この研究では、マイクロマニピュレーションによる左前下行冠動脈の精密結紮により、Miro で心筋機能モデルを作成するカスタマイズ可能な方法について説明します。このプロトコルは、処置期間を短縮し、制御可能な梗塞サイズを確保し、マウスの生存率を向上させます。外科的処置中、摂氏37度に事前に温められた加熱パッドを備えた長方形のOTを使用してください。
手順の前に、紫外線と70%アルコールでボードを消毒します。まず、目が過熱しないように、頭の下にガーゼを敷いて仰臥位でOTにマウスを置きます。眼科用軟膏を目に塗って、乾燥を防ぎます。
胸部に毛皮除去クリームを使用し、滅菌綿棒で1分間均一にマッサージします。余分な毛をガーゼで拭きます。ポビドンヨウ素とそれに続く70%アルコールを使用してその領域をきれいにし、胸部をガーゼで覆います。
上切歯の下に4-O縫合糸を使用し、アンカーポイントに固定して、口をわずかに開いたままにし、カニューレ挿入を容易にします。テールを引っ張って体をまっすぐに保ち、テープを使用してOTに固定します。4本の手足をテープで固定し、アンカーポイントで締めます。
呼吸障害を避けるために、前肢を伸ばしすぎないでください。鉗子を使用して顎を開き、舌を持ち上げます。次に、イルミネーターを使用して喉と声門を視覚化します。
鈍い切り下げ針が付いた22ゲージのカニューレを口から喉の約1センチ下の気管にそっと挿入します。片手で舌を持ち、鈍い鉗子で少し上に動かします。同時にもう一方の手を使って、チューブを気管にそっと挿入します。
チューブを食道に挿入しないように注意してください。針を慎重に取り外します。人工呼吸器に接続する前に、チューブを水中に入れて気泡が形成されるかどうかで挿管を確認してください。
気管内チューブを毎分120に設定し、一回換気量を250マイクロリットルに調整した人工呼吸器に接続します。両側対称の胸部拡張をチェックして、挿管を確認します。次に、OTへの接続をテープで固定して、脱落を防ぎます。
前足に心電図電極を置き、心電図レコーダーに接続します。手順全体を通して心臓電気生理学を監視します。胸部のガーゼを取り除きます。
70%アルコールで3回のスクラブサイクルを使用して切開部を消毒します。手術部位の汚染を減らすために、手術野に穴を開けた滅菌手術用ドレープでマウスを覆います。メスで斜めの皮膚を切開した後、皮下組織の鈍い解剖を行って肋骨を露出させます。
血管、肋骨、肺を傷つけないように注意してください。滅菌綿アプリケーターを使用して出血を止めます。3番目の肋間腔を特定し、約6〜8ミリメートルの切開を行います。
次に、肋間腔の組織の鈍い解剖を行うことにより、胸腔を開きます。胸部内動脈を傷つけないように注意してください。鉗子を使用して肋間腔を広げます。
滅菌済みの自家製リトラクターを胸郭に挿入し、引き戻して切開部を幅約6ミリメートルに広げます。リトラクターを輪ゴムでOTに取り付けます。周囲の組織を慎重に取り除き、心臓を完全に露出させます。
心臓を傷つけることなく、湾曲した鉗子で心膜を静かに引き抜きます。解剖顕微鏡を使用し、LADの可視化に焦点を絞った適切な光を当てます。選択した結紮位置の下の部位を軽く押してLADを一時的に拡大し、LADを再確認します。
解剖顕微鏡の下で、先細りの針を使用して8-0を通過させますLADの下の絹の合字。針が左心室に入るのに十分な深さではなく、LADの損傷を避けるために浅すぎないことを確認してください。結紮糸をゆるい二重の結び目で結びます。
2〜3ミリメートルのPE-10チューブを動脈に平行なループに入れます。結紮ループが動脈とチューブの周りに来るまで、ゆっくりと締めます。次に、ループをスリップノットで固定します。
過度の締め付け圧力で心筋壁を傷つけないように注意してください。結紮後の左心室前壁の蒼白な着色は、LADの血流の停止を確認します。永久結紮が必要な場合は、テキスト原稿に記載されているとおりに進めてください。
切開部からリトラクターを取り外します。次に、ブルドッグクランプで傷口を一時的に閉じます。マウスが人工呼吸器に接続され続けていることを確認します。
虚血の期間が終わったら、ブルドッグクランプを取り外し、リトラクターを挿入して切開を開き、心臓と結紮部位を露出させます。スリップノットをほどき、PE-10チューブを取り外します。淡い色からピンクレッドへの変化は、血流の回復を確認します。
同時に、再灌流を検出するには、ECGを観察してST上昇の溶解の可能性を確認します。8-0のままその後のエバンスブルーおよびTTC染色を行う場合は、その場で結紮します。それ以外の場合は、このステップで縫合糸を取り除きます。
リトラクターを取り外し、3番目と4番目の肋骨を4-Oシルク縫合糸で縫合して切開部を閉じます。肺を傷つけないように注意してください。縫合糸の結び目を作りながら胸をそっと押して、胸腔に閉じ込められている可能性のある空気を押し出します。
連続した4-Oシルク縫合糸で筋肉層を閉じます。実験プロセスの標準画像は、気管内挿管、皮膚切開、開胸術、LADの同定、結紮から再灌流まで取得されました。代表的な心電図画像は、結紮後に有意なST上昇を伴う心筋虚血および再灌流を検証した。
そして、スリップノットを解いた後のSTエレベーションの溶解。開胸術の前に、気道を開いたままにしておくことが非常に重要であり、最も重要なことは、LADがしっかりと結紮され、損傷を受けないようにすることです。この手順の後には、心機能を評価するための心エコー検査と、心筋損傷を評価するためのTTCが続きます。
