VSRは、IIFマリー·キュリー·グラント（： シロイヌナズナで電気信号を誘導した創傷EARTHにおける創傷の略）によってサポートされていました。

1.アブラムシ飼育注：EPGの録音のための植物とアブラムシ種の選択は、研究目的に応じて異なります。 シロイヌナズナの研究のために、アブラムシBrevicoryneのアブラナ科が適切です。 <ol><li>リアB.キャベツの温室でアブラナ科アブラムシ 。他の植物を汚染しないために、ケージにアブラムシの飼育に使用される植物を保管してください。アブラムシを用いた実験植物の汚染を避けるために、別々の部屋に（私たちのケースBのキャベツとシロイヌナズナにおける）アブラムシ飼育植物と実験プラントをしてください。 </li><li>重要な植物の損傷を引き起こす、または人口過剰に到達する前に、2週間毎に約新鮮な植物にアブラムシを転送します。新しい植民地を開始するために、新鮮な飼育所に10-20大人のアブラムシを転送します。 </li><li>不要なアブラムシ種、他の昆虫草食動物、アブラムシの寄生、およびフォンによる汚染のために定期的に植物を飼育監視アブラムシのコロニーの健康に影響を与える可能性がある私。 </li><li> EPG録画のための彼らの最終脱皮後の一週間に成人、無翅アブラムシアップを収集します。 </li><li>彼らは多くの場合、誤って他の植物を汚染する可能性の記録、中に生成されたいくつかの子孫を持っているように実験の後、成長室に使用されなかった実験プラントを返します。 </li></ol> EPG録画用2昆虫の配線<ol><li>昆虫の電極を作製するために、真鍮のコネクタピン（釘、Ø1.2ミリメートル）、細い銅線（Ø0.2ミリメートル）、非常に細い金線（Ø約20ミクロン）、水ベースの銀接着剤、と単純な小さなはんだ付けボルトを得ますはんだ液と樹脂入りはんだ線、倍率10倍、小さなハサミやメス、2細かい鉗子、および発泡スチロールのシートやボックスと実体顕微鏡。注：ボルテックスミキサーが便利かもしれません。注記：電極を作るためのステップバイステップのプロトコルは、 図2に示されています。 </li><li>アブラムシのための取扱い及びグルーアプリケーションは、取得：小とソフト水彩ラクダの毛のブラシ（サイズ2以下）や、昆虫のコレクションのために使用されるもののような昆虫のピンを、細かい縫い針や爪楊枝は、同様に動作することがあります。ステップ4は、EPG録画を開始する方法を示しています。 </li><li>ステップ1。 注：1と2は、以下の昆虫電極マイナスアブラムシを調製する方法を示し、手順。ステップ3は、電極にアブラムシを接続する方法を示します。アブラムシの真空固定は、配線時にお勧めしますが、常に動きの遅い種（ 例えば、B。アブラナ科 ）のために必要とされていません。 <ol><li>はんだ付けボルトに切り替えて、その先端（ 図2A）で、いくつかのはんだ付け、ワイヤを溶融します。いくつかのはんだ液（ 図2B）と真鍮のコネクタピンの頭を少し湿らせ、溶融はんだ金属（ 図2C）にそれを浸し。 </li><li>細い銅線1〜2cmの長尺片の一端に溶融したはんだ金属の被覆を適用します（ 図2D）。その後、ホットボルト（ 図2E）に対して一緒にピンと銅線を持参し、（ 図2F）を冷却して凝固離れて、それらを一緒に移動します。 </li></ol></li><li>ステップ2。 <ol><li>滑らかなエマルジョンが表示されるまで徹底的に数分間銀接着剤でバイアルを振る（またはボルテックス）。カット（はさみまたはメス）実体顕微鏡（ 図2G）のオブジェクト板上の金ワイヤ（長さの約1.5センチ）のいくつかの作品。 </li><li> （セクション2.3で行った）はんだ付け銅線と真鍮のピンを取ると（ 図2H）、それを開いた後、バイアルの蓋の内側に集まっているであろう小さな銀の接着剤溜まりに銅線の自由端を浸し。注：唯一の小さな滴が必要とされています。 </li><li>実体顕微鏡オブジェクト板上に接着剤を塗りつけ避けるために、一方の端を持ち上げながら、金ワイヤの一部に銅線の接着剤に浸した端を移動します。 coppeに重なるようにしてください2本のワイヤの重なりに沿って接着剤を配布数mm（ 図2I）、のためのrと金線。 </li><li>接着剤が団結ワイヤを維持するのに十分乾燥されるまで待ちます。乾燥後の接着剤の接触を確認し、参加ワイヤの一部が接着剤を含まない部分を表示する場合には、小さいピンまたは銅線の他の作品にいくつかの新鮮な接着剤を追加します。 </li><li>昆虫電極の準備ができた後、発泡スチロールの作品に挿入し、例えば、それを格納します。 注：金ワイヤの長さは、アブラムシの移動の自由を決定します：それは（5mm未満）が短すぎる場合にアブラムシが制約を感じることがあり、正常に動作しません。それは（&gt; 2のCM）長すぎる場合、アブラムシが自由に移動します。アブラムシはに許可されている場合、葉の向軸側に移動する傾向があります。金線が葉に触れると、信号が短絡されます。 </li></ol></li><li>ステップ3。 <ol><li>アブラムシは、真空を用いて、光吸引によって所定の位置に保持することができます。この場合には、Tを取り付け彼は実体顕微鏡下でデバイスを吸引します。視野の中心に吸引口を配置します。 </li><li>完全に滑らかなエマルションが形成されるまで、数分（またはボルテックス）のための銀接着剤でバイアルを振ります。小さなブラシでアブラムシを収集します。 </li><li>腹部の背面に、吸引装置のスイッチをオンにし、吸込口（ 図2J）のアブラムシをマウントするには、実験者になりました。細かいブラシで、腹部（キャベツのアブラムシに豊富）から任意の表面ワックスを削除します。 </li><li>接着剤バイアルを開き、銀接着剤（ 図2K）の非常に小さな液滴でピンを濡らします。アブラムシの腹部（ 図2L-M）の背面に銀接着剤の液滴を適用します。激しく再び接着剤バイアルを振ると、最初の上に銀接着剤の第二の液滴を追加し、数分の間に、この液滴が完全に乾燥してみましょう。注：銀接着剤は、電気伝導体であるが、それは重要なことはありません昆虫のキューティクルの損傷。 </li><li>接着剤バイアルを閉じた後、湿った液滴に金ワイヤの自由端を挿入します（ 図2N）接着剤が完全に乾燥させながら、まだ線を保ちます。脚や触角上に接着剤を塗りつけ避けるため、これが起こった場合にアブラムシを破棄します。 </li><li>吸引固定装置のスイッチをオフにし、慎重に昆虫（ 図2O）を持ち上げます。必要に応じて、吸引装置からのアブラムシの持ち上げを支援するために、微細なブラシを使用しています。 注意：配線Bを彼らは、その腹部にウェットグルーのドロップを適用した後に解除されないように、十分なグリップとアブラムシを提供して粗い表面が精密実験室の組織片、上に配線することができるようにアブラナ科は 、真空を必要としません。接着剤乾燥後一つは細かいブラシの助けを借りて、組織からアブラムシを持ち上げることができます。 </li><li>発泡スチロールに有線昆虫と真鍮のピンを挿入し、必要に応じて、継続EPGの記録セッションのために使用される他のすべての昆虫配線。 注：配線アブラムシのためのこれらのプロトコルは、私たちのためにうまく機能します。ユーザーは、アブラムシを配線するために彼/彼女の自身の方法を見つけることができます。 </li></ol></li><li>ステップ4。 <ol><li>非導電性支持体上にファラデーケージ（ 図2P）に植物を置く：ペトリ皿やガラスやプラスチックの板を使用しています。 </li><li>各ポットの土壌に植物の電極を挿入します。 EPGプリアンプ（ 図2Q）の入力コネクタに有線昆虫の真鍮のピンを挿入します。注：土壌電極は、他の電気生理学的手法で使用される接地電極に対応していません。これは、調整および電極分極電圧を補償するために必要とされるオフセット電圧を有します。 </li><li>取得ソフトスタイレットの+のインターフェイス上で、100ヘルツの固定のサンプル周波数で、ファイル名を入力し、記録時間を指定し、実験（治療、プラント/ inseの詳細を指定するためのテキストを書き込みます<html>コメント行2及び3におけるCT種など ）。 </li><li>植物の適切なランディング領域に昆虫を下げて、取得ソフトウェア（スタイレット+）インターフェイスの[スタート]ボタンをクリックすることで、記録セッションを開始します。 注1：8チャネルの最大を設定EPGで同時に使用することができます。工場ごとにEPG電極またはいくつかのEPG電極を使用することができます。 注2：研究の焦点は、アブラムシの行動である場合、第1工場の普及活動を見逃さないためにアブラムシの植物へのアクセスの前に録画を開始。 </li><li>刺激に対するSESの電気生理学的応答を研究するため、アブラムシはアブラムシが持続師部摂取段階にあることを確実にするために、師部相に入った後、少なくとも10分待ってから、信号のベースラインが安定していること。だけにして、任意の植物の刺激実験を開始します。 </li></ol></li></ol>tp_upload / 52826 / 52826fig2.jpg &quot;/&gt; 図2。電気浸透グラフ（EPG）記録のためのアブラムシや他の半翅目昆虫でEPG電極を作る。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52826/52826fig2highres.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、こちらをクリックしてください。</a> パネルは、AI、必要な手順は、EPG電極マイナスアブラムシを作製しました。まず、はんだ付けボルト（A）の先端にハンダ付け金属片を溶かします。そして、はんだ付け流体（B）のドロップに真鍮ピンの頭を浸し、はんだ付けボルトチップ（C）で溶融金属とそれをご連絡ください。すぐにこのステップの後、真鍮ピン（EF）の頭部にそれを接着するために、はんだ付けボルトの先端に銅ワイヤの端部に連絡してください。メスまたは刃で、金ワイヤ（G）の一部をカット。ディップ銅線の自由端銀が枯渇する前に、（I）を銀接着剤（H）の（真鍮ピンにもう一方の端で結合）、そしてすぐにそれに金ワイヤに参加します。金ワイヤは、優れた導体であり、かつ偏光することができます。実際には、ほとんどの場合、偏光を検出するには小さすぎる、そしてもしそうなら、それは、オフセット電圧（V）を用いて補償することができます。 パネルJO、電極にアブラムシ（または他の半翅目昆虫）を接続するために必要な手順。まず、慎重に微細な水彩ブラシでアブラムシを持ち上げて、真空吸引装置（J）の開口部の上に置きます。真空ポンプの電源を入れ、吸引を適用するために一枚の紙とエアーバルブの穴をカバーしています。銀接着剤（K）に虫ピンの先端を浸して、実体顕微鏡（LM）の下で、アブラムシの腹部の上に小さな接着剤滴を置きます。以内次〜20秒は、アブ​​ラムシが乾燥上の銀接着剤滴前に、銀接着剤の湿潤液滴に昆虫電極の金ワイヤの端部を挿入し、銀接着剤が有するようになるまで、1〜3分間の場所に保管してください完全に空気乾燥した（N）。この時点で、吸引装置から、吸引装置の空気弁孔を覆い、慎重にアブラムシを除去枚の紙を除去することにより、吸引を無効にします。配線後にアブラムシを持ち上げることは、多くの場合、微細なブラシ（O）によっていくつかの助けを必要とします。 パネルPは、全体EPGの概要は、ファラデーケージの内部設定を示しており、パネルQは、EPGのための植物アブラムシの組み合わせの概要を示します。このプロセスのより詳細な説明については、上記のセクション2を参照してください。 ：小さな文字は1つが、EPG電極を作るために必要な項目を参照ラベルであるはんだ付けボルトと、b：はんだ付け金属を溶融させ、C：はんだ液; D：真鍮コネクタピン（爪）; E：銅線、F：Øの18μmの金ワイヤ; G：吸引装置; H：アブラムシ; I：水ベースの銀接着剤; J：ファラデーケージ; kは ：植物電極; L：EPGプリアンプの入力コネクタ（BNC）。

<ol>
	<li>Salvador-Recatal&#224;, V., Tjallingii, W. F., Farmer, E. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Real-time,+in+vivo.+intracellular+recordings+of+caterpillar-induced+depolarization+waves+in+sieve+elements+using+aphid+electrodes.">Real-time, in vivo. intracellular recordings of caterpillar-induced depolarization waves in sieve elements using aphid electrodes.</a> New Phytologist. 203 (2), 674-684 (2014).</li><li>Van Bel, A. J., Knoblauch, M., Furch, A. C., Hafke, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=(Questions)n+on+phloem+biology.+1.+Electropotential+waves,+Ca2++fluxes+and+cellular+cascades+along+the+propagation+pathway.">(Questions)n on phloem biology. 1. Electropotential waves, Ca2+ fluxes and cellular cascades along the propagation pathway.</a> Plant Science. 181 (3), 210-218 (2011).</li><li>Rhodes, J. D., Thain, J. F., Wildon, D. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+pathway+for+electrical+signal+conduction+in+the+wounded+tomato+plant.">The pathway for electrical signal conduction in the wounded tomato plant.</a> Planta. 200, 50-57 (1996).</li><li>Fromm, J., Eschrich, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+of+ionic+movements+with+phloem+unloading+and+loading+in+barley+leaves.">Correlation of ionic movements with phloem unloading and loading in barley leaves.</a> Plant Physiology and Biochemistry. 27, 577-585 (1989).</li><li>Brette, R., Destexhe, A., Brette, R., Destexhe, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Intracellular+Recordings.">Intracellular Recordings.</a> Handbook of Neural Activity Measurement. , 44-91 (2012).</li><li>Umrath, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Untersuchungen+&#252;ber+Plasma+und+Plasamstromung+an+Characeen.+IV.+Potentialmessungen+an+Nitella+mucronata.+mit+besonderer+Ber&#252;cksichtingung+der+Erregungserscheinungen.">Untersuchungen &#252;ber Plasma und Plasamstromung an Characeen. IV. Potentialmessungen an Nitella mucronata. mit besonderer Ber&#252;cksichtingung der Erregungserscheinungen.</a> Protoplasma. 9, 576-597 (1930).</li><li>Umrath, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Der+Erregungsvorgang+bei+Nitella+mucronata.">Der Erregungsvorgang bei Nitella mucronata.</a> Protoplasma. 17, 258-300 (1932).</li><li>Carden, D. E., Walker, D. J., Flowers, T. J., Miller, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Single-cell+measurements+of+the+contribution+of+cytosolic+Na++and+K++to+salt+tolerance.">Single-cell measurements of the contribution of cytosolic Na+ and K+ to salt tolerance.</a> Plant Physiology. 131 (2), 676-683 (2003).</li><li>Miles, P. W., McLean, D. L., Kinsey, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Evidence+that+two+species+of+aphid+ingest+food+through+an+open+stylet+sheath.">Evidence that two species of aphid ingest food through an open stylet sheath.</a> Experientia. 20 (10), 582 (1964).</li><li>McLean, D. L., Kinsey, M. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+technique+for+electronically+recording+aphid+feeding+and+salivation.">A technique for electronically recording aphid feeding and salivation.</a> Nature. 202, 1358-1359 (1965).</li><li>Tjallingii, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electronic+recording+of+penetration+behaviour+by+aphids.">Electronic recording of penetration behaviour by aphids.</a> Entomologia Experimentalis et Applicata. 24, 721-730 (1978).</li><li>Tjallingii, W. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Membrane+potentials+as+an+indication+for+plant+cell+penetration+by+aphid+stylets.">Membrane potentials as an indication for plant cell penetration by aphid stylets.</a> Entomologia Experimentalis et Applicata. 38, 187-193 (1985).</li><li>Alvarez, E. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparative+analysis+of+Solanum+stoloniferum.+responses+to+probing+by+the+green+peach+aphid+Myzus+persicae.+and+the+potato+aphid+Macrosiphum+euphorbiae.">Comparative analysis of Solanum stoloniferum. responses to probing by the green peach aphid Myzus persicae. and the potato aphid Macrosiphum euphorbiae.</a> Insect Science. 20 (2), 207-227 (2013).</li><li>Carmo-Sousa, M., Moreno, A., Garzo, E., Fereres, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+non-persistently+transmitted+virus+induces+a+pull-push+strategy+in+its+aphid+vector+to+optimize+transmission+and+spread.">A non-persistently transmitted virus induces a pull-push strategy in its aphid vector to optimize transmission and spread.</a> Virus Research. 186, 38-46 (2014).</li><li>Jacobson, A. L., Kennedy, G. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Electrical+Penetration+Graph+studies+to+investigate+the+effects+of+cyantraniliprole+on+feeding+behavior+of+Myzus+persicae.+(Hemiptera:+Aphididae)+on+Capsicum+annuum.">Electrical Penetration Graph studies to investigate the effects of cyantraniliprole on feeding behavior of Myzus persicae. (Hemiptera: Aphididae) on Capsicum annuum.</a> Pest Management Science. 70 (5), 836-840 (2014).</li><li>Morris, G., Foster, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Duelling+aphids:+electrical+penetration+graphs+reveal+the+value+of+fighting+for+a+feeding+site.">Duelling aphids: electrical penetration graphs reveal the value of fighting for a feeding site.</a> Journal of Experimental Biology. 211 (9), 1490-1494 (2008).</li></ol>

WFT launched EPG Systems as a retirement activity, and is affiliated with it financially.

この記事では、電気浸透グラフ（EPG）の記録を作成するための詳細なプロトコルを提供します。 EPG技術はよく、世界中の100〜200のアクティブユーザーと、確立され、それは、例えば、さまざまなトピックに関する多くの研究のために実装されました：アブラムシや他のスタイレット保有昆虫13 a）の宿主植物の抵抗性を、 B）植物ウイルスおよび病原体伝達機構14と 、アクシ?...

長距離電気信号を生成する能力は、外部刺激に対する効率的な応答を可能にする多細胞生物の有利な特性です。この特性は、植物および動物において独立して進化し、したがって、収束進化の場合を示しています。電気信号は、例えば、神経伝達や筋肉の収縮、分子的基礎、変速機の機構、および動物における刺激によって誘発される電気信号の関数として、動物で重要な機能に結合されていることを考えると、集中的な研究の対象です。これとは対照的に、植物中の刺激によって誘発される電気信号は、ほとんどの研究が注目されています。植物には神経や筋肉を持っていないが、植物中の刺激によって誘発される電気信号は、環境因子への応答に重要な役割を果たしていることを前提とするのに十分な証拠があるように思われます。 師部、植物の血管系の生体成分は、主要なサブように仮定されています刺激によって誘発される電気信号を伝送するためのstrateは、刺激から/非刺激/非損傷領域2に損傷を受けました。師部の主な細胞は、篩エレメント（SES）、比較的単純な、細長い細胞です。のSEの端部は、植物全体に広がっている連続的な、低抵抗、篩管系を形成する、他のSEに接続されています。これらの高度に特殊化した細胞の電気的特性に非常に少数の研究は、しかし、があります。これらの以前の研究では、研究者は、ガラス微小電極3またはstylectomy（切断）4の後に、アブラムシの植物挿入スタイレットに結合させたガラス電極とのいずれかでのSEにアクセスしました。ガラス微小電極は、直径1μm未満の微細な先端に熱と一端で引っ張り、その後、KCl溶液で満たされたガラス毛細管から作製されます。のKCl充填ガラス電極に挿入されたAg / AgClの又は白金線、次にアンプの入力に接続されており、参照先電極は、回路を完成する、目的の細胞を囲む浴中に挿入されます。このセットアップでは、細胞外の参照先電極および細胞内測定電極、 すなわち、セル5の膜電位との電位差を記録します。この方法では、Umrathは藻類フラスコモ 6,7を用いて、植物細胞からの第1の細胞内記録を作った。 フラスコモは、比較的単純な大きな細胞と生物、および細胞内電気生理学実験することが適しています。対照的に、多細胞、三次元陸生植物の細胞への細胞内小ガラス電極の挿入は、技術的に要求が厳しい、高度に熟練した研究者だけでなく、高度な可視化、マイクロマニピュレーション、および防振装置を必要とします。ガラス電極は、根の表皮細胞8などの植物における表層細胞から記録するのに適しているが、細胞内recordinこのようなSEが、結果を混乱可能性が高い原因の損傷によって誘発される応答として深く植物の組織に埋め込まれた細胞からGS、。 1989年に、フロムとEschrichガラス電極をstylectomy 4後アブラムシのスタイレットに結合されている「アブラムシ法」と呼ばれる別の方法を使用することを、報告しました。ガラス電極がそうであるように柔軟なスタイレットは、組織または細胞の損傷を引き起こすことはありませんので、アブラムシの方法は、低侵襲性です。アブラムシのスタイレットは、植物の浸透のため、自然の偉大な発明であり、アブラムシがかなりのSEを見つけることで、人間よりも熟練しています。残念ながら、このアブラムシ方法は、技術的な専門知識と設備の面で非常に厳しいです。 stylectomy時、安定SEに挿入スタイレットと - また、この技術を実装し、各実験の成功は、給電モードであるアブラムシに完全に依存します。遡及的に考えて、一つは、この技術の成功の確率は私だったかもしれないことがわかります実験にstylectomyを適用する場合アブラムシスタイレットがSEであるか否かを識別することができる機器を追加することによってmproved。 1964年に、マクリーンとキンゼイはリアルタイム9,10にアブラムシの摂食行動の研究のための「電子監視システム」を記載しました。このシステムでは、アブラムシ及びスタイレット-浸透プラントは、電気回路に集積されました。その後、1978年に、Tjallingiiは、システムの修正版を考案した「電気浸透グラフ」（EPG）システム11,12と呼ばれます。オリジナルの電子監視システムは、EPGシステムと、起電力（EMF）が電位を発し、抵抗のみ由来の電位に対して感受性であった、すなわち、植物または昆虫で生成から生じる電位に加えて記録することができたのに対し昆虫の抵抗（R）。両方の信号成分、起電力及びRので、これは重要な改善を示し、アブラムシによる植物への浸透中にイベントの生物学的な関連情報を提供。何R-コンポーネントへのEPGプリアンプが敏感になることは、植物/アブラムシ抵抗の平均値の近くに位置しています1GΩ、その比較的低い入力抵抗です。小さ ​​なオフセット電圧（ 図1には 、V）は、約+100 mVのでは、1つの側に、植物と昆虫に分割されている植物、および他の入力抵抗に印加されます。電圧及びその変化は、昆虫および入力抵抗との間の点（ 図1A、B）で測定されます。 EMF-成分が昆虫に起因する植物スタイレット先端の電位と電位の一定の割合であるのに対し、このため、R-コンポーネントは、オフセット電圧の植物アブラムシ抵抗変調を表します。ここで最も関連性 - - 植物の電位は、アブラムシのスタイレットを穿刺植物細胞の主に膜電位です。昆虫電位が主であると思われます2スタイレット運河内の流体の動きによって引き起こされるストリーミング電位、 すなわち、食品や唾液運河。は内部の神経や筋肉の電位は、EPGに記録されていません。実際には、電極先端としてスタイレット先端機能します。すべての植物細胞は負電池の正外側に対して内側に充電されます。電流（ すなわち、水溶液中の荷電イオンの移動）内側から外側に流れ、 その逆が原因細胞膜の高抵抗に非常に限られています。通常、静止電位が一定に保たれます。しかし、マイナスイオンが出て移動したり、正イオンが細胞膜を通って移動し、膜電位が低下すると、 すなわち、それは「脱分極します」。脱分極は、セルの励起の場合に発生します。イオンは、膜中の特定のイオンチャネルが開いているか、膜が損傷した場合やイオンが内外に漏れるときにアウトに移動したり。すべての細胞は、T中のイオンチャネルおよびポンプを持っています彼は細胞内の種々のイオンの最初の濃度を復元することによってその静止レベルに膜電位を持った膜をプラズマ。静止電位とその変化が起電力成分であり、従って、EPGの技術は、それらを測定するのに適しています。 <img alt="図1" src="/files/ftp_upload/52826/52826fig1.jpg" /> 1. EPG電極図 。 EPG電極は、その安定したスタイレット給電モードで篩エレメント（SE）に挿入された電気浸透グラフ（EPG）回路に組み込ま生きアブラムシあります。スタイレット-刺しSEが残り（パネルA）である場合には、EPGによって記録された回路の電圧は、安定しており、静止電位レベル（パネルC、REST）です。 SEが励起される場合、電圧が徐々に増加する（パネルC、脱分極）のように、EPGで可視化され、その膜の脱分極（パネルB）、。 SE中のイオンバランスを休まに戻るように、 すなわち、それrepolar化し、EPGにより記録された電圧は徐々に静止電位レベル（パネルC、再分極）に減少します。パネルCは、「A」及び「B」は、それぞれパネルAおよびBに示されたシナリオを参照します。 V =可変オフセット電圧源。 riは=入力抵抗。 1GΩ外付け抵抗と並行して、アンプが（灰色で、パネルAおよびB）高1.5TΩ抵抗（オペアンプ）で内部があります。スイッチのリモコンでのEPGプリアンプは、高精度の電圧値を得ることができ、モードをEMFために、通常から変更することができます。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/52826/52826fig1highres.jpg" target="_blank">この図の拡大版を表示するには、こちらをクリックしてください。</a> 次のセクションでは、両方の集束昆虫や植物に焦点を当てた研究のために有効であるEPG実験を行うための基本的なプロトコルを読者に提供します。

<table border="0" cellpadding="0" cellspacing="0">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Brass connector pins</td>
			<td>EPG Systems/hardw.shop</td>
			<td></td>
			<td>&#934; 1.2 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thin copper wire</td>
			<td>EPG Systems/hardw.shop</td>
			<td></td>
			<td>approx. &#934; 0.2 mm</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Thin gold wire</td>
			<td>EPG Systems</td>
			<td></td>
			<td>&#934; 18 &#181;m</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soldering fluid</td>
			<td>hardware shop</td>
			<td></td>
			<td>matching the soldering wire</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Resin-cored soldering wire</td>
			<td>hardware shop</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Styrofoam</td>
			<td>any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water-based silver glue</td>
			<td>EPG systems</td>
			<td></td>
			<td><a href="http://www.epgsystems.eu/">recipe in: www.epgsystems.eu</a></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paper wipes</td>
			<td>Kimberly-Clark</td>
			<td>5511</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Soldering bolt</td>
			<td>any</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Stereomicroscope</td>
			<td>Hund Wetzlar</td>
			<td></td>
			<td>minimum magnification is x10</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Small scissors</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>14088-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>10050-00</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fine forceps</td>
			<td>Fine Science Tools</td>
			<td>11231-20</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex</td>
			<td>A. Hartenstein</td>
			<td>L46</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Watercolor brushes</td>
			<td>any</td>
			<td></td>
			<td>Number 1 or 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Air suction device</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>see description in: www.epgsystems.eu</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Insect pins</td>
			<td>any</td>
			<td></td>
			<td>No. 1 or 2</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Solid table</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Faraday cage</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>Hand made</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Computer</td>
			<td>Fujitsu Siemens</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Data acquisition software</td>
			<td>EPG Systems</td>
			<td></td>
			<td>Stylet+d</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Giga-4 (-8) Complete System</td>
			<td>EPG Systems</td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>includes the following:</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Main control box with USB output</td>
			<td></td>
			<td>Di155/Di710</td>
			<td>12/14 bit, rate 100Hz(softw. fixed)</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EPG probes 4 (8)</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>50x DC pre-amplifier</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Swivel clamps on rod</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DC power adaptor</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td>bipolar, 230/115 VAC to -/+8 VDC</td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Plant electrodes and cables</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Additional test and ground cables&#160;</td>
			<td></td>
			<td></td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

a new application of the electrical penetration graph (epg) for acquiring and measuring electrical signals in phloem sieve elements

細胞の電気生理学的特性は、多くの場合、それらの天然の環境からそれらを解離した後、in vitroで検討されています。しかし、生体内の離れた細胞間の電気伝送の研究は、 生体内でそれらの天然の環境内に埋め込 ​​まれた細胞のアーチファクトのない録音が必要です。工場で無傷の領域に負傷からの電気信号の伝送が長いので、植物学者の興味をそそりました。師部、植物全体に広がっている植物の血管系の住んでいる部分は、植物内の電気伝送における主要な組織として仮定されています。適切な電気生理学的方法の欠如は、in vivoでの師部細胞の電気的特性の研究のための多くの課題を提起します。ここでは、電気浸透GRAで統合された、生きているアブラムシを使用してふるい要素（SES）の細胞内電気生理学、または他の師部送り半翅目昆虫のための新しいアプローチを提示pH値（EPG）回路。この方法の汎用性、堅牢性、および精度により、記録し、モデル植物のシロイヌナズナ 1の中心静脈からのSEに詳細に傷誘導性の電気信号を調べるために行きました。ここでは、EPG電極を容易に限界静脈内のSEの細胞内電気生理学的記録のために実施することができるだけでなく、いくつかの外部刺激に電気信号に応答するのSEの能力を研究することを示しています。 EPGのアプローチは、細胞内のSEの電気生理学に適用植物/昆虫組み合わせの多数であり、多くの研究目的のために、植物種の多種多様に実施することができます。

以前の研究では、キャタピラ攻撃1の間にmidveinのSEの中で生成された電気信号を特徴付ける目的で、EPG電極技術を実装しました。 midveinは、これらの技術を実施するために必要な固定に適し、したがって、それはSE-緻密であるため、従来のガラス電極用、並びにガラス、スタイレットの電極のための好ましい挿入部位であり、比較的堅牢。ここでは、特に、葉の辺縁静脈のものとのSEに...

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A New Application of the Electrical Penetration Graph EPG for Acquiring and Measuring Electrical Signals in Phloem Sieve Elements

Electrical Penetration Graph (EPG) is a well-established technique for studying the feeding behavior of stylet-bearing insects. Here we show a new application of EPG as a non-invasive tool for the acquisition of intracellular electrophysiology recordings of sieve elements (SEs), the cells that form the phloem vasculature in plants.

師部ふるい要素に電気信号を取得し、測定するための電気浸透グラフ（EPG）の新しいアプリケーション

Electrophysiological properties of cells are often studied in vitro, after dissociating them from their native environments. However, the study of ...

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Research

JoVE Journal

Environment

A New Application of the Electrical Penetration Graph (EPG) for Acquiring and Measuring Electrical Signals in Phloem Sieve Elements

14.6K ビュー.  University of Würzburg. Electrical Penetration Graph (EPG) is a well-established technique for studying the feeding behavior of stylet-bearing insects. Here we show a new application of EPG as a non-invasive tool for the acquisition of intracellular electrophysiology recordings of sieve elements (SEs), the cells that form the phloem vasculature in plants. 

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Methods for Performing Crosses in Setaria viridis, a New Model System for the Grasses

Setaria viridis is an emerging model system for C4 grasses. It is closely related to the bioenergy feed stock switchgrass and the grain crop foxtail millet. Recently, the 510 Mb genome of foxtail millet, S. italica, has been sequenced 1,2 and a 25x coverage genome sequence of the weedy relative S. viridis is in progress. S. viridis has a number of characteristics that make it a potentially excellent model genetic system including a rapid generation time, small stature, simple growth requirements, prolific seed production 3 and developed systems for both transient and stable transformation 4. However, the genetics of S. viridis is largely unexplored, in part, due to the lack of detailed methods for performing crosses. To date, no standard protocol has been adopted that will permit rapid production of seeds from controlled crosses.
The protocol presented here is optimized for performing genetic crosses in S. viridis, accession A10.1. We have employed a simple heat treatment with warm water for emasculation after pruning the panicle to retain 20-30 florets and labeling of flowers to eliminate seeds resulting from newly developed flowers after emasculation. After testing a series of heat treatments at permissive temperatures and varying the duration of dipping, we have established an optimum temperature and time range of 48 &deg;C for 3-6 min. By using this method, a minimum of 15 crosses can be performed by a single worker per day and an average of 3-5 outcross progeny per panicle can be recovered. Therefore, an average of 45-75 outcross progeny can be produced by one person in a single day. Broad implementation of this technique will facilitate the development of recombinant inbred line populations of S. viridis X S. viridis or S. viridis X S. italica, mapping mutations through bulk segregant analysis and creating higher order mutants for genetic analysis.

Methods for Performing Crosses in Setaria viridis, a New Model System for the Grasses

We have developed a methodology for performing crosses in Setaria viridis (S. viridis). The method involves pruning the panicle prior to a hot water treatment to kill viable pollen. Crosses are performed following a well-controlled growth regime and typically result in the recovery of 1 to 7 cross-pollinated seed/s per panicle.

に十字架を実行するためのメソッド<em&gt;エノコログサ</em草のために&gt;、新モデルシステム

Setaria viridis is an emerging model system for C4 grasses. It is closely related to the bioenergy feed stock switchgrass and the grain crop foxtail ...

環境学

Application of Two-spotted Spider Mite Tetranychus urticae for Plant-pest Interaction Studies

The two-spotted spider mite, Tetranychus urticae, is a ubiquitous polyphagous arthropod herbivore that feeds on a remarkably broad array of species, with more than 150 of economic value. It is a major pest of greenhouse crops, especially in Solanaceae and Cucurbitaceae (e.g., tomatoes, eggplants, peppers, cucumbers, zucchini) and greenhouse ornamentals (e.g., roses, chrysanthemum, carnations), annual field crops (such as maize, cotton, soybean, and sugar beet), and in perennial cultures (alfalfa, strawberries, grapes, citruses, and plums)1,2. In addition to the extreme polyphagy that makes it an important agricultural pest, T. urticae has a tendency to develop resistance to a wide array of insecticides and acaricides that are used for its control3-7.
T. urticae is an excellent experimental organism, as it has a rapid life cycle (7 days at 27 &#176;C) and can be easily maintained at high density in the laboratory. Methods to assay gene expression (including in situ hybridization and antibody staining) and to inactivate expression of spider mite endogenous genes using RNA interference have been developed8-10. Recently, the whole genome sequence of T. urticae has been reported, creating an opportunity to develop this pest herbivore as a model organism with equivalent genomic resources that already exist in some of its host plants (Arabidopsis thaliana and the&#160;tomato Solanum lycopersicum)11. Together, these&#160;model organisms could provide insights into molecular bases of plant-pest interactions.
Here, an efficient method for quick and easy collection of a large number of adult female mites, their application on an experimental plant host, and the assessment of the plant damage due to spider mite feeding are described. The presented protocol enables fast and efficient collection of hundreds of individuals at any developmental stage (eggs, larvae, nymphs, adult males, and females) that can be used for subsequent experimental application.

Application of Two-spotted Spider Mite Tetranychus urticae for Plant-pest Interaction Studies

Protocols for efficient preparation of homogenous samples of spider mites, infestation of experimental plants, and assessment of plant damage, as required for studies of plant-pest interaction were developed.

ナミハダニダニの適用<em&gt;ナミハダニ</em&gt;植物の害虫相互作用研究のための

The two-spotted spider mite, Tetranychus urticae, is a ubiquitous polyphagous arthropod herbivore that feeds on a remarkably broad array of species, with ...

Removal of Trace Elements by Cupric Oxide Nanoparticles from Uranium In Situ Recovery Bleed Water and Its Effect on Cell Viability

In situ recovery (ISR) is the predominant method of uranium extraction in the United States. During ISR, uranium is leached from an ore body and extracted through ion exchange. The resultant production bleed water (PBW) contains contaminants such as arsenic and other heavy metals. Samples of PBW from an active ISR uranium facility were treated with cupric oxide nanoparticles (CuO-NPs). CuO-NP treatment of PBW reduced priority contaminants, including arsenic, selenium, uranium, and vanadium. Untreated and CuO-NP treated PBW was used as the liquid component of the cell growth media and changes in viability were determined by the MTT (3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) assay in human embryonic kidney (HEK 293) and human hepatocellular carcinoma (Hep G2) cells. CuO-NP treatment was associated with improved HEK and HEP cell viability. Limitations of this method include dilution of the PBW by growth media components and during osmolality adjustment as well as necessary pH adjustment. This method is limited in its wider context due to dilution effects and changes in the pH of the PBW which is traditionally slightly acidic&#160;however; this method could have a broader use assessing CuO-NP treatment in more neutral waters.

Removal of Trace Elements by Cupric Oxide Nanoparticles from Uranium In Situ Recovery Bleed Water and Its Effect on Cell Viability

Production bleed water (PBW) was treated with cupric oxide nanoparticles (CuO-NPs) and cellular toxicity was assessed in cultured human cells. The goal of this protocol was to integrate the native environmental sample into a cell culture format assessing the changes in toxicity due to CuO-NP treatment.

ウランの酸化銅ナノ粒子による微量元素の除去<em&gt;その場での</em&gt;回復ブリード水と細胞生存率への影響

In situ recovery (ISR) is the predominant method of uranium extraction in the United States. During ISR, uranium is leached from an ore body and extracted ...

A Simple Method for Automated Solid Phase Extraction of Water Samples for Immunological Analysis of Small Pollutants

A new method for solid phase extraction (SPE) of environmental water samples is proposed. The developed prototype is cost-efficient and user friendly, and enables to perform rapid, automated and simple SPE. The pre-concentrated solution is compatible with analysis by immunoassay, with a low organic solvent content. A method is described for the extraction and pre-concentration of natural hormone 17&#946;-estradiol in 100 ml water samples. Reverse phase SPE is performed with octadecyl-silica sorbent and elution is done with 200 &#181;l of methanol 50% v/v. Eluent is diluted by adding di-water to lower the amount of methanol. After preparing manually the SPE column, the overall procedure is performed automatically within 1 hr. At the end of the process, estradiol concentration is measured by using a commercial enzyme-linked immune-sorbent assay (ELISA). 100-fold pre-concentration is achieved and the methanol content in only 10% v/v. Full recoveries of the molecule are achieved with 1 ng/L spiked de-ionized and synthetic sea water samples.

A protocol for the extraction and pre-concentration of estradiol from water samples by using an automated and miniaturized system is presented.

小さな汚染物質の免疫学的分析のための水試料の自動固相抽出ための簡単​​な方法

A new method for solid phase extraction (SPE) of environmental water samples is proposed. The developed prototype is cost-efficient and user friendly, and ...

Modification and Application of a Leaf Blower-vac for Field Sampling of Arthropods

Rice fields host a large diversity of arthropods, but investigating their population dynamics and interactions is challenging. Here we describe the modification and application of a leaf blower-vac for suction sampling of arthropod populations in rice. When used in combination with an enclosure, application of this sampling device provides absolute estimates of the populations of arthropods as numbers per standardized sampling area. The sampling efficiency depends critically on the sampling duration. In a mature rice crop, a two-minute sampling in an enclosure of 0.13 m2 yields more than 90% of the arthropod population. The device also allows sampling of arthropods dwelling on the water surface or the soil in rice paddies, but it is not suitable for sampling fast flying insects, such as predatory Odonata or larger hymenopterous parasitoids. The modified blower-vac is simple to construct, and cheaper and easier to handle than traditional suction sampling devices, such as D-vac. The low cost makes the modified blower-vac also accessible to researchers in developing countries.

Assessment of arthropod abundance in crops is critical for investigating population dynamics and species interactions. Here we describe the modification and application of a leaf blower-vac for suction sampling of arthropods in rice.

節足動物のフィールドサンプリングのためのリーフブロワー-VACの変更と応用

Rice fields host a large diversity of arthropods, but investigating their population dynamics and interactions is challenging. Here we describe the ...

Measuring and Mapping Patterns of Soil Erosion and Deposition Related to Soil Carbonate Concentrations Under Agricultural Management

Spatial patterns of soil erosion and deposition can be inferred from differences in ground elevation mapped at appropriate time increments. Such changes in elevation are related to changes in near-surface soil carbonate (CaCO3) profiles. The objective is to describe a simple conceptual model and detailed protocol for repeatable field and laboratory measurements of these quantities. Here, accurate elevation is measured using a ground-based differential global positioning system (GPS); other data acquisition methods could be applied to the same basic method. Soil samples are collected from prescribed depth intervals and analyzed in the lab using an efficient and precise modified pressure-calcimeter method for quantitative analysis of inorganic carbon concentration. Standard statistical methods are applied to point data, and representative results show significant correlations between changes in soil surface layer CaCO3 and changes in elevation consistent with the conceptual model; CaCO3 generally decreased in depositional areas and increased in erosional areas. Maps are derived from point measurements of elevation and soil CaCO3 to aid analyses. A map of erosional and depositional patterns at the study site, a rain-fed winter wheat field cropped in alternating wheat-fallow strips, shows the interacting effects of water and wind erosion affected by management and topography. Alternative sampling methods and depth intervals are discussed and recommended for future work relating soil erosion and deposition to soil CaCO3.

Spatial patterns of soil erosion and deposition can be inferred from differences in ground elevation mapped at appropriate time increments. Such changes in elevation are related to changes in near-surface soil carbonates. Repeatable methods for field and laboratory measurements of these quantities and data analysis methods are described here.

測定と土壌侵食と堆積土炭酸濃度農業経営に関連のパターンのマッピング

Spatial patterns of soil erosion and deposition can be inferred from differences in ground elevation mapped at appropriate time increments. Such changes ...

Development of New Methods for Quantifying Fish Density Using Underwater Stereo-video Tools

The use of video camera systems in ecological studies of fish continues to gain traction as a viable, non-extractive method of measuring fish lengths and estimating fish abundance. We developed and implemented a rotating stereo-video camera tool that covers a full 360 degrees of sampling, which maximizes sampling effort compared to stationary camera tools. A variety of studies have detailed the ability of static, stereo-camera systems to obtain highly accurate and precise measurements of fish; the focus here was on the development of methodological approaches to quantify fish density using rotating camera systems. The first approach was to develop a modification of the metric MaxN, which typically is a conservative count of the minimum number of fish observed on a given camera survey. We redefine MaxN to be the maximum number of fish observed in any given rotation of the camera system. When precautions are taken to avoid double counting, this method for MaxN may more accurately reflect true abundance than that obtained from a fixed camera. Secondly, because stereo-video allows fish to be mapped in three-dimensional space, precise estimates of the distance-from-camera can be obtained for each fish. By using the 95% percentile of the observed distance from camera to establish species-specific areas surveyed, we account for differences in detectability among species while avoiding diluting density estimates by using the maximum distance a species was observed. Accounting for this range of detectability is critical to accurately estimate fish abundances. This methodology will facilitate the integration of rotating stereo-video tools in both applied science and management contexts.

We describe a new method for counting fishes, and estimating relative abundance (MaxN) and fish density using rotating stereo-video camera systems. We also demonstrate how to use distance from camera (Z distance) to estimate species-specific detectability.

水中ステレオ ビデオのツールを使用して魚の密度を定量化する新方式の開発

The use of video camera systems in ecological studies of fish continues to gain traction as a viable, non-extractive method of measuring fish lengths and ...

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

Plants possess a powerful system to defend themselves against potential threats by pathogenic fungi. For agriculturally important plants, however, current measures to combat such pathogens have proved too conservative and, thus, not sufficiently effective, and they can potentially pose environmental risks. Therefore, it is extremely necessary to identify host-resistance factors to assist in controlling plant diseases naturally through the identification of resistant germplasm, the isolation and characterization of resistance genes, and the molecular breeding of resistant cultivars. In this regard, there is need to establish an accurate, rapid, and large-scale inoculation method to breed and develop plant resistance genes. The rice blast fungal pathogen Magnaporthe grisea causes severe disease symptoms and yield losses. Recently, M. grisea has emerged as a model organism for studying the mechanisms of plant-fungal pathogen interactions. Hence, we report the development of a plant virulence test method that is specific for M. grisea. This method provides for both spray inoculation with a conidial suspension and wounding inoculation with mycelium cubes or droplets of conidial suspension. The key step of the wounding inoculation method for detached rice leaves is to make wounds on plant leaves, which avoids any interference caused by host penetration resistance. This spray/wounding protocol contributes to the rapid, accurate, and large-scale screening of the pathotypes of M. grisea isolates. This integrated and systematic plant infection method will serve as an excellent starting point for gaining a broad perspective of issues in plant pathology.

The Plant Infection Test: Spray and Wound-Mediated Inoculation with the Plant Pathogen Magnaporthe Grisea

Here, we present a protocol to test plant virulence with the plant pathogen Magnaporthe grisea. This report will contribute to the large-scale screening of the pathotypes of fungi isolates and serve as an excellent starting point for understanding the resistant mechanisms of plants during molecular breeding.

植物感染試験: スプレーと傷を介した植物病原体イネいもち病菌接種

Plants possess a powerful system to defend themselves against potential threats by pathogenic fungi. For agriculturally important plants, however, current ...

Experimental Protocol for Examining Behavioral Response Profiles in Larval Fish: Application to the Neuro-stimulant Caffeine

Fish models and behaviors are increasingly used in the biomedical sciences; however, fish have long been the subject of ecological, physiological and toxicological studies. Using automated digital tracking platforms, recent efforts in neuropharmacology are leveraging larval fish locomotor behaviors to identify potential therapeutic targets for novel small molecules. Similar to these efforts, research in the environmental sciences and comparative pharmacology and toxicology is examining various behaviors of fish models as diagnostic tools in tiered evaluation of contaminants and real-time monitoring of surface waters for contaminant threats. Whereas the zebrafish is a popular larval fish model in the biomedical sciences, the fathead minnow is a common larval fish model in ecotoxicology. Unfortunately, fathead minnow larvae have received considerably less attention in behavioral studies. Here, we develop and demonstrate a behavioral profile protocol using caffeine as a model neurostimulant. Though photomotor responses of fathead minnows were occasionally affected by caffeine, zebrafish&#160;were markedly more sensitive for photomotor and locomotor endpoints, which responded at environmentally relevant levels. Future studies are needed to understand comparative behavioral sensitivity differences among fish with age and time of day, and to determine whether similar behavioral effects would occur in nature and be indicative of adverse outcomes at the individual or population levels of biological organization.

Here, we present a protocol to examine larval zebrafish and fathead minnow locomotor activities and photomotor responses (PMR) using an automated tracking software. When incorporated in common toxicology bioassays, analyses of these behaviors provide a diagnostic tool to examine chemical bioactivity. This protocol is described using caffeine, a model neurostimulant.

稚魚の行動応答プロファイルを調べるための実験プロトコル: 神経興奮剤カフェインへの応用

Fish models and behaviors are increasingly used in the biomedical sciences; however, fish have long been the subject of ecological, physiological and ...

Combining Eye-tracking Data with an Analysis of Video Content from Free-viewing a Video of a Walk in an Urban Park Environment

As individuals increasingly live in cities, methods to study their everyday movements and the data that can be collected becomes important and valuable. Eye-tracking informatics are known to connect to a range of feelings, health conditions, mental states and actions. But because vision is the result of constant eye-movements, teasing out what is important from what is noise is complex and data intensive. Furthermore, a significant challenge is controlling for what people look at compared to what is presented to them.
The following presents a methodology for combining and analyzing eye-tracking on a video of a natural and complex scene with a machine learning technique for analyzing the content of the video. In the protocol we focus on analyzing data from filmed videos, how a video can be best used to record participants&#39; eye-tracking data, and importantly how the content of the video can be analyzed and combined with the eye-tracking data. We present a brief summary of the results and a discussion of the potential of the method for further studies in complex environments.

The objective of the protocol is to detail how to collect video data for use in the laboratory; how to record eye-tracking data of participants looking at the data and how to efficiently analyze the content of the videos that they were looking at using a machine learning technique.

都市公園環境における歩行の映像を自由に視聴する映像コンテンツの分析とアイトラッキングデータを組み合わせる

As individuals increasingly live in cities, methods to study their everyday movements and the data that can be collected becomes important and valuable. ...