この方法は、腫瘍学、神経生物学、心臓病学、胎児の発達の分野で重要な質問に答えるために非常に重要であり、もちろん生殖研究の分野でも重要です。この技術の主な利点は、非侵襲的、痛みのない、簡単、速く、妊娠を通じて関連する妊娠時の時点で胎児のフォローアップを可能にすることです。画像処理の少なくとも30分前に、超音波システム、加熱されたプラットフォーム、およびゲルウォーマーをオンにします。
ブラウザで既存のスタディで新しいスタディまたは新しいシリーズを開きます。[学習情報]ウィンドウに必要な情報をすべて入力します。[OK]をクリックし、Bモードイメージングウィンドウが表示されることを確認します。
超音波の準備ができたら、麻酔マウスのつまみつまみへの応答の欠如を確認し、動物の目に軟膏を適用します。加熱されたプラットフォームの4つの銅セクションのそれぞれにエレクトロジェルを1滴置き、プラットホームのエレクトロゲルコーティングされたセクションに足を固定します。脱毛クリームと綿棒で動物の腹部から髪を取り除き、水浸しの圧縮で1分後に脱毛した皮膚からクリームを洗います。
その後、露出した領域に予温超音波ゲルを適用します。低い信号強度の理由の1つは、マウスと超音波ビームの間に配置されたゲルの量が少ないことである。我々の経験では、良好な信号品質のためにかなり大量のゲルが必要です。
動物の準備ができたら、トランスデューサを膀胱の上に置いて基準点として使用し、加熱プラットフォームテーブルを腹部の左右の側面に移動して胎児移植を2D Bモードで追跡し、最初の移植が画面に見えるまで必要に応じてトランスデューサまたはプラットフォームを調整し、最大のサイズで画面に表示されます。[イメージ ラベル]を選択し、イメージ ファイルの名前を入力します。胎盤の臍帯内の血流が見えるまで画像の位置を調整し、胎盤測定のために単一のフレームまたはシネループを保存する。
カラードップラーイメージングで血流の方向を決定するには、[カラー]ボタンを押し、トラックボールを使用してカラーボックスを適切な位置に移動し、[更新]をクリックして必要に応じてボックスのサイズを調整します。ボックスが正しいサイズになったら、[選択] をクリックし、実験上適切なイメージとして保存します。血管を通る血流のパルス波ドップラー定量化の場合は、色ドップラー獲得モードで関心領域を見つけ、パルス波をクリックします。
破線が表示されます。目的の血管にラインを移動し、血流に合わせてラインの角度を調整するためにドップラー角度ノブを使用します。パルス波ドップラー測定では、血流の方向と超音波ビームの間の角度を見ることが重要です。
角度が高すぎるか、同じ実験で動物間の角度が異なると、速度の測定が不正確になる可能性があります。次に、更新をクリックし、パルス波ドップラー獲得ウィンドウに表示されるドップラーラインのシネループを保存します。データを確認するには、[スタディ管理] をクリックし、目的のサムネイル画像までスクロールし、[更新] をダブルクリックしてもう一度 [スタディ管理] をクリックし、[閉じる] をクリックしてブラウザ ウィンドウを閉じ、データ取得を完了し、記録されたデータを保存します。
データをエクスポートするには、ハード ディスクを接続し、[エクスポート先] をクリックして 1 つ以上のデータをマークし、データをハード ディスクにコピーするための記憶域を選択します。ここでは、妊娠5、8、10、12でBモードで取得した代表的な超音波画像と、それに対応する移植面積測定結果が示され、妊娠10日目以降の肥満細胞欠損マウスの移植面積の有意な減少を明らかにした。Bモードイメージングは、移植の個々の部分のイメージングと測定を容易にします。
例えば、抗CD122処置マスト細胞欠損動物は、妊娠10日および12日目の未治療マウスと比較して、胎盤面積、厚さおよび直径の有意な減少を示す。これに対し、胎盤面積と直径は、妊娠14日目の群と、胎盤厚さと、妊娠14日目の未治療マウスと比較して抗CD122処理トランスジェニック動物の有意な増加である。ピーク収縮速度と拡張期速度の測定のための動脈子宮のパルス波ドップラー画像化、および計算された抵抗指数は、処理された動物と未処理の動物との間の類似値を明らかにする。
しかし、抗CD122処置マスト細胞欠損動物における動脈性臍帯の抵抗指数は、未治療マウスと比較して有意に増加する。この手順を試みる間、ストレスを避けるために、毎日ではなく、一日おきにこれを行う必要があり、動物の繰り返しのナルコタイゼーションのリスクを覚えておいてください。この手順に従って、他の測定、例えば、3D測定、時間経過による組織の動きの視覚化および定量化、血圧測定、および超音波誘導注射も行うことができる。
開発後、この方法は、胎児の発達をフォローアップし、妊娠中に起こりうる異常を認識することが可能であるため、産科および出生前ケアの分野の医師や研究者のための道を開いた。
