ...

methods-for-comparing-nutrients-beebread-made-africanized-european

Research

JoVE Journal

Biology

10.5K ビュー.  USDA-ARS. Here are methods to quantify nutrients in pollen before and after its conversion to beebread by two subspecies of honeybees. We describe techniques to measure beebread consumption and resulting protein titers in both subspecies. 

ビデオ: Methods for Comparing Nutrients in Beebread Made by Africanized and European Honey Bees and the Effects on Hemolymph Protein Titers

Monitoring Acupuncture Effects on Human Brain by fMRI

Functional MRI is used to study the effects of acupuncture on the BOLD response and the functional connectivity of the human brain.  Results demonstrate that acupuncture mobilizes a limbic-paralimbic-neocortical network and its anti-correlated sensorimotor/paralimbic network at multiple levels of the brain and that the hemodynamic response is influenced by the psychophysical response.  Physiological monitoring may be performed to explore the peripheral response of the autonomic nerve function. This video describes the studies performed at LI4 (hegu), ST36 (zusanli) and LV3 (taichong), classical acupoints that are commonly used for modulatory and pain-reducing actions. Some issues that require attention in the applications of fMRI to acupuncture investigation are noted.

FMRI and physiological monitoring is used to study the effects of Acupuncture on the central and peripheral nervous systems. Acupuncture mobilizes a limbic-paralimbic-neocortical network, with great overlap with the default mode network, to modulate neurological activity, possibly related to its autonomic effect in the peripheral nervous system.

fMRIによるヒト脳機能に対する鍼の効果のモニタリング

Functional MRI is used to study the effects of acupuncture on the BOLD response and the functional connectivity of the human brain.  Results demonstrate ...

生物学

Purification of the M. magneticum Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&Delta;41

Magnetotactic bacteria comprise a diverse group of aquatic microorganisms that are able to orientate themselves along geomagnetic fields. This behavior is believed to aid their search for suitable environments (1). This capability is conferred by the magnetosome, a subcellular organelle that consists of a linear-chain assembly of lipid vesicles each able to biomineralize and enclose a ~50-nm crystal of magnetite or greigite. A principle component of the magnetosome that was shown to be required for the formation of functional vesicles is MamA. MamA is a highly abundant magnetosome-associated protein which is one of the most characterized magnetosome-associated proteins in vivo (2-6). This article focuses on the purification of MamA, which despite being studied in vivo, no clear functional or structural details have been identified for it. Bioinformatics analysis suggested that MamA is a tetra-tricopeptide repeat (TPR) containing protein. TPR is a structural motif found as such or forming part of a bigger fold in a wide range of proteins, it serves as a template for protein-protein interactions and mediates multi-protein complexes (7). TPRs are involved in many crucial tasks in eukaryotic cell organelle processes and many bacterial pathways (8-14). In order to understand MamA, a unique TPR containing protein, highly purified protein is required as a first step. In this article, we present the purification protocol for a stable MamA deletion mutant (MamA&Delta;41) from M. magneticum AMB-1.

Purification of the &lt;em&gt;M. magneticum&lt;/em&gt; Strain AMB-1 Magnetosome Associated Protein MamA&amp;Delta;41

MamA is a unique Magnetosome associated protein which was shown to be involved in magnetosome activation. Here we present the purification protocol of MamA deletion mutant (MamA&Delta;41) from M. magneticum AMB-1.

の精製 M. magneticum株AMB - 1 Magnetosome関連タンパク質MamAΔ41

Magnetotactic bacteria comprise a diverse group of aquatic microorganisms that are able to orientate themselves along geomagnetic fields. This behavior is ...

Combining Single-molecule Manipulation and Imaging for the Study of Protein-DNA Interactions

The paper describes the combination of optical tweezers and single molecule fluorescence detection for the study of protein-DNA interaction. The method offers the opportunity of investigating interactions occurring in solution (thus avoiding problems due to closeby surfaces as in other single molecule methods), controlling the DNA extension and tracking interaction dynamics as a function of both mechanical parameters and DNA sequence. The methods for establishing successful optical trapping and nanometer localization of single molecules are illustrated. We illustrate the experimental conditions allowing the study of interaction of lactose repressor (lacI), labeled with Atto532, with a DNA molecule containing specific target sequences (operators) for LacI binding. The method allows the observation of specific interactions at the operators, as well as one-dimensional diffusion of the protein during the process of target search. The method is broadly applicable to the study of protein-DNA interactions but also to molecular motors, where control of the tension applied to the partner track polymer (for example actin or microtubules) is desirable.

Here we describe the instrumentation and methods for detecting single fluorescently-labeled protein molecules interacting with a single DNA molecule suspended between two optically trapped microspheres.

タンパク質-DNA相互作用の研究のための単一分子マニピュレーションとイメージングを組み合わせる

The paper describes the combination of optical tweezers and single molecule fluorescence detection for the study of protein-DNA interaction. The method ...

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

One of the cardinal processes of inflammation is the infiltration of immune cells from the lumen of the blood vessel to the surrounding tissue. This occurs when endothelial cells, which line blood vessels, become adhesive to circulating immune cells such as monocytes. In vitro measurement of this adhesiveness has until now been done by quantifying the total number of monocytes that adhere to an endothelial layer either as a direct count or by indirect measurement of the fluorescence of adherent monocytes. While such measurements do indicate the average adhesiveness of the endothelial cell population, they are confounded by a number of factors, such as cell number, and do not reveal the proportion of endothelial cells that are actually adhesive. Here we describe and demonstrate a method which allows the enumeration of adhesive cells within a tested population of endothelial monolayer. Endothelial cells are grown on glass coverslips and following desired treatment are challenged with monocytes (that may be fluorescently labeled). After incubation, a rinsing procedure, involving multiple rounds of immersion and draining, the cells are fixed. Adhesive endothelial cells, which are surrounded by monocytes are readily identified and enumerated, giving an adhesion index that reveals the actual proportion of endothelial cells within the population that are adhesive.

Quantitation of Endothelial Cell Adhesiveness In Vitro

We report an in vitro method that allows the quantitation of the actual number of adhesive cells within an endothelial cell monolayer.

内皮細胞接着性の定量<em&gt;インビトロ</em

One of the cardinal processes of inflammation is the infiltration of immune cells from the lumen of the blood vessel to the surrounding tissue. This ...

Gap Junctional Intercellular Communication: A Functional Biomarker to Assess Adverse Effects of Toxicants and Toxins, and Health Benefits of Natural Products

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer (SL-DT) technique that measures intercellular communication through gap junction channels, which is a major intercellular process by which tissue homeostasis is maintained. Interruption of gap junctional intercellular communication (GJIC) by toxicants, toxins, drugs, etc. has been linked to numerous adverse health effects. Many genetic-based human diseases have been linked to mutations in gap junction genes. The SL-DT technique is a simple functional assay for the simultaneous assessment of GJIC in a large population of cells. The assay involves pre-loading cells with a fluorescent dye by briefly perturbing the cell membrane with a scalpel blade through a population of cells. The fluorescent dye is then allowed to traverse through gap junction channels to neighboring cells for a designated time. The assay is then terminated by the addition of formalin to the cells. The spread of the fluorescent dye through a population of cells is assessed with an epifluorescence microscope and the images are analyzed with any number of morphometric software packages that are available, including free software packages found on the public domain. This assay has also been adapted for in vivo studies using tissue slices from various organs from treated animals. Overall, the SL-DT assay can serve a broad range of in vitro pharmacological and toxicological needs, and can be potentially adapted for high throughput set-up systems with automated fluorescence microscopy imaging and analysis to elucidate more samples in a shorter time.

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer technique that measures intercellular communication through gap junction channels. Gap junctional intercellular communication is a major cellular process by which tissue homeostasis is maintained and disruption of this cell signaling has adverse health effects.

ギャップ結合細胞間コミュニケーション：毒物および毒素の有害効果を評価するための機能バイオマーカー、および天然物の健康上の利点

This protocol describes a scalpel loading-fluorescent dye transfer (SL-DT) technique that measures intercellular communication through gap junction ...

Comparison of Tobacco Host Cell Protein Removal Methods by Blanching Intact Plants or by Heat Treatment of Extracts

Plants not only provide food, feed and raw materials for humans, but have also been developed as an economical production system for biopharmaceutical proteins, such as antibodies, vaccine candidates and enzymes. These must be purified from the plant biomass but chromatography steps are hindered by the high concentrations of host cell proteins (HCPs) in plant extracts. However, most HCPs irreversibly aggregate at temperatures above 60 &#176;C facilitating subsequent purification of the target protein. Here, three methods are presented to achieve the heat precipitation of tobacco HCPs in either intact leaves or extracts. The blanching of intact leaves can easily be incorporated into existing processes but may have a negative impact on subsequent filtration steps. The opposite is true for heat precipitation of leaf extracts in a stirred vessel, which can improve the performance of downstream operations albeit with major changes in process equipment design, such as homogenizer geometry. Finally, a heat exchanger setup is well characterized in terms of heat transfer conditions and easy to scale, but cleaning can be difficult and there may be a negative impact on filter capacity. The design-of-experiments approach can be used to identify the most relevant process parameters affecting HCP removal and product recovery. This facilitates the application of each method in other expression platforms and the identification of the most suitable method for a given purification strategy.

Three heat precipitation methods are presented that effectively remove more than 90% of host cell proteins (HCPs) from tobacco extracts prior to any other purification step. The plant HCPs irreversibly aggregate at temperatures above 60 &#176;C.

無傷の植物をブランチングすることによって、または抽出物の熱処理によりタバコ宿主細胞タンパク質の除去方法の比較

Plants not only provide food, feed and raw materials for humans, but have also been developed as an economical production system for biopharmaceutical ...

Monitoring Colony-level Effects of Sublethal Pesticide Exposure on Honey Bees

The effects of sublethal pesticide exposure to honey bee colonies may be significant but difficult to detect in the field using standard visual assessment methods. Here we describe methods to measure the quantities of adult bees, brood, and food resources by weighing hives and hive parts, by photographing frames, and by installing hives on scales and with internal sensors. Data from these periodic evaluations are then combined with running average and daily detrended data on hive weight and internal hive temperature. The resulting datasets have been used to detect colony-level effects of imidacloprid applied in a sugar syrup as low as 5 parts per billion. The methods are objective, require little training, and provide permanent records in the form of sensor output and photographs.

Sublethal doses of pesticides may affect colonies in ways that are difficult to detect using only periodic or visual methods. Methods to measure total adult bee mass, brood, and food resources by weighing hives and hive parts, photographing frames, and installing sensors, are provided. Data analysis is also addressed.

致死の農薬暴露の蜂蜜の蜂のコロニー レベルの効果を監視

The effects of sublethal pesticide exposure to honey bee colonies may be significant but difficult to detect in the field using standard visual assessment ...

Methods to Study Changes in Inherent Protein Aggregation with Age in Caenorhabditis elegans

In the last decades, the prevalence of neurodegenerative disorders, such as Alzheimer's disease (AD) and Parkinson's disease (PD), has grown. These age-associated disorders are characterized by the appearance of protein aggregates with fibrillary structure in the brains of these patients. Exactly why normally soluble proteins undergo an aggregation process remains poorly understood. The discovery that protein aggregation is not limited to disease processes and instead part of the normal aging process enables the study of the molecular and cellular mechanisms that regulate protein aggregation, without using ectopically expressed human disease-associated proteins. Here we describe methodologies to examine inherent protein aggregation in Caenorhabditis elegans through complementary approaches. First, we examine how to grow large numbers of age-synchronized C. elegans to obtain aged animals and we present the biochemical procedures to isolate highly-insoluble-large aggregates. In combination with a targeted genetic knockdown, it is possible to dissect the role of a gene of interest in promoting or preventing age-dependent protein aggregation by using either a comprehensive analysis with quantitative mass spectrometry or a candidate-based analysis with antibodies. These findings are then confirmed by in vivo analysis with transgenic animals expressing fluorescent-tagged aggregation-prone proteins. These methods should help clarify why certain proteins are prone to aggregate with age and ultimately how to keep these proteins fully functional.

Methods to Study Changes in Inherent Protein Aggregation with Age in Caenorhabditis elegans

The goal of the method presented here is to explore protein aggregation during normal aging in the model organism C. elegans. The protocol represents a powerful tool to study the highly insoluble large aggregates that form with age and to determine how changes in proteostasis impact protein aggregation.

線虫の加齢とともに固有の蛋白質の集合の変化を研究するためのメソッド

In the last decades, the prevalence of neurodegenerative disorders, such as Alzheimer's disease (AD) and Parkinson's disease (PD), has grown. These ...

Quantification of Site-specific Protein Lysine Acetylation and Succinylation Stoichiometry Using Data-independent Acquisition Mass Spectrometry

Post-translational modification (PTM) of protein lysine residues by N&#400;-acylation induces structural changes that can dynamically regulate protein functions, for example, by changing enzymatic activity or by mediating interactions. Precise quantification of site-specific protein acylation occupancy, or stoichiometry, is essential for understanding the functional consequences of both global low-level stoichiometry and individual high-level acylation stoichiometry of specific lysine residues. Other groups have reported measurement of lysine acetylation stoichiometry by comparing the ratio of peptide precursor isotopes from endogenous, natural abundance acylation and exogenous, heavy isotope-labeled acylation introduced after quantitative chemical acetylation of proteins using stable isotope-labeled acetic anhydride. This protocol describes an optimized approach featuring several improvements, including: (1) increased chemical acylation efficiency, (2) the ability to measure protein succinylation in addition to acetylation, and (3) improved quantitative accuracy due to reduced interferences using fragment ion quantification from data-independent acquisitions (DIA) instead of precursor ion signal from data-dependent acquisition (DDA). The use of extracted peak areas from fragment ions for quantification also uniquely enables differentiation of site-level acylation stoichiometry from proteolytic peptides containing more than one lysine residue, which is not possible using precursor ion signals for quantification. Data visualization in Skyline, an open source quantitative proteomics environment, allows for convenient data inspection and review. Together, this workflow offers unbiased, precise, and accurate quantification of site-specific lysine acetylation and succinylation occupancy of an entire proteome, which may reveal and prioritize biologically relevant acylation sites.

Here, we present unbiased quantification of site-specific protein acetylation and/or succinylation occupancy (stoichiometry) of an entire proteome through a ratiometric analysis of endogenous modifications to modifications introduced after quantitative chemical acylation using stable isotope-labeled anhydrides. In combination with sensitive data-independent acquisition mass spectrometry, accurate site occupancy measurements are obtained.

部位特異的タンパク質のリジンのアセチル化のサクシニル化化学量論組成データに依存しない取得質量分析法による定量

Post-translational modification (PTM) of protein lysine residues by N&#400;-acylation induces structural changes that can dynamically regulate protein ...

Detecting and Characterizing Protein Self-Assembly In Vivo by Flow Cytometry

Protein self-assembly governs protein function and compartmentalizes cellular processes in space and time. Current methods to study it suffer from low-sensitivity, indirect read-outs, limited throughput, and/or population-level rather than single-cell resolution. We designed a flow cytometry-based single methodology that addresses all of these limitations: Distributed Amphifluoric FRET or DAmFRET. DAmFRET detects and quantifies protein self-assemblies by sensitized emission FRET in vivo, enables deployment across model systems-from yeast to human cells-and achieves sensitive, single-cell, high-throughput read-outs irrespective of protein localization or solubility.

This article describes a FRET-based flow cytometry protocol to quantify protein self-assembly in both S. cerevisiae and HEK293T cells.