マウス生殖管自発的運動性を評価するためのEx Vivo法とデータ解析のためのMATLABベースの子宮運動追跡アルゴリズム

我々のプロトコルは、無傷の子宮の自発的運動性を評価するための最初の定量的ex vivo方法を提供するため、重要である。この新しいアプローチは、合成化合物で天然の治療薬の弛緩電をテストするための簡単で安価な代替手段を提供します。この技術の主な利点は、すべての子宮内細胞相互作用が実験を通してそのまま残っているということです.

子宮の収縮性の過多は、子宮弛緩剤が治療に有用であり得る月経困難症に関連している。この方法は、新しいリラックス剤を簡単にテストする方法を提供します。エストルースサイクルステージを確認した後、マウスをスペイン位置に置き、四肢を広げて腹部骨盤領域を露出させる。

腹部を70%エタノールで濡らし、鉗子を使用してクリトリスよりも優れた皮膚を慎重に持ち上げます。腹膜を露出させるために下腹部の側面に小さな横切開を行います.子宮の角を傷つけることなく、胃腸管を露出するために腹膜を慎重に切断し、胃腸管を覆う筋膜および脂肪組織を除去するために鉗子を使用する。

十二指腸、半腸、腸、盲腸、および上昇と横コロンを削除します。膀胱の真下に見られる腟を見つけるために尿膀胱を見つける。陰部の交骨を膀胱に合流させ、膀胱に尾を向き、はさみを使用して、陰部線維カルテリガン組織を通して陰部交腫の側面を慎重に切開してアクセスを得て膣抽出のルートを提供する。

外陰部と内耳の間に位置する会陰を切り取り、鉗子を使って膣を持ち上げて直腸の切除を遅らせる。膣にロストリーフォークに分岐する2つの子宮の角を識別し、各角の端に畳み込まれた卵管と卵巣を見つける。子宮の角を正しく識別することは、組織が損傷していないことを確認する手順に不可欠です。

小さな解剖はさみを使用して、腹腔内の角、卵管および卵巣に接続して支える靭帯を取り除き、膣、子宮、卵管および卵巣を取り除く。単離した生殖管全体を、10ミリリットルのダルベッコPBSを含む100ミリメートルのペトリ皿に移します。鉗子と外科用はさみを使用して、子宮の角と膣を取り巻く結合組織や脂肪組織、および画質を妨げる可能性のある陰部の毛皮を取り除きます。

広い靭帯を取り除いて子宮角の運動性を可能にし、分離された生殖管を3ミリリットルの酸素化クレブス溶液を含む35ミリメートルのペトリ皿に移す前に、新鮮なダルベッコのPBSで洗浄ごとに2回組織を洗浄します。自発的運動性イメージングの場合は、ペトリ皿を室温の黒い表面に置き、自発的な収縮が始まるのに15〜30分かかります。動きが観察できる場合は、あらゆるタイプのデジタルビデオ機器を使用して、軸面から10分間自発的な子宮運動を記録します。

次に、試験化合物を加えた酸素化されたクレブスバッファーを含むペトリ皿に製剤を移し、同じ方法でさらに10分間自発的な子宮運動を記録する。記録期間の終わりに、100ミリメートルペトリ皿でダルベッコのPBSの10ミリリットルで生殖管全体を洗浄し、治療の可逆性を評価するために、新たに酸素化されたクレブスバッファーの新しいペトリ皿にサンプルを転送します。最後の2つの録音と同じように、約10分間自発的な子宮運動を記録します。

その後、試験化合物の車両に補われた酸素化されたクレブスバッファーで満たされた別の35ミリメートルのペトリ皿に準備を移し、自発的な子宮運動に機械的に誘発された変化がないことを確認する。生殖管調製物は、エピネフリンの不在時にパネルAおよびCに高い運動性を示した。しかし、この表現型は、1つのマイクロミュラーエピネフリンの存在を持つパネルBで休眠状態にある。

ここで、エピネフリン投与および自発的運動性回復のサンプルデータ分析が示され、化合物処理前、試験中、および試験後に採取した組織の記録から、生殖管自発的運動性に対するホルモンの影響を定量化する方法を示す。それ以外の場合、自発的な収縮性は観察されませんが、子宮角を圧縮または過剰に伸ばすことを避けるために重要です。我々の方法はまた、子宮の収縮性を増加させる可能性のある化合物を試験するために使用することができる。

この手順は、妊娠の初期段階で妊娠中のマウス子宮に適用することができます.この実験は、スループット薬物スクリーニングのための6つのウェルプレート形式にアップグレードされる可能性を秘めています。