この方法は、神経疾患の自然史の間に神経化学の変化などの神経科学の主要な質問に答えることができます。提案されたマイクロ透析脳科学の主な利点は、このような組み合わせアプローチは、疾患の発症および進行の特定段階内の神経伝達物質放出の変化の組み合わせを可能にすることです。まず、ファラデーケージの外側に配置されたアンプをオンにします。
EEGソフトウェアを開き、EEGの取得を開始し、接続されていないケーブルによって生成されるEEG信号を観察します。次に、片手の2本の伸びた指の間に動物の頭を保持し、もう一方のフリーハンドを使用してコネクタを電極台座にねじ込むことで、動物をつなぎ形のEEG記録システムに接続します。EEG信号がスケールになるように、単一動物の電極信号に従って増幅器の各チャンネルに増幅係数を設定する。
その後、動物は研究者の直接観察の下で少なくとも1時間、新しいケージを探検してみましょう。動物の商品に合わせてケーブルを調整し、ケーブルが動物の動きや姿勢を妨げないようにします。最後に、ビデオカメラで正しい画像のフレーミングを確認し、ビデオEEGの録画を開始します。
メーカーのユーザーズガイドに従って最初の使用のためにマイクロ透析プローブを準備し、リンガーのソリューションでそれらを埋めることから始めます。次に、長さ10センチのFEPチューブをカットし、異なる色のチューブアダプタを使用してプローブの入口と出口のカニューレに接続します。すべての接続で、空きスペースのないアダプターにチューブが接触していることを確認します。
動物の頭をしっかりと保持して、ピンセットを使用してガイドからダミーカニューレを取り外します。マイクロ透析プローブをガイドカニューレに挿入し、モデリング粘土を使用してカニューレをさらに固めます。次に、動物をつなぎ EEG 記録システムに接続します。
その後、プレキシガラスシリンダーに動物を入れて、新しい環境を探索してみましょう。目を覚まし、自由に動くネズミの動きに従ってください。次に、プローブの入口を、チューブアダプターを使用してリンガーの溶液を含む鈍い22ゲージ針で2.5ミリリットルのシリンジに接続します。
2.5ミリリットルのシリンジのピストンを連続的に押し込み、10秒でリンガーの溶液を1ミリリットルプローブに押し込みます。プローブが使用できる状態であることを示すために、コンセントに表示される液体のドロップを確認します。最後に、RINGERのソリューションでアダプターをチューブしてFEPチューブに接続された2.5ミリリットルのシリンジを充填し、輸液ポンプに取り付けます。
毎分2マイクロリットルでポンプを起動し、一晩実行させます。ビデオEEGを介して確認した後、サンプル収集前の3時間で発作の不在を記録し、リンガーの溶液で満たされたFEPチューブカニューレートシリンジを運ぶポンプを停止します。100ミリモルカリウム溶液を含む修飾リンガーの溶液で満たされたチューブアダプターでFEPチューブに接続された2.5ミリリットルのシリンジの別のセットをマウントします。
毎分2マイクロリットルでポンプを起動し、それを実行させてください。システムに気泡が入っていないかどうかを確認し、チューブがすべての接続にデッドスペースのないアダプターに接触していることを確認します。次に、プローブが使用できる状態であることを示すために、出口に現れる液体の落下を確認します。
次に、リンガーの溶液で満たされた注射器のFEPチューブを各動物のプローブの入口カニューレに接続し、出口の先端に液体が滴下するのを待ちます。プローブの出口を試験管内の回収につながるFEPチューブに接続します。FEPチューブを穿ゲートキャップ付きの密閉された0.2ミリリットル試験管に挿入し、モデリング粘土で固定することでチューブが所定の位置にとどまることを確認します。
システムを平衡化するためにサンプルを収集することなく、毎分2マイクロリットル/分でポンプを実行した後、ベースライン条件下で5つの連続した30分の透析サンプルを収集し、氷の上にサンプルを保存します。10分後、100ミリモルカリウムリンジャーの溶液を含む注射器から通常のリンガー溶液にチューブを切り替え、ポンプを動かします。5回目の平衡透析の収集後、10分ごとに20マイクロリットル透析画分を1時間収集します。
次に、30分の透析サンプルを3個収集し、ポンプを停止します。最後に、HPLC分析まで、実験後にマイナス80°Cでサンプルを保存します。実験が完了したら、使用済みマイクロ透析プローブを蒸留水で洗い流し、次の使用まできれいな蒸留水で満たされたバイアルに保管します。
最後に、蒸留水でマイクロ透析のセットアップ全体をリンスし、その後70%エタノールを使用します。エタノールを空気に置き換え、滅菌環境でセットアップを保管します。これらは、疾患の慢性期の間に対照およびてんかんラットの海馬から記録された代表的なEEG痕跡である。
コントロールラットではEEGの変化は認められなかったが、同時に発作性発作性のてんかん活性は、てんかんラットにおける行動発作の前後に約500ミリ秒観察された。慢性てんかんラットに見られる基底グルタミン酸濃度は、対照動物よりも有意に高かった。高カリウムは、対照ラットで約30分間、慢性てんかんラットで約60分間グルタミン酸の追加放出を誘発した。
この手順を試みる間、装置を移植した動物は長時間の実験で失われやすいので、動物の移動性を妨げないように、ライトヘッドセットと十分に長いケーブルを使用することを覚えておくことが重要です。適切な分析エッセイの入手可能性に応じて、脳脳記録を同時に使用する場合、脳内の異なる可溶性分子をテストするためにさらにこの方法を使用することができる。その開発後、この技術は、てんかん学の分野の研究者が側頭葉てんかんの場合の興奮性神経伝達の変化に関する洞察を提供することを可能にした。
このビデオを見た後、私たちはあなたが自由に動くてんかんラットで深度電極EEG記録と一緒に生体内マイクロジアルシスを行う方法のより良い理解を持っていると信じて。
