このプロトコルは、単一の繊維ストリップから任意の好ましい医療用途に使用できる様々なストリップに材料を開発するために、ウェットスピニングの基本的な概念を改善します。この技術は、単純で安価であり、天然ポリマーを目的とする材料用のタンパク質のリソースにカスタマイズするための合成ポリマーの添加を必要としない。この技術は、中枢または末梢神経系治療、血管置換、または直接尿路再建などの冷間療法を殺すために生体物質の開発に拡張することができる。
この方法は、組織神経化や再生医療のための戦略として含む医療用途のために意図されています.このテクニックは初心者でも簡単に実装できます。いくつかの成形の繰り返しの後、最適な形成を維持するために溶液の品質を常にチェックする必要があることに注意してください。
湿った紡糸管を形成するために、最初に24ゲージを3/4インチの末梢静脈カテーテルで3秒間調製したゼラチン溶液に沈め、次いで1分間、作製したアセトン溶液に浸漬する。これらの手順を 20 回繰り返します。最後のアセトン浸漬後、成形チューブを室温で5分間乾燥させ、ヘモスタットを使用してカテーテルからガラスパスツールピペットにゼラチンチューブを慎重に移し、2.5%ポリカプロラクトンジクロロメタン溶液を使用して室温で一晩アンダーフードインキュベーションします。
翌朝、75%エタノールでチューブを短時間水没させる前に、ゼラチンを紫外線下で2時間殺菌する。次いで、残存エタノールを除去するために幹細胞培地でチューブを2回洗浄する。ゼラチンチューブを細胞培養で培養するには、培養フラスコのヒト脂肪幹細胞の末端を0.25%トリプシン-EDTAの1ミリリットルに置き換え、摂氏37度と炭酸ガスを5%で3.5分間培養します。
細胞が剥離したら、牛胎児血清1ミリリットルで反応を停止し、細胞懸濁液をマイクロ遠心チューブに移す。遠心分離によって細胞を収集し、幹細胞培地の1ミリリットルでペレットを再懸濁します。その後、ゼラチンチューブを幹細胞培地の3ミリリットルを含む6ウェルプレートの1つのウェルに入れる。
細胞を数えた後、種子は、細胞培養インキュベーター中で2週間の培養のためにヒト脂肪幹細胞の4倍の10〜4番目のチューブに。生後8週間の雌のスプレイグ・ドーリーラットのつまみつまみへの応答の欠如によって適切なレベルの沈着を確認した後、トラペジウス領域から髪を剃り、露出した皮膚をポビドネヨウ素溶液で殺菌する。手術部位の細菌汚染を減らすために無菌外科用ドレープでラットを覆い、手術用はさみを使用して浅い2センチメートルの長い皮膚切開を行います。
ゼラチンチューブを筋膜と筋肉の間の層に直接入れ、ナイロン縫合糸を使用して創傷を閉じます。次いで、ポビドンヨウ素溶液で切開を殺菌する。ケトプロフェンとセファゾリンの筋肉内注射を介してラットを誘導し、7日間無菌状態で動物を維持する。
このユーザーフレンドリーな湿式紡糸の概念は繊維および管にゼラチンを開発するために使用することができる。走査型電子顕微鏡によるゼラチン管の形態学的観察は、内径200マイクロメートル以上、厚さが約20マイクロメートルのあまり滑らかな表面を明らかにしている。神経細胞マーカー発現用のヒト脂肪幹細胞培養ゼラチンチューブの染色は、細胞がゼラチンチューブに浸透して付着し、神経前駆細胞に分化できることを示唆する複数の検出された核と共にマーカーに対する陽性染色を示している。
ゼラチンチューブを筋膜層に移植すると、その安全性と生体適合性が確認され、発赤、腫脹、または他の炎症症状の徴候が局所組織内で観察されず、チューブは十分に発達した結合組織に囲まれている。この2点1の手順を試みる一方で、各溶液の特定のコーティング時間における金型の浸漬を確保することは、正確なチューブ形態を構築するために非常に重要である。この手順に従って、ヒト疾患の動物モデルを用いた実験を行い、組織再生戦略のための生体材料の結果を正確に調査することができる。
その開発後、この技術は、研究者が単純な相関性の性質ポリマーを決定された医療応用のためのあらゆる種類の材料に開発する道を開いた。通常の使用条件下で, ポリカプロラクタンジクロロメタン溶液は、最小限の環境の危険を提示すると考えられる, しかし、適切なバイオセーフティキャビネットでこの化学物質と任意のステップを実行することを忘れないでください.
