幹細胞療法は、多くの疾患に対する有望な治療法として広く報告されている。そして、細胞シート技術は、細胞の保持とターゲット内の生存率を向上させるために開発されています。細胞シートの構築中、不十分な栄養供給は、幹細胞の機能の喪失のための重要な問題であり、不十分な幹細胞の特性は、最終的に生体内の治療効果に影響を与えるだろう。
利用可能な多層幹細胞シート製品を準備することを目的として、当社のチームは、細胞化された極大、心膜および細胞シート足場を開発しました。足場に基づいて、多層細胞スターターは、すぐに非ペプチド水素で構築され、動力学灌流システムは、インビトロで幹細胞の栄養供給を確保するために使用されます。乾燥したDBP足場を取り出し、黒いベースの中央に置きます。
DBP足場に白い張力リングを置き、ティッシュキャリアに貼り付けます。DBP足場が組織キャリアに完全に固定されていることを確認してください。DBP足場に100マイクロリットルの培養培地を加えます。
スキャフォールドを摂氏37度のインキュベーターに入れ、15分間浸します。培養器から細胞を取り出し、培養皿から培養液を取り出し、2ミリリットルの温かいPBSで細胞を軽く洗う。培養皿からすべてのPBSを取り出し、液体が残らないようにします。
皿に1.25%トリプシン溶液に2ミリリットルを加え、3分間細胞をインキュベートします。2ミリリットルの培養培地を添加してトリプシン効果を停止する。皿から細胞をそっと洗います。
新しい15ミリリットルの遠心チューブに細胞懸濁液を移す。重力220倍の重力で細胞を5分間遠心し、細胞沈積物を得る。上清を取り出し、細胞堆積物を拭き取ります。
3ミリリットル10%スクロース溶液で細胞を再中断します。10マイクロリットルの細胞懸濁液を吸引し、コンテンツ細胞数はヘモサイトメーターを読み取り、300万個の細胞を抽出し、新しい1.5ミリリットル遠心管で移送します。5分間、220平方根の細胞を遠心分離し、上清を完全に除去し、細胞沈降物を得る。
20マイクロリットル10%スクロース溶液を調製します。細胞を穏やかに再中断し、均一な懸濁液を得る。懸濁液の上部に20マイクロリットルのペプチドハイドロゲルを加え、Tと懸濁液を細胞に加え、DBP足場を取り出し、組織キャリアを離れ、混合物をT.吸引して微積分中央値を穏やかに吸引し、DBP足場に均等に加えます。
組織キャリアの底に1ミリリットルのカルシウムメデテートを加えます。培養皿に4ミリリットルの文化培地をそっと加え、細胞シートを現れます。培養器に細胞を2時間入れて培養する。
動的灌流系には、ガス交換用の灌流培養容器とガラス瓶が含まれる。図に示すように、組立体は動的灌流システムである。ガラス瓶に2つの水力ミリリットル培養中央値を加えます。
培養容器のチャンバーに細胞シートを挿入し、容器内に3ミリリットル培養中央値を加え、培養器に動的灌流システムを入れて、ポンプを開始する。バイポジティブリカンベントで培養コンテナを開きます。培養容器から細胞シートを取り出し、培養皿に入れます。
1つの鉗子を使用して組織キャリアを固定し、別の2つの鉗子を使用して白い張力リングを黒いベースから分離します。最後に、多層セルシートを取得する。DBP足場は透明である。
SEMの再販は、大学がキャプチャされ、コンポーネントが完全に予約されていることを示しています。細胞シートは、短い保存のために鉗子によって得られ、保持することができる。これらの細胞シートは、1.5ミリリットルの円筒形チューブに移すことができる。
例えば、幹細胞マーカーCD9OおよびCD29に対するBMFCの高陽性の細胞示しから始まるモデルとして。セル構築後、BMFCはセルシートを離れ、CD 90とCD29の高い膨張レベルを維持する。多層セル構造の構築は、プロトコルの重要なステップです。
このパン時間は、PH値がSAから中性に変化する場合に4つのヒドロゲルを必要とし、したがって、表面イオンを除去するためにスクロース溶液で細胞を洗浄することが重要である。また、細胞懸濁液とパンチヒドロゲルの体積比は、一時的な多層構造を構築するための良好な味方ではない。3D幹細胞構造の形成後、多層構造を安定させるとともに幹細胞の生存能力を維持するためには、動的灌流システムが重要であることがわかります。
培養中中央値の動的浸潤は、幹細胞が多層構造内で細胞のコンテキストを増殖し、外挿することを容易にし、また、動的培養温度計は、異なる幹細胞タイプに応じて調整されるべきである。
