Name: the bm12 inducible model of systemic lupus erythematosus (sle) in c57bl/6 mice
Uploaded: 2015-11-01T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 4 s
Description: Watch this Scientific Journal Video about The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus SLE in C57BL/6 Mice at JoVE.com

This work was supported in part by the Lupus Research Institute, NCI grant CA138617, NIDDK grant DK090978, Charlotte Schmidlapp Award (to E.M.J.), and the Albert J. Ryan Fellowship (to J.K.). We are grateful for the support and instrumentation provided by the Research Flow Cytometry Core in the Division of Rheumatology at Cincinnati Children&#8217;s Hospital Medical Center, supported in part by NIH AR-47363, NIH DK78392 and NIH DK90971.

<ol>
	<li>Helmick, C. G., Felson, D. T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Part+I.+Arthritis+Rheum.">Part I. Arthritis Rheum.</a> Estimates of the prevalence of arthritis and other rheumatic conditions in the United States. 58, 15-25 (2008).</li><li>Somers, E. C., Marder, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Population-based+incidence+and+prevalence+of+systemic+lupus+erythematosus:+The+Michigan+lupus+epidemiology+and+surveillance+program.">Population-based incidence and prevalence of systemic lupus erythematosus: The Michigan lupus epidemiology and surveillance program.</a> Arthritis and Rheumatol. 66, 369-378 (2014).</li><li>Perry, D., Sang, A., Yin, Y., Zheng, Y. -. Y., Morel, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Murine+models+of+systemic+lupus+erythematosus.">Murine models of systemic lupus erythematosus.</a> J Biomed Biotechnol. 2011, 271694 (2011).</li><li>Lindholm, L., Rydberg, L., Stranneg&#229;rd, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+host+plasma+cells+during+graft-versus-host+reactions+in+mice.">Development of host plasma cells during graft-versus-host reactions in mice.</a> Eur J Immunol. 3 (8), 511-515 (1973).</li><li>Fialkow, P. J., Gilchrist, C., Allison, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Autoimmunity+in+chronic+graft-versus-host+disease.">Autoimmunity in chronic graft-versus-host disease.</a> Clin Exp Immunol. 13, 479-486 (1973).</li><li>Streilein, J. W., Stone, M. J., Duncan, W. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Studies+on+the+Specificity+of+Autoantibodies+Produced+in+Systemic+Graft-vs-Host+Disease.">Studies on the Specificity of Autoantibodies Produced in Systemic Graft-vs-Host Disease.</a> J Immunol. 114 (1), 255-260 (1975).</li><li>Gleichmann, E., Gleichmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Diseases+caused+by+reactions+of+T+lymphocytes+to+in+compatible+structures+of+the+major+histocompatibility+complex.+I.+Autoimmune+hemolytic+anemia.">Diseases caused by reactions of T lymphocytes to in compatible structures of the major histocompatibility complex. I. Autoimmune hemolytic anemia.</a> Eur J Immunol. 6 (12), 899 (1976).</li><li>Morris, S., Cohen, P. L., Eisenberg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Experimental+induction+of+systemic+lupus+erythematosus+by+recognition+of+foreign+Ia.">Experimental induction of systemic lupus erythematosus by recognition of foreign Ia.</a> Clin Immunol Immunopathol. 57 (2), 263-273 (1990).</li><li>Chen, F., Maldonado, M., Madaio, M., Eisenberg, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+Role+of+Host+(Endogenous)+T+Cells+in+Chronic+Graft-Versus-Host+Autoimmune+Disease.">The Role of Host (Endogenous) T Cells in Chronic Graft-Versus-Host Autoimmune Disease.</a> J Immunol. 161 (11), 5880-5885 (1998).</li><li>Klarquist, J., Hennies, C. M., Lehn, M. A., Reboulet, R. A., Feau, S., Janssen, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=STING-Mediated+DNA+Sensing+Promotes+Antitumor+and+Autoimmune+Responses+to+Dying+Cells.">STING-Mediated DNA Sensing Promotes Antitumor and Autoimmune Responses to Dying Cells.</a> J Immunol. 193, 6124-6134 (2014).</li><li>Petri, M., Orbai, A. -. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Derivation+and+validation+of+systemic+lupus+international+collaborating+clinics+classification+criteria+for+systemic+lupus+erythematosus.">Derivation and validation of systemic lupus international collaborating clinics classification criteria for systemic lupus erythematosus.</a> Arthritis Rheum. 64 (8), 2677-2686 (2012).</li><li>Zangala, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+genomic+DNA+from+mouse+tails.">Isolation of genomic DNA from mouse tails.</a> J Vis Exp. (6), e246 (2007).</li><li>Lorenz, T. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Polymerase+Chain+Reaction:+Basic+Protocol+Plus+Troubleshooting+and+Optimization+Strategies.">Polymerase Chain Reaction: Basic Protocol Plus Troubleshooting and Optimization Strategies.</a> J Vis Exp. (63), e3998 (2012).</li><li>. Product information: Thermo Scientific FastDigest PsuI Available from: <a target="_blank" href="https://tools.lifetechnologies.com/content/sfs/manuals/MAN0012567_FastDigest_PsuI_UG.pdf">https://tools.lifetechnologies.com/content/sfs/manuals/MAN0012567_FastDigest_PsuI_UG.pdf</a> (2012)</li><li>Matheu, M. P., Parker, I., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Dissection+and+2-photon+imaging+of+peripheral+lymph+nodes+in+mice.">Dissection and 2-photon imaging of peripheral lymph nodes in mice.</a> J Vis Exp. (7), e265 (2007).</li><li>Harrell, M. I., Iritani, B. M., Ruddell, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Lymph+node+mapping+in+the+mouse.">Lymph node mapping in the mouse.</a> J Immunol Methods. 332 (1-2), 170-174 (2008).</li><li>Covelli, V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Chapter+3,+Internal+examination.">Chapter 3, Internal examination.</a> Guide to the necroscopy of the mouse. , (2009).</li><li>Quah, B. J. C., Parish, C. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+use+of+carboxyfluorescein+diacetate+succinimidyl+ester+(CFSE)+to+monitor+lymphocyte+proliferation.">The use of carboxyfluorescein diacetate succinimidyl ester (CFSE) to monitor lymphocyte proliferation.</a> J Vis Exp. (44), e2259 (2010).</li><li>Matheu, M. P., Cahalan, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Isolation+of+CD4++T+cells+from+mouse+lymph+nodes+using+Miltenyi+MACS+purification.">Isolation of CD4+ T cells from mouse lymph nodes using Miltenyi MACS purification.</a> J Vis Exp. (9), e53319 (2007).</li><li>Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Manual+Restraint+and+Common+Compound+Administration+Routes+in+Mice+and+Rats.">Manual Restraint and Common Compound Administration Routes in Mice and Rats.</a> J Vis Exp. (67), e2771 (2012).</li><li>Hoff, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Methods+of+Blood+Collection+in+the+Mouse.">Methods of Blood Collection in the Mouse.</a> Lab Animal. 29 (10), 47-53 (2000).</li><li>Cohen, M., Varki, N. M., Jankowski, M. D., Gagneux, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Using+Unfixed,+Frozen+Tissues+to+Study+Natural+Mucin+Distribution.">Using Unfixed, Frozen Tissues to Study Natural Mucin Distribution.</a> J Vis Exp. (67), e3928 (2012).</li><li>Cohen, P. L., Maldonado, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+for+SLE.">Animal models for SLE.</a> Curr Protoc Immunol.. Chapter 15, Unit 15.20 (2003).</li><li>Seavey, M. M., Lu, L. D., Stump, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Animal+models+of+systemic+lupus+erythematosus+(SLE)+and+ex+vivo+assay+design+for+drug+discovery.">Animal models of systemic lupus erythematosus (SLE) and ex vivo assay design for drug discovery.</a> Curr Protoc Pharmacol. Chapter 5, Unit 5 (2011).</li><li>McKenna, K. C., Vicetti Miguel, R. D., Beatty, K. M., Bilonick, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=A+caveat+for+T+cell+transfer+studies:+generation+of+cytotoxic+anti-Thy1.2+antibodies+in+Thy1.1+congenic+mice+given+Thy1.2++tumors+or+T+cells.">A caveat for T cell transfer studies: generation of cytotoxic anti-Thy1.2 antibodies in Thy1.1 congenic mice given Thy1.2+ tumors or T cells.</a> J Leukoc Biol. 89 (2), 291-300 (2011).</li><li>Scott, D. M., Ehrmann, I. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Identification+of+a+mouse+male-specific+transplantation+antigen+H-Y..">Identification of a mouse male-specific transplantation antigen H-Y..</a> Nature. 376, 695-698 (1995).</li><li>Joly, E., Hudrisier, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=What+is+trogocytosis+and+what+is+its+purpose.">What is trogocytosis and what is its purpose.</a> Nat Immunol. 4 (9), 815 (2003).</li><li>Brown, D. R., Calpe, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Cutting+edge:+an+NK+cell-independent+role+for+Slamf4+in+controlling+humoral+autoimmunity.">Cutting edge: an NK cell-independent role for Slamf4 in controlling humoral autoimmunity.</a> J Immunol. 187 (1), 21-25 (2011).</li><li>Morris, S. C., Cheek, R. L., Cohen, P. L., Eisenberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allotype-specific+immunoregulation+of+autoantibody+production+by+host+B+cells+in+chronic+graft-versus+host+disease.">Allotype-specific immunoregulation of autoantibody production by host B cells in chronic graft-versus host disease.</a> J Immunol. 144 (3), 916-922 (1990).</li><li>Choudhury, A., Cohen, P. L., Eisenberg, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=B+cells+require+&#8220;nurturing&#8221;+by+CD4+T+cells+during+development+in+order+to+respond+in+chronic+graft-versus-host+model+of+systemic+lupus+erythematosus.">B cells require &#8220;nurturing&#8221; by CD4 T cells during development in order to respond in chronic graft-versus-host model of systemic lupus erythematosus.</a> Clin Immunol. 136 (1), 105-115 (2010).</li><li>Slifka, M. K., Antia, R., Whitmire, J. K., Ahmed, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Humoral+immunity+due+to+long-lived+plasma+cells.">Humoral immunity due to long-lived plasma cells.</a> Immunity. 8 (3), 363-372 (1998).</li></ol>

The authors have nothing to disclose.

BM12誘導モデルは、SLEの細胞および分子プロセスを研究するための比較的容易かつ効率的な方法です。自己抗原に対する養子移入CD4 T細胞の慢性的活性化は、ここで説明したように、フローサイトメトリーによって測定することができるTFH、GC B細胞および形質細胞の蓄積につながります。このモデルを使用して、将来の研究は、迅速かつ容易にSLEを有する患者において生じるものに似ていると、最終的に自己抗体の病理学的蓄積を支配する自己免疫胚中心プロセスにおける候補遺伝子および新規治療薬の役割を調べることができます。さらに、ここで説明したフローサイトメトリー分析は、以下を含む免疫グロブリンの開発を必要とする追加のマウスモデルを研究するために使用されるが、自己免疫、感染症、およびアレルギーに限定されないことができます。 ヒトの疾患のすべての動物モデルと同様に、このモデルは、その制限を有します。疾患develのスピードを考えますOPSとその大きさは、SLEの発症に関与する全ての遺伝子は、このモデルにおける病原性のために必要である可能性が高いではありません。データは遺伝的に改変されたレシピエントにおけるTFHの最小限の拡張を提案する際に加えて、注意が移植片拒絶を除外するために取られなければなりません。コンジェニックマーカーは、レシピエント細胞は、他の方法でドナー細胞の非存在を隠すことができTFH（ 図3B）に分化することができるので、特に収穫時にドナー細胞の存在を確認するために使用されるべきです。コンジェニックマーカーを使用して、我々は明らかに、14日目（ 図6）によって拒絶抗原を保有するドナー細胞の完全な除去が観察されました。我々は成功したCD45.1 + BM12とドナーとしてCD45.2 + BM12マウスを使用して、受信者（ 図などのCD45.1 + BoyJ（B6.SJL- Ptprc PEPC B / BoyJ）とCD45.2 + C57BL / 6マウスいます3、6、7、および未発表データ）。しかし、野生型コンジェニックB6.PL- はThy1のA / CyJマウス系統からのCD90.1 +細胞は 、明らかではない現象をよくグラフト、またCD90.1 +レシピエント（未発表データ）にグラフトよくCD90.2 + BM12細胞をしませんこのモデル26に固有。 最初はモリスらによって報告されているように、C57BL / 6またはBM12マウスのいずれかが、ドナーまたはレシピエントとして使用することができます。9しかし、私たちの研究室では、B6マウスにBM12セルの転送は、T細胞とB細胞のより一貫性の拡大を生成見つけます14日目での集団はまた、異なるグループからのドナーとレシピエントマウスは、性別と年齢が一致する必要があります。 BM12モデルの最初の記述で報告された実験は、男性→男性と女性→女性の転送9との間に任意の疾患パラメータに有意差は認められなかったが、男性→女性の転送は、男性の抗原（HY）のように、お勧め転送CD4 T細胞によって発現されませんグラフトrejeを誘導することができます女性の受信者27でction。 ゲートは全体のCD45.1 +グラフトするものではない-コンジェニックマーカーの抗体および蛍光色素を選択するとき、それは、ドナー細胞は、CD45.2ことを、程度の差は、受信者のコンジェニックマーカーについて陽性になることに留意すべきです。現象は明らかにCD45.1 +ナイーブ、CD45.1 +ドナー、およびCD45.2 +レシピエントCD4 + T細胞（ 図7）によって、CD45.2の発現の比較に示されています。注目すべきは、ドナー細胞は、ナイーブコントロール（ 図7）と比較して、自分のコンジェニックマーカーの発現をアップレギュレートするように見えます。同様の結果はまた、CD45.1 + BoyJマウスにCD45.2 + BM12転送に見られた（データは示さず）。おそらく、活性化CD4 T細胞によるtrogocytosis 28から受信者のCD45結果の取得は、受信者B細胞との相互作用を繰り返し、以下の通りです。実際には、BM12モードlは、in vivoで trogocytosisの過程を研究に有用なツールを証明することができます。 <img alt="図7" src="/files/ftp_upload/53319/53319fig7.jpg" /> 図7ドナー細胞は、レシピエントCD45コンジェニックマーカーを獲得する。CD45.1 + BM12リンパ球CD45.2 + C57BL / 6レシピエントに移しました。ドナー、レシピエント、およびナイーブ（CD45.1 +）CD4 T細胞は、14日、転写後CD45.1およびCD45.2の発現について評価されている。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53319/53319fig7large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> これは、C57BL / 7のマウスへの精製されたBM12 CD4 T細胞の移動は、疾患29を開始するのに十分であることが示されています。しかし、同等の病気全体リンパ球が転送されるときに展開し、および精製は必ずしもT CEの際の疾患依存性を研究するために必要とされませんLL-固有の遺伝子発現。アイゼンバーグらは、明らかにBM12モデルにおける抗体産生細胞は、ほぼ独占的に受信者の起源30のであることを実証しました。我々のデータは、そのレシピエントT細胞が関与し得る示すが、また、レシピエントCD4 T細胞10の要件は、外因性IL-4 31を添加することにより設定オフすることができ、開発中のB細胞の「育成」、に制限され多少胚中心反応で、そのうちのいくつかはTFH表現型（ 図3B、右下）を開発そうであるように。 すべてのBM12実験のためになされなければならない1つの重要な決定は、分析のための組織を収穫するときです。もちろん、決定は要因は変更になる場合があります現在の研究に重要であるものを正確に依存します。彼らはTFH細胞と形質細胞の初期の開発に焦点を当てとしてここに記載された実験では、14日かかります。しかしながら、このモデルは、慢性であるためSLEのGVHDモデルは、疾患は、はるかに長い監視することができます。実際には、糸球体腎炎を含むSLEの特定の臨床的特徴は、後に開発しています。蛋白尿は、早ければ2週間として、注射後検出されたが、4〜8週間で、注射後10,31ピークレベルに達してきました。さらに、フローサイトメトリーは、ここで説明したが、2週間持続する実験のために最適化されている分析します。我々は、この時点でのGCのB細胞および形質細胞のかなりの数を見つけます。 、追加の時間が与えられているが、ANA分泌形質細胞の大部分は、骨髄32内に存在することができます。また、このフロー染色パネルによって識別形質細胞は、おそらくまた、形質インこれらの2つの細胞タイプを区別するために含まれ、追加の抗体が必要であろう。 TFHの拡大は、おそらく我々が注目している上に14日間のウィンドウの後いくつかの時点でピークに達します。しかし、我々の知る限り、何の研究では、BM12ドナー細胞の2週間を超えた数、または使用することを報告していませんDコンジェニックマーカーは、養子移入された細胞を追跡することができます。

全身性エリテマトーデス（SLE）は、抗核抗体（ANA）の生産及び糸球体腎炎によって原型特徴複雑な自己免疫疾患です。多数の他の皮膚などの後遺症、心肺、および肝病変はいくつかの個体における疾患と関連しています。米国での有病率の推定値は、女性やマイノリティ3で特に高頻度で、150,000-1,500,000 1,2から、大きく異なります。 SLEの病因を識別することは困難であったが、それは全身性自己免疫で終わる様々な遺伝的及び環境的要因の相互作用から生じると考えられています。 多数の動物モデルは、疾患の発症と進行をもたらす因子を研究するために使用されてきました。 SLEのクラシックマウスモデルは、PなどNZWのF1モデルとそのNZM誘導体、MLR / LPR株、およびBXSB /のYaa株、および誘導系NZB Xを含む遺伝的素因のマウス系統を含み、ristaneおよび慢性移植片対宿主病（cGVHDの）モデル4。 GVHDモデルにおける自己抗体の産生の初期の報告では、F1の転送5に親のための様々なマウス系統またはハムスター株を使用- 8。ループス様疾患を研究するために使用されるより一般的な方法は、現在、DBA / 2親→（C57BL / 6×DBA / 2）F1を含み、BM12伝達モデルは、ここで説明します。各モデルは、独自の警告を持っていますが、それらは一般にヒトの疾患の臨床的特徴と相関機能の共通セットを共有しています。マウスモデルの中で最も頻繁に報告されたパラメータは、脾腫、リンパ節症、腎炎、ANAの生産、および細胞レベルで、T濾胞ヘルパー細胞（TFH）、胚中心（GC）B細胞および形質細胞の増殖が含まれます。 H2 - - Ab1のBM12 / KhEgJ（BM12）マウス、系統iは、誘導性BM12モデルは、IA BM12 B6（C）からのリンパ球の養子移入することによって達成されますIA bはC57BL / 6（B6）マウスに、MHCクラスII上の3個のアミノ酸置換を除いて、C57BL / 6にdentical。受信者APCによるドナーCD4 T細胞のAlloactivati​​onは密接にSLEに似た症状をcGVHDのにつながります。具体的には、これらはドナー由来TFH、レシピエント由来のGCのB細胞および形質細胞の増殖、及び抗dsDNA、抗ssDNAを、抗クロマチン、及び抗RBC抗体9を含むアナスの生産の拡大を含みます。時間が経つにつれて、レシピエントマウスは、糸球体、間質中のIgG沈着、腎臓10の血管領域に関連する糸球体腎炎を発症します。我々は最近、ヒト疾患と同様に、私はこのモデル11で型IFNの重要な役割もある、ということを示しています。注目すべきは、人間SLEの定義基準は、このマウスモデルの顕著な特徴であり、どちらも抗dsDNA抗体12の存在下で、SLEと互換性腎炎の開発が含まれています。 SEがあります自発的なモデルの上にBM12モデルのveral利点。 SLEのような兆候を開発するクラシックモデルは、自然にノックアウトするために交差またはその他の遺伝的に改変されたマウスは難しく、時間がかかる行うハイブリッドマウス系統、近交系マウス系統ではないB6の背景に、またはB6の背景に大きな遺伝子座のいずれかに依存しています。 BM12誘導モデルでは、遺伝的に改変されたマウスは、特定の遺伝子が疾患のために重要であり得る、細胞コンパートメントのより迅速な同定を可能にする、ドナーまたはレシピエントのいずれかとして機能することができます。また、BM12モデルにおける疾患の発生は、ほとんどの自発的なモデルのために数ヶ月に比べ、アナスの出現まで、わずか2週間を必要とする、はるかに高速です。また、異なる時点で疾患を発症する自発的なモデルとは対照的に、BM12ー→B6モデルにおける疾患の発症および進行は非常に同期化されます。これは、bのできる適切なサイズのコホートの生成を可能にしますeは、疾患の発生の任意の段階で介入または治療戦略のために使用されます。 以下は、B6の背景に、C57BL / 6マウスにBM12リンパ球の養子移入、または遺伝的変異によって、SLEのような自己免疫を開始するための詳細なプロトコルです。さらに、我々はTFH、GC B細胞、およびヒト疾患に関連する形質細胞 - 細胞タイプを列挙するためのフローサイトメトリー染色プロトコルを記述する。重要なことは、これらのプロトコルはまた、SLEのほとんどのマウスモデルにおける疾患を特徴付ける、および他の疾患モデルでTFH、GC B細胞および形質細胞を同定するために使用され得ます。

<table><tbody><tr><td>B6.SJL-Ptprca Pepcb/BoyJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>001162</td><td>CD45.1+ BoyJ mouse strain</td></tr><tr><td>B6(C)-H2-Ab1bm12/KhEgJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>001162</td><td>Bm12 mouse strain</td></tr><tr><td>FastDigest PsuI</td><td>Life Technologies</td><td>FD1554</td><td>Restriction digest enzyme for genotyping</td></tr><tr><td>1X RBC Lysis Buffer</td><td>eBioscience</td><td>00-4333-57</td><td></td></tr><tr><td>IMDM</td><td>GE Healthcare</td><td>SH30228.01</td><td></td></tr><tr><td>Plasma Separation Tube (PST)</td><td>BD</td><td>365974</td><td>Blood collection tube with Dipotassium EDTA</td></tr><tr><td>Serum Separation Tube (SST)</td><td>BD</td><td>365967</td><td>Blood collection tube with Clot activator / SST Gel</td></tr><tr><td>Ficoll</td><td>GE Healthcare</td><td>17-1440-02&amp;nbsp;</td><td>High density cell separation solution</td></tr><tr><td>Lympholyte-M</td><td>Cedarlane</td><td>CL5030</td><td>High density cell separation solution</td></tr><tr><td>GL-7-biotin</td><td>eBioscience</td><td>13-5902-82&amp;nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Streptavidin-BUV395</td><td>BD</td><td>564176</td><td></td></tr><tr><td>CD138-BV421</td><td>BioLegend</td><td>142508</td><td></td></tr><tr><td>CD4-BV510</td><td>BioLegend</td><td>100559</td><td></td></tr><tr><td>TCR&amp;beta;-BV605</td><td>BD</td><td>562840</td><td></td></tr><tr><td>CD45.1-BV711</td><td>BioLegend</td><td>110739</td><td></td></tr><tr><td>CD45.2-FITC</td><td>BioLegend</td><td>109806</td><td></td></tr><tr><td>PD-1-PE</td><td>BioLegend</td><td>135206</td><td></td></tr><tr><td>CD19-PerCP</td><td>BioLegend</td><td>115532</td><td></td></tr><tr><td>Fas-PE-Cy7</td><td>BD</td><td>557653</td><td></td></tr><tr><td>CXCR5-APC</td><td>BioLegend</td><td>145506</td><td></td></tr><tr><td>Fixable Viability Dye ef780</td><td>eBioscience</td><td>65-0865-18</td><td></td></tr><tr><td>CD4-BV421</td><td>BioLegend</td><td>100443</td><td></td></tr><tr><td>1.2 ml FACS tube inserts, racked</td><td>USA Scientific</td><td>1412-1400</td><td></td></tr><tr><td>BD Falcon&amp;trade; Round-Bottom Tubes</td><td>BD</td><td>352017</td><td></td></tr></tbody></table>

the bm12 inducible model of systemic lupus erythematosus (sle) in c57bl/6 mice

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible animal models mirror common components of human disease, including the bm12 transfer model. Upon transfer of bm12 splenocytes or purified CD4 T cells, C57BL/6 mice rapidly develop large frequencies of T follicular helper cells (Tfh), germinal center (GC) B cells, and plasma cells followed by high levels of circulating anti-nuclear antibodies. Since this model utilizes mice on a pure C57BL/6 background, researchers can quickly and easily study disease progression in transgenic or knockout mouse strains in a relatively short period of time. Here we describe protocols for the induction of the model and the quantitation Tfh, GC B cells, and plasma cells by multi-color flow cytometry. Importantly, these protocols can also be used to characterize disease in most mouse models of SLE and identify Tfh, GC B cells, and plasma cells in other disease models.

罹患マウスは、質量および細胞性（ 図2）の面で健康なマウスの脾臓2-3倍のサイズを示す、わずか14日間で脾腫を開発しています。 脾細胞を順次光散乱（SSC-AによるFSC-A）にゲートされ、ダブレット（FSC-AによるFSC-Wまたは-H）、生細胞（生存性染料の低い染色）、 および CD4 +TCRβ+（ 図の排除図3（a））。ドナー細胞は、CD45.1およびCD45.2（ 図3B、左下）に基づいて、レシピエント細胞から区別されます。 PD-1、CXCR5、のBcl-6、およびICOS（ 図3B、C）のアップレギュレーションにより特徴付けられるドナー細胞は、主に、T濾胞ヘルパー（TFH）細胞表現型を採用します。レシピエントCD4 T細胞集団の一部はまた、TFH（ 図3B、右下）に分化します。導入細胞の初期ダイ・オフおよび/または移行後に、ドナー由来TFHの拡大は対数であり、r14日注射後のマウスの脾臓で10から20000000細胞（ 図3D）を eaching。 転送リンパ球のCFSE標識は、ドナーCD4 T細胞は、早期活性化後TFHに分化することを実証しました。本質的に全ての分割された3日目で観察された細胞、7、及び14上方調節CXCR5とPD-1（ 図4）。増殖のピークプロファイルはまた、ドナーCD4 T細胞の割合が比較的低いalloactivati​​onと分裂を受けたことを示唆しています。 14日目では、検出可能なドナー細胞のほとんどは、CFSEによって測定分割の最大数を超えて分割したものです。 ドナー由来TFHの膨張は、内因性GCのB細胞および形質細胞（ 図5A）の対応する蓄積を伴います。脾臓中の形質細胞の蓄積は、3日目または7（ 図5B）にナイーブ動物を超える増加を示さない、TFHのそれに比べて遅れています。 Accordingly、抗核抗体は、従来の9日目（データは示していない）に容易に検出可能ではなく、確実に14日11に定量することができます。 コンジェニックマーカーを使用することにより、我々は複数の株にドナー細胞の拒絶反応を観察しています。これはマウスを十分にC57BL / 6バックグラウンドに戻し交配されていない一般的な問題ではあるがBM12細胞は、一般的に完全であると考えられているB6.PL- はThy1 A / CyJ（CD90.1）マウスに移したとき、我々はまた、拒絶反応を観察しました戻し交配。したがって、マウスは、日常的に、最初のCD4 T細胞の移植の効率を評価するために、フロー染色血液サンプルによって日〜3でスクリーニングされます。我々は、移植された細胞は、この初期の時点では非常に少ない拡大したCFSE増殖実験からわかっています。これらの結果は、14日目に収穫から得られた結果と比較されます。拒絶反応の例の場合には3000万CD45.1 + BM12リンパ球は、 カーディフに移しました<html> - / - 12世代にわたって、C57BL / 6マウスに戻し交配されたマウス。 5日目に、すべてのマウスは、同等の移植（CD4 T細胞を循環させる2-3％）で表示されたが、14日目まで、BM12ドナー細胞は、完全に遺伝的に改変された受信者（ 図6）から排除しました。 <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/53319/53319fig2.jpg" /> 図2.脾臓成長速度は、BM12リンパ球の注入後。脾臓を直接切除（左）の後に、高精密天秤で秤量しました。生細胞数（右）死細胞を除外するためにトリパンブルーを用いて血球計でカウントすることによって決定しました。結果は、SEM、平均±として示されている。ここで、n = 9、4、3、6、それぞれ。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53319/53319fig2large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> JPG &quot;/&gt; SLE。CD45.1 + リンパ球のBM12 BM12 モデルにおけるT濾胞性ヘルパー細胞の拡大図3.分析 C57BL / 6レシピエントに移し、脾臓を14日後に分析しました。 （A）「リンパ球」（最初のパネル）、「単細胞」（第2パネル）、「生細胞」（第三のパネル）、および「CD4 T細胞」（第四パネル）を示す代表的ゲーティング戦略。 （B）ドナー細胞は、CD45.1およびCD45.2の染色によって、レシピエントCD4 T細胞と区別し、PD-1およびCXCR5の発現について分析します。一般TFHに関連付けられたいくつかのタンパク質のアップレギュレーションによって示されるように（C）ドナー細胞は、TFH表現型を採用します。 （D）典型的な結果は、3日目、7、および14郵便振替でのドナー由来TFH（CD4 + CD45.1 + PD-1 + CXCR5 +生細胞として定義される）の拡大を示します。結果が示されていますsがそれぞれ±SEM、N = 5、4、3、および6を、意味している。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53319/53319fig3large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図4" src="/files/ftp_upload/53319/53319fig4.jpg" /> 図4 PD-1およびCXCR5は、分裂細胞でアップレギュレートされる。BM12細胞は、従来C57BL / 6レシピエントへの注射にCFSEで標識しました。代表的フロープロットは7,3でドナーCD4 T細胞のために示され、14日後に注射されている。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53319/53319fig4large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図5" src="/files/ftp_upload/53319/53319fig5.jpg" /> 図5.脾臓形質細胞およびGC B細胞の拡大。（A）ナイーブマウスの脾臓からの代表的なフロープロット、またはからのもの14日CD45.1 + BM12転送後のマウス。形質細胞は、CD138 + CD19 低生細胞（上パネル）と定義されます。 GC B細胞は、GL-7およびFas（下のパネル）を発現するCD19 + B細胞のサブセットです。 （B）Quantitaveデータは、経時脾臓の形質細胞の蓄積を示します。結果は、SEM、平均±として示されている。ここで、n = 5、4、3、6、それぞれ。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53319/53319fig5large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <img alt="図6" src="/files/ftp_upload/53319/53319fig6.jpg" /> 図6. BM12の移植片は、いくつかの遺伝的に改変されたレシピエントマウスによって拒否されます。CD45.1 + BM12リンパ球は、遺伝的に改変マウス（上のパネル）またはC57BL / 6（下のパネル）レシピエントマウスのいずれかに移しました。マウスは、5日間注射後に採血し、グラフト効率を評価しました。脾臓細胞同じマウスからの14日後に分析した。 <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/53319/53319fig6large.jpg" target="_blank">この図の拡大版をご覧になるにはこちらをクリックしてください。</a> <table border="0" fo:keep-together.within-page="1" style="top-margin: 20px"><tbody><tr><td> プライマー名 </td><td colspan="2"> 配列（5 &#39; - 3&#39;） </td><td> 焼なまし温度 </td></tr><tr><td> Bm12F </td><td colspan="2"> CGTGGTCCCCGCTGTCCCCC </td><td rowspan="2"> * 65°C </td></tr><tr><td> Bm12R </td><td colspan="2"> GGGCAGAGGGCAGAGGTGAG </td></tr><tr><td></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>セグメント</td><td>サイクル数</td><td>温度</td><td>デュレーション</td></tr><tr><td> 1 </td><td> 1 </td><td> 95°C </td><td> 2分。 </td></tr><tr><td rowspan="3"> 2 </td><td rowspan="3"> 40 </TD&gt; <td> 95°C </td><td> 15秒。 </td></tr><tr><td> * 65から0.5℃/ステップ</td><td> 15秒。 </td></tr><tr><td> 72°C </td><td> 45秒。 </td></tr><tr><td> 3 </td><td> 1 </td><td> 72°C </td><td> 10分。 </td></tr></tbody></table> 表1：BM12遺伝子型決定のためのプライマーおよび熱サイクル条件に最適な熱サイクル条件は、使用される正確な試薬や機器に依存します。プロトコルはまた、静的なアニーリング温度を使用して動作するかもしれないが、これらの条件は、各ステップでアニール温度を変化させることが可能なサーマルサイクラーのために最適化されています。 <img alt="表2" src="/files/ftp_upload/53319/53319table2.jpg" /> 表2：我々は正常に使用しているパネルは、 脾TFH、GC Bおよびフローサイトメトリーによる形質細胞を同定するための抗体のパネルが提示されています3日目（左）とBM12細胞注入（中）14日後にTおよびB細胞の分析でグラフト効率を評価するため。これらは、5レーザー（355、405、488、561、640 nm）の持つLSRIIに最適化されています。これらは、すべてのマシンのための最良の選択肢ではないかもしれないけれども、各蛍光色素の推奨フィルタセットは、（右）記載されています。どのレーザー、PMTに応じて、フィルタのセットの組み合わせは、複数のパネルにT及びB細胞分析パネルを分離する必要があるかもしれない、利用可能です。

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The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus SLE in C57BL/6 Mice

The transfer of bm12 lymphocytes into a C57BL/6 recipient is an established model of systemic lupus erythematosus. Here we describe how to initiate disease using this model and how to characterize T follicular helper cells, germinal center B cells and plasma cells by flow cytometry.

C57BL / 6マウスにおける全身性エリテマトーデス（SLE）のBM12誘導モデル

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease with diverse clinical and immunological manifestations. Several spontaneous and inducible ...

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Nanyang Technological University

Research

JoVE Journal

Medicine

The bm12 Inducible Model of Systemic Lupus Erythematosus (SLE) in C57BL/6 Mice

17.4K ビュー.  Cincinnati Children's Hospital Medical Center and University of Cincinnati College of Medicine. The transfer of bm12 lymphocytes into a C57BL/6 recipient is an established model of systemic lupus erythematosus. Here we describe how to initiate disease using this model and how to characterize T follicular helper cells, germinal center B cells and plasma cells by flow cytometry.

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Induction of Experimental Autoimmune Hypophysitis in SJL Mice

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse models allow us to study how diseases unfold, often providing a good replica of the same processes occurring in humans. For some autoimmune diseases, like type 1A diabetes, there are models (the NOD mouse) that spontaneously develop a disease similar to the human counterpart. For many other autoimmune diseases, however, the model needs to be induced experimentally. A common approach in this regard is to inject the mouse with a dominant antigen derived from the organ being studied. For example, investigators interested in autoimmune thyroiditis inject mice with thyroglobulin2, and those interested in myasthenia gravis inject them with the acetylcholine receptor3. If the autoantigen for a particular autoimmune disease is not known, investigators inject a crude protein extract from the organ targeted by the autoimmune reaction. For autoimmune hypophysitis, the pathogenic autoantigen(s) remain to be identified4, and thus a crude pituitary protein preparation is used. In this video article we demonstrate how to induce experimental autoimmune hypophysitis in SJL mice.

This video shows how to induce autoimmune hypophysitis in SJL mice and how to assess its severity by histopathology.

SJLマウスにおける実験的自己免疫性下垂体炎の誘導

Autoimmune hypophysitis can be reproduced experimentally by the injection of pituitary proteins mixed with an adjuvant into susceptible mice1. Mouse ...

免疫・感染学

The CYP2D6 Animal Model: How to Induce Autoimmune Hepatitis in Mice

Autoimmune hepatitis is a rare but life threatening autoimmune disease of the liver of unknown etiology1,2. In the past many attempts have been made to generate an animal model that reflects the characteristics of the human disease 3-5. However, in various models the induction of disease was rather complex and often hepatitis was only transient3-5. Therefore, we have developed a straightforward mouse model that uses the major human autoantigen in type 2 autoimmune hepatitis (AIH-2), namely hCYP2D6, as a trigger6. Type 1 liver-kidney microsomal antibodies (LKM-1) antibodies recognizing hCYP2D6 are the hallmark of AIH-27,8. Delivery of hCYP2D6 into wildtype FVB or C57BL/6 mice was by an Adenovirus construct (Ad-2D6) that ensures a direct delivery of the triggering antigen to the liver. Thus, the ensuing local inflammation generates a fertile field9 for the subsequent development of autoimmunity. A combination of intravenous and intraperitoneal injection of Ad-2D6 is the most effective route to induce a long-lasting autoimmune damage to the liver (section 1). Here we provide a detailed protocol on how autoimmune liver disease is induced in the CYP2D6 model and how the different aspects of liver damage can be assessed. First, the serum levels of markers indicating hepatocyte destruction, such as aminotransferases, as well as the titers of hCYP2D6 antibodies are determined by sampling blood retroorbitaly (section 2). Second, the hCYP2D6-specific T cell response is characterized by collecting lymphocytes from the spleen and the liver. In order to obtain pure liver lymphocytes, the livers are perfused by PBS via the portal vein (section 3), digested in collagen and purified over a Percoll gradient (section 4). The frequency of hCYP2D6-specific T cells is analyzed by stimulation with hCYP2D6 peptides and identification of IFN&gamma;-producing cells by flow cytometry (section 5). Third, cellular infiltration and fibrosis is determined by immunohistochemistry of liver sections (section 6). Such analysis regimen has to be conducted at several times after initiation of the disease in order to prove the chronic nature of the model. The magnitude of the immune response characterized by the frequency and activity of hCYP2D6-specific T and/or B cells and the degree of the liver damage and fibrosis have to be assessed for a subsequent evaluation of possible treatments to prevent, delay or abrogate the autodestructive process of the liver.

Infection of mice with an Adenovirus expressing the major human autoantigen cytochrome P450 2D6 (hCYP2D6) recognized by sera of patients suffering from type 2 autoimmune hepatitis results in a persistent form of autoimmune-mediated liver disease characterized by extensive hepatitis, fibrosis and generation of a CYP2D6-specific immune response.

CYP2D6の動物モデル：マウスにおける自己免疫性肝炎を誘導する方法

Autoimmune hepatitis is a rare but life threatening autoimmune disease of the liver of unknown etiology1,2. In the past many attempts have been made to ...

医学

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein (MOG35-55) Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis (EAE) in C57BL/6 Mice

Multiple sclerosis is a chronic neuroinflammatory demyelinating disorder of the central nervous system with a strong neurodegenerative component. While the exact etiology of the disease is yet unclear, autoreactive T lymphocytes are thought to play a central role in its pathophysiology. MS therapy is only partially effective so far and research efforts continue to expand our knowledge on the pathophysiology of the disease and to develop novel treatment strategies. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is the most common animal model for MS sharing many clinical and pathophysiological features. There is a broad diversity of EAE models which reflect different clinical, immunological and histological aspects of human MS. Actively-induced EAE in mice is the easiest inducible model with robust and replicable results. It is especially suited for investigating the effects of drugs or of particular genes by using transgenic mice challenged by autoimmune neuroinflammation. Therefore, mice are immunized with CNS homogenates or peptides of myelin proteins. Due to the low immunogenic potential of these peptides, strong adjuvants are used. EAE susceptibility and phenotype depends on the chosen antigen and rodent strain. C57BL/6 mice are the commonly used strain for transgenic mouse construction and respond among others to myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG). The immunogenic epitope MOG35-55 is suspended in complete Freund's adjuvant (CFA) prior to immunization and pertussis toxin is applied on the day of immunization and two days later. Mice develop a "classic" self-limited monophasic EAE with ascending flaccid paralysis within 9-14 days after immunization. Mice are evaluated daily using a clinical scoring system for 25-50 days. Special considerations for care taking of animals with EAE as well as potential applications and limitations of this model are discussed.

Myelin Oligodendrocyte Glycoprotein MOG35-55 Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis EAE in C57BL/6 Mice

Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is an established animal model of multiple sclerosis. C57BL/6 mice are immunized with myelin oligodendrocyte glycoprotein (MOG) peptide 35-55 (MOG35-55), resulting in an ascending flaccid paralysis caused by autoreactive immune cells in the central nervous system. Protocols for disease induction and monitoring will be discussed.

ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（MOG<sub&gt; 35〜55</sub&gt;）C57BL / 6マウスにおける実験的自己免疫性脳脊髄炎（EAE）誘発

Multiple sclerosis is a chronic neuroinflammatory demyelinating disorder of the central nervous system with a strong neurodegenerative component. While ...

Induction of Experimental Autoimmune Encephalomyelitis in Mice and Evaluation of the Disease-dependent Distribution of Immune Cells in Various Tissues

Multiple sclerosis is presumed to be an inflammatory autoimmune disease, which is characterized by lesion formation in the central nervous system (CNS) resulting in cognitive and motor impairment. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) is a useful animal model of MS, because it is also characterized by lesion formation in the CNS, motor impairment and is also driven by autoimmune and inflammatory reactions. One of the EAE models is induced with a peptide derived from the myelin oligodendrocyte protein (MOG)35-55 in mice. The EAE mice develop a progressive disease course. This course is divided into three phases: the preclinical phase (day 0 - 9), the disease onset (day 10 - 11) and the acute phase (day 12 - 14). MS and EAE are induced by autoreactive T cells that infiltrate the CNS. These T cells secrete chemokines and cytokines which lead to the recruitment of further immune cells. Therefore, the immune cell distribution in the spinal cord during the three disease phases was investigated. To highlight the time point of the disease at which the activation/proliferation/accumulation of T cells, B cells and monocytes starts, the immune cell distribution in lymph nodes, spleen and blood was also assessed. Furthermore, the levels of several cytokines (IL-1&#946;, IL-6, IL-23, TNF&#945;, IFN&#947;) in the three disease phases were determined, to gain insight into the inflammatory processes of the disease. In conclusion, the data provide an overview of the functional profile of immune cells during EAE pathology.

This manuscript describes the methods for induction and scoring of the experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) model, together with the assessment of immune cell distribution and mRNA cytokine levels in lymph nodes, spleen, blood and spinal cord using flow cytometry and quantitative PCR, respectively, at various disease phases.

マウスおよび種々の組織における免疫細胞の疾患に依存する分布の評価における実験的自己免疫性脳脊髄炎の誘導

Multiple sclerosis is presumed to be an inflammatory autoimmune disease, which is characterized by lesion formation in the central nervous system (CNS) ...

Determining Immune System Suppression versus CNS Protection for Pharmacological Interventions in Autoimmune Demyelination

A major hallmark of the autoimmune demyelinating disease multiple sclerosis (MS) is immune cell infiltration into the brain and spinal cord resulting in myelin destruction, which not only slows conduction of nerve impulses, but causes axonal injury resulting in motor and cognitive decline. Current treatments for MS focus on attenuating immune cell infiltration into the central nervous system (CNS). These treatments decrease the number of relapses, improving quality of life, but do not completely eliminate relapses so long-term disability is not improved. Therefore, therapeutic agents that protect the CNS are warranted. In both animal models as well as human patients with MS, T cell entry into the CNS is generally considered the initiating inflammatory event. In order to assess if a drug protects the CNS, any potential effects on immune cell infiltration or proliferation in the periphery must be ruled out. This protocol describes how to determine whether CNS protection observed after drug intervention is a consequence of attenuating CNS-infiltrating immune cells or blocking death of CNS cells during inflammatory insults. The ability to examine MS treatments that are protective to the CNS during inflammatory insults is highly critical for the advancement of therapeutic strategies since current treatments reduce, but do not completely eliminate, relapses (i.e., immune cell infiltration), leaving the CNS vulnerable to degeneration.

This protocol describes how to determine whether pharmacological treatments for experimental autoimmune encephalomyelitis show CNS protection as a consequence of suppressing immune cell infiltration or are neuroprotective during the onslaught of immune cell infiltration.

自己免疫性脱髄に薬理学的介入のためのCNS保護に対する免疫系の抑制を決定します

A major hallmark of the autoimmune demyelinating disease multiple sclerosis (MS) is immune cell infiltration into the brain and spinal cord resulting in ...

A Simple Approach to Induce Experimental Autoimmune Neuritis in C57BL/6 Mice for Functional and Neuropathological Assessments

Experimental autoimmune neuritis (EAN) is a well-appreciated experimental model of autoimmune peripheral demyelinating diseases. EAN disease is induced by immunizing mice with neurogenic peptides to direct an inflammatory attack toward components of the peripheral nervous system (PNS). Recent advances have enabled the induction of EAN in the relatively resistant C57BL/6 mouse line using myelin protein zero (P0)106-125 or P0180-199 peptides delivered in adjuvant combined with the injection of pertussis toxin. The ability to induce EAN in the C57BL/6 strain allows for the use of the numerous genetic tools that exist on this mouse background, and thus allows the sophisticated study of disease pathogenesis and interrogation of the mechanistic action of novel therapeutics in combination with transgenic approaches. In this study, we demonstrate a simple approach to successfully induce EAN using the P0180-199 peptide in C57BL/6 mice. We also outline a protocol for the assessment of functional deficits that occur in this model, accompanied by an array of neuropathological features. Thus, this model is a powerful experimental model to study the pathogenesis of human peripheral demyelinating neuropathies, and to determine the efficacy of potential therapies that aim to promote myelin repair and protect against nerve damage in autoimmune neuritis.

This report outlines a simple approach to successfully induce experimental autoimmune neuritis (EAN) using the myelin protein zero (P0)180-199 peptide in combination with Freund&#39;s complete adjuvant and pertussis toxin. We present a sophisticated paradigm capable of accurately assessing the extent of functional deficits and neuropathology that occur in this EAN.

機能と神経病理学的評価の c57bl/6 マウスの実験的自己免疫性視神経炎を誘導するための単純なアプローチ

Experimental autoimmune neuritis (EAN) is a well-appreciated experimental model of autoimmune peripheral demyelinating diseases. EAN disease is induced by ...

神経科学

Induction of Drug-Induced, Autoimmune Hepatitis in BALB/c Mice for the Study of Its Pathogenic Mechanisms

Drug-induced autoimmune hepatitis (DIH) is the most common hepatic drug-induced hypersensitization process observed in approximately 9 to 12% of patients with autoimmune hepatitis. The overwhelming majority of patients with DIH are women. The underlying mechanisms of these sex differences in prevalence are unclear because of the paucity of animal models that mimic human disease. Even so, underlying mechanisms are widely believed to be associated with human leukocyte antigen haplotypes and sex hormones. In contrast, using a DIH mouse model, we have uncovered that IL-4 initiated&#160;CD4+ T cells directed against an epitope of cytochrome P450 2E1 induces influx of neutrophils, macrophages and mast cells into the livers of female BALB/c mice. Using this model, we have also shown that IL-33-induced FoxP3+regulatory T cells confer protection against DIH in female and male mice. This DIH model is induced by immunizing mice with an epitope of CYP2E1 that has been covalently altered with a drug metabolite that has been associated with DIH. This epitope is recognized by patients with DIH. Our method induces robust and reproducible hepatitis and autoantibodies that can be utilized to study the pathogenesis of DIH. While in vivo studies can cause undue pain and distress in mice when done improperly, the advantage of an in vivo model is the ability to evaluate the pathogenesis of disease in a large number of mice. Additionally, biological effects of the altered liver proteins can be studied using invasive procedures. The addition of in vitro studies to the experimental design allows rapid repetition and mechanistic analysis at a cellular level. Thus, we will demonstrate our model protocol and how it can be utilized to study in vivo and in vitro mechanisms of DIH.

We describe an in vivo immunization, translational hepatitis model in BALB/c mice that can be utilized to study the pathogenesis of drug-induced autoimmune hepatitis including sex differences seen in this disease. We will describe how this model demonstrates reproducible analyses using in vivo and in vitro experimental techniques.

BALB/cマウスにおける薬物誘発性自己免疫性肝炎の誘導による発症機序の研究

Drug-induced autoimmune hepatitis (DIH) is the most common hepatic drug-induced hypersensitization process observed in approximately 9 to 12% of patients ...

Murine Distal Colostomy, A Novel Model of Diversion Colitis in C57BL/6 Mice

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a diverting enterostomy. The etiology of this disease remains ill-defined but appears to differ from that of classical inflammatory bowel diseases such as Crohn's disease and ulcerative colitis. Research aimed to decipher the pathophysiological mechanisms leading to the development of this disease has been severely hampered by the lack of an appropriate murine model. This protocol generates a murine model of DC that facilitates the study of the immune system's role and its interaction with the microbiome in the development of DC. In this model using C57BL/6 animals, distal parts of the colon are excluded from the fecal stream by creating a distal colostomy, triggering the development of mild to moderate inflammation in the excluded bowel segments and reproducing the hallmark lesions of human DC with a moderate systemic inflammatory response. In contrast to the rat model, a large number of genetically-modified murine models on the C57BL/6 background are available. The combination of these animals with our model allows the potential roles of individual cytokines, chemokines, or receptors of bioactive molecules (e.g., interleukin (IL)-17; IL-10, chemokine CXCL13, chemokine receptors CXCR5 and CCR7, and the sphingosine-1-phosphate receptor 4) to be assessed in the pathogenesis of DC. The availability of congenic mouse strains on the C57BL/6 background largely facilitates transfer experiments to establish the roles of distinct cell types involved in the etiology of DC. Finally, the model offers the opportunity to assess the influences of local interventions (e.g., modification of the local microbiome or local anti-inflammatory therapy) on mucosal immunity in affected and non-affected bowel segments and the on systemic immune homeostasis.

Murine distal colostomy provides a murine model for human diversion colitis, a predominantly lymphocytic colitis in colon segment excluded from the fecal stream.

マウスの遠位人工肛門、転用 c57bl/6 マウス大腸炎の新たなモデル

Diversion colitis (DC) is a frequent clinical condition occurring in patients with bowel segments excluded from the fecal stream as a result of a ...

Analyses of Proteinuria, Renal Infiltration of Leukocytes, and Renal Deposition of Proteins in Lupus-prone MRL/lpr Mice

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disorder with no known cure and is characterized by persistent inflammation in many organs, including the kidneys. Under such circumstances, the kidney loses its ability to clean waste from the blood and regulate salt and fluid concentrations, eventually leading to renal failure. Women, particularly those of childbearing age, are diagnosed nine times more often than men. Kidney disease is the leading cause of mortality in SLE patients. The present protocol describes a quick and simple method to measure excreted protein levels in collected urine, tracking lupus progression over time. In addition, an approach to isolate kidney mononuclear cells is provided based on size and density selection to investigate renal infiltration of leukocytes. Furthermore, an immunohistochemical method has been developed to characterize protein deposition in the glomeruli and leukocyte infiltration in the tubulointerstitial space. Together, these methods can help investigate the progression of chronic inflammation associated with the kidneys of lupus-prone MRL/lpr mice.

The present protocol describes a method to track lupus progression in mice. Two additional procedures are presented to characterize lupus nephritis based on cell infiltration and protein deposition in the kidneys.

狼瘡を起こしやすいMRL/lprマウスにおけるタンパク質尿、白血球の腎浸潤、およびタンパク質の腎沈着の解析

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disorder with no known cure and is characterized by persistent inflammation in many organs, including ...

マウスにおける実験的自己免疫性脳脊髄炎の誘導と評価

Modeling Multiple Sclerosis in the Two Sexes: MOG35-55-Induced Experimental Autoimmune Encephalomyelitis

Multiple Sclerosis (MS) is a chronic autoimmune inflammatory disease affecting the central nervous system (CNS). It is characterized by different prevalence in the sexes, affecting more women than men, and different outcomes, showing more aggressive forms in men than in women. Furthermore, MS is highly heterogeneous in terms of clinical aspects, radiological, and pathological features. Thus, it is necessary to take advantage of experimental animal models that allow the investigation of as many aspects of the pathology as possible. Experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) represents one of the most used models of MS in mice, modeling different disease features, from the activation of the immune system to CNS damage. Here we describe a protocol for the induction of EAE in both male and female C57BL/6J mice using myelin oligodendrocyte glycoprotein peptide 35-55 (MOG35-55) immunization, which leads to the development of a chronic form of the disease. We also report the evaluation of the daily clinical score and motor performance of these mice for 28 days post immunization (28 dpi). Lastly, we illustrate some basic histological analysis at the CNS level, focusing on the spinal cord as the primary site of disease-induced damage.

著者スポットライト:雄マウスと雌マウスの両方に関連する汎用性の高い実験的自己免疫性脳脊髄炎モデルの作成 

Experimental autoimmune encephalomyelitis is one of the most widely used murine models of multiple sclerosis. In the current protocol, C57BL/6J mice of both sexes are immunized with myelin oligodendrocyte glycoprotein peptide, resulting mainly in ascending paresis of the tail and limbs. Here we discuss the protocol of EAE induction and evaluation.

C57BL / 6マウスにおける全身性エリテマトーデス（SLE）のBM12誘導モデル

要約

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SJLマウスにおける実験的自己免疫性下垂体炎の誘導

CYP2D6の動物モデル：マウスにおける自己免疫性肝炎を誘導する方法

ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（MOG

マウスおよび種々の組織における免疫細胞の疾患に依存する分布の評価における実験的自己免疫性脳脊髄炎の誘導

自己免疫性脱髄に薬理学的介入のためのCNS保護に対する免疫系の抑制を決定します

機能と神経病理学的評価の c57bl/6 マウスの実験的自己免疫性視神経炎を誘導するための単純なアプローチ

BALB/cマウスにおける薬物誘発性自己免疫性肝炎の誘導による発症機序の研究

マウスの遠位人工肛門、転用 c57bl/6 マウス大腸炎の新たなモデル

狼瘡を起こしやすいMRL/lprマウスにおけるタンパク質尿、白血球の腎浸潤、およびタンパク質の腎沈着の解析

両性における多発性硬化症のモデル化:MOG_35-55誘発性実験的自己免疫性脳脊髄炎

C57BL / 6マウスにおける全身性エリテマトーデス（SLE）のBM12誘導モデル

要約

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CYP2D6の動物モデル：マウスにおける自己免疫性肝炎を誘導する方法

ミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（MOG

マウスおよび種々の組織における免疫細胞の疾患に依存する分布の評価における実験的自己免疫性脳脊髄炎の誘導

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機能と神経病理学的評価の c57bl/6 マウスの実験的自己免疫性視神経炎を誘導するための単純なアプローチ

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両性における多発性硬化症のモデル化:MOG35-55誘発性実験的自己免疫性脳脊髄炎

両性における多発性硬化症のモデル化:MOG_35-55誘発性実験的自己免疫性脳脊髄炎