1型糖尿病のラット創傷モデルを構築するためのプロトコル

1型糖尿病創傷モデリングプロセスの多くの詳細は、エラーが発生しやすい。経験豊富な研究者にとっては難しい挑戦です。その結果、このプロトコルを利用する必要があります。

可能な限り簡単な方法で、この技術は、創傷治癒なし、再上皮化の遅延、血管新生の減少など、慢性糖尿病創傷のいくつかの特徴を効果的に再現することができます。ストレプトゾトシン溶液は調製直後に使用する必要があります。傷を作るときは、傷のサイズと位置を調整する必要があることを確認してください。

ストレプトゾトシン粉末を1リットルのクエン酸ナトリウム緩衝液あたり0.1モルの適量に溶解して1%の濃度を達成することから始め、薬物発振器を使用して30秒間振ってから、素敵な箱に入れます。1%ストレプトゾトシン溶液の腹腔内注射の場合、ラットをつかみ、注射部位の腹部皮膚を露出させます。.75%アルコールに浸した綿球を使用して注射部位を2回消毒し、ラットの頭を腹部の下に置きます。

針を腹部正中線と平行に45度で挿入します。次に、針の角度を30度に下げ、2〜3ミリメートル挿入します。綿棒を当てる前に、針栓をそっと引き、ストレプトゾトシン溶液を注入し、針を引き抜きます。

3日目と7日目の午前9:00に原因血糖値を測定するには、尾静脈の位置を見つけます。尾静脈に穴を開ける前に、75%アルコールを使用してラットの尾を2回消毒して出血を誘発し、グルコメーターを使用して血糖値を測定します。完了したら、綿棒で出血を止めます。

創傷モデリングの1日前に、ラットの背側の5 x 5センチメートルの領域を電気かみそりで剃ります。剃った部分を温かい生理食塩水コットンボールで拭き、乾かして脱毛クリームを5分間塗ります。ガーゼでその領域をきれいにし、残っている脱毛クリームを温かい生理食塩水で洗います。

次に、ヨウ素に浸した綿球と代替ラウンドで75%アルコールを使用して背側皮膚を2回消毒します。乾燥後、直径20ミリメートルの円形生検パンチで皮膚を切断します。鉗子で皮膚を手入れし、外科用ハサミを使用して、パンチカットマークに沿って皮膚の厚さ全体を取り除きます。

完了したら、通常の生理食塩水コットンボールで出血を止めます。ワセリンガーゼを使用して傷を覆います。糖尿病は、ストレプトゾトシン注射の3日後にすべてのラットで誘発され、血糖値は1リットルあたり16.7ミリモルを超えました。.

グルコースレベルは誘導後5週間で安定した。糖尿病群の体重はストレプトゾトシン注射後に徐々に増加した。体重は3週目に減少し、4週目から再びゆっくりと増加しました。

対照的に、正常群ラットの体重は着実に増加した。糖尿病誘発の3日後の彼らの平均体重は糖尿病群よりも高かった。創傷後7日目と14日目に行われた肉眼的分析により、再上皮化は糖尿病群よりも正常群のラットでより顕著であることが明らかになりました。

7日目と14日目の定量結果は、創傷治癒率が正常群よりも糖尿病群で有意に低いことを明らかにした。しかし、14日目には、創傷治癒率は糖尿病群で90%を超えていました。糖尿病性創傷は、毛包と皮脂腺の部分的な喪失を示し、目に見える毛細血管は少なかった。

CD31免疫染色によって分析された創傷血管新生において、CD31発現の平均光学密度は、創傷部位における血管新生が糖尿病群よりも正常群において有意に高いことを示した。創傷をモデル化するときは、表皮、真皮、皮下組織を含む前部の厚さの皮膚が除去されていることを確認してください。