心筋侵害のこのマウスモデルは、冠状動脈閉塞から局所心臓組織および全身レベルにおける後期心不全に至る病的プロセスのモニタリングを可能にする。この方法は、現在心臓生物学および生理学で使用されている任意の読み出しと互換性があります。さらに、それはネズミの遺伝モデルの巨大な多様性から恩恵を受けます。
適切な外科スキルの習得は、習得に時間を要することができます。この手順は、経験豊富な研究者と一緒にステップバイステップで学習するのが最善です。このマウスモデルの視覚的なデモンストレーションは、外科的処置を助け、学習プロセスをスピードアップすることができるヒントの共有を可能にする。
電気カミソリを使用して、麻酔を受けた25〜30グラム、男性、C57-Black/6マウスを喉と肋骨ケージの左側に素早く剃ります。つま先ピンチへの応答の欠如を確認します。動物の目に軟膏を塗ります。
マウスを熱パッドの上の位置に置き、目が過熱しないように頭の下に小さいガーゼの圧縮を置きます。粘着テープで手足を固定します。上部切歯の下に5-0シルク縫合糸のループを渡し、ループの四肢を加熱パッドに固定して、カンヌレーション中に口を開いたままにします。
剃り前の部分に脱毛クリームを塗り、綿棒で1分間軽くマッサージします。ガーゼで余分な毛皮とクリームを取り除き、0.9%生理食液とガーゼの滴で露出した皮膚をきれいにします。かきのどと胸郭に滅菌ガーゼを塗り、ヨドポビドネでガーゼを浸します。
換気装置は1キログラムあたり7ミリリットルの潮量と1分あたり140ストロークの換気速度に設定します。マイクロサージャストステレオ顕微鏡の下でマウスを動かします。喉の中央に皮膚を保持し、尾口/頭蓋線に沿って0.5センチメートルの切開を行い、唾液腺のローブを分離します。
曲がった鉗子を使用して、喉頭と気管が見えるまで、ステルノイド筋の筋膜を優しく分離します。次に、弾性バンドに取り付けられたレトラクタで開口部の端を固定します。次に、舌を横にそっと引っ張り、鉗子を使用して16ゲージのカニューレの鈍い内針を気管に挿入します。
喉の切開を通して気管に正しく挿入を視覚化し、カニューレを人工呼吸器に接続します。手術中に組織を濡らし続けるために、ヨドポビドン浸しガーゼを切開に補充した無菌0.9%の生理白水を切開に置きます。その後、排気チューブを水に入れます。
バブルが存在すると、挿管が成功したことを示します。左前方の下降冠動脈(LAD)の結紮のために、マウスを慎重に右側の褥瘡の位置に移動させ、新しい位置で左前肢を再固定する。左胸部小筋と主要筋の間の線を特定し、線に沿って斜めの1センチメートルの皮膚切開を行う。
鈍い解剖マイクロハサミを使用して、組織を切開することなく胸筋筋の筋膜を分離し、分離を維持するために弾性バンドに取り付けられたリトラクタを使用する。3センチの水の正の終気圧で人工呼吸器を設定します。鈍い鉗子を使用して、第3肋骨と第4肋骨の間の第3肋間空間で胸腔を開きます。
リブケージに2つのレトラクターを入れ、各肋骨に1つずつ、湾曲した細かい鉗子を使用して心臓と肺に害を与えることなく心膜を慎重に取り除きます。LAD を左耳の端から頂点に向かって走る表面的な明るい赤い線として見つけます。針ホルダーを使用して、左のアトリアの下に2〜3ミリメートルのLADの下に7-0シルク縫合糸を渡します。
心臓組織を引き裂かないようにシルクをゆっくりと引っ張り、合字を3つの結び目で結びます。左心室の左下の部分は、結紮時に即座に青白くなります。リブリトラクタを解放し、3番目のリブを鉗子で保持し、3番目と4番目の肋骨の下に6-0シルク縫合糸で2つのパスを作ります。
37°C 0.9%生理液を開口部に3滴置き、2~3回の呼吸サイクルで切れ口の排気管を閉じて肺を適切に膨らまします。2回のスローで縫合糸を締めて固定し、筋肉を保持するリトラクターを解放し、筋肉が正しい解剖学的位置に戻るのを助けます。その後、2針の縫い目と5-0縫合シルクの2つのスローで胸部の皮膚を閉じます。
5-0縫合シルクの1ステッチと2回のスローで喉の皮膚を閉じます。手順の最後に、四肢からテープバンドを取り外し、慎重に動物を腹側デキュビタスを圧縮パッドに回し、動物の右側の加熱パッドに圧縮を置きます。腹腔内注入 0.3 ミリリットル 37°C-摂氏 5%グルコース溶液を温めた.
人工呼吸器を停止します。マウスが自発的に呼吸する場合は、カニューレを慎重に取り除く。皮下注射 0.1 ブプレノルフィン 1 キログラムあたりミリグラム.
モニタリングで100%酸素を換気した30°Cケージにマウスを置きます。手術後の2日間、マウスに柔らかい食事と水のアドリビタムを与え、必要に応じて動物を温める。手術の7日後、虚血領域は塩化トリフェニルテトラゾリウムによって染色されず、生きた組織はデヒドロゲナーゼの存在により赤色に染色される。
虚血領域は、次いで、イメージングソフトウェアプログラムにおける左心室の白色領域の割合として計算することができる。α平滑筋アクチンおよびSMAD2リン酸化に対するウェスタンブロット分析は、それぞれ筋線維芽細胞の主要な読み出しであり、成長因子βシグナル伝達活性化の変換に、梗塞した心臓の心筋組織内の線維化の程度を決定するために使用することができる。成長因子βおよびその下流の増殖因子のリアルタイムポリメラーゼ連鎖反応解析及びその下流標的mRNA発現はまた、心筋線維症の存在を評価するために行うことができる。
炎症促進シグナル伝達経路および炎症促進遺伝子の発現は、典型的には心筋梗塞後の最初の1週間以内に活性化することが分かっている。炎症促進遺伝子および単球/マクロファージマーカーのmRNA発現も観察される。結紮高さは生存に重大な影響を及ぼし、LAD分岐が変化する可能性があるため、各株または遺伝子型に適応すべきである。
結紮における定数は、再現性のある結果を得るための鍵です。この手順は、任意の分析方法と結合され、機能解析、組織固定、細胞培養、または任意の目的の技術に続くことができる。
