本研究では、NIHの助成金1RO1DK74566と1RO1AM52984によって部分的にサポートされていました。著者は、博士、手術中に彼女の助けのためにRRCで氏ジャクリーン·マッカーティに感謝します。いくつかのウサギ、彼女の組織の仕事のための博士栄WAN、および高エネルギーリン酸塩の彼女のHPLC測定のための氏明Liの手術と術後ケアの彼らの助けのためにJianpu王とHarshini Sarojini。

1。解剖学的根拠ウサギの耳は20 世紀初頭以来、創傷ケアのために有利な研究の材料であった。耳は3維管束（中央、頭蓋、および尾）によって供給され、頭蓋と仙骨のバンドル内の血管のサイズが異なるしながら中央のバンドルは、最大です。時折、尾動脈は存在しないかもしれません。これらの血管の1すべては耳が（ 図1）剃りされた後、簡単に背側に識別されます。腹側では、遠位の皮膚は、近位の血管から血液の供給を受けることはありません。背耳上の3つの容器のバンドルは、遠位腹部皮膚（ 図2）への血液供給を提供するために、軟骨を貫通する多数の枝を持っています。いくつかのウサギでは、非常に小さな皮下血管にもこれ以上腹の皮膚の1/3以下に血液を供給する腹側で発生します。オープン円周皮膚切開では、エッセンがあります腹切開からtially出血はありません。 2。外科的処置<ol><li>ウサギを秤量し、耳は首の後ろと一緒に、剃られています。 </li><li>ブプレノルフィン（0.01 mg / kg）の前投薬は、手術前にIM一時間が与えられています。 </li><li>麻酔は、ケタミン（50 mg / kg）及びキシラジン（5 mg / kg）をIMの混合物によって誘導される。 </li><li>ウサギは、手術時の加熱パッドで保護されている、目が軟膏で保護され、そのバイタルサインは手術中に監視されています。 </li><li>外科分野は外科スクラブで無菌的に調製し、両耳が露出されるように覆われています。 </li><li>他の耳がペアになって非虚血性コントロールとして機能しながら、片方の耳には、虚血性レンダリングされます。 </li><li> 3血管茎は、動脈と静脈で識別されます。 </li><li> ＃15ブレードを使用して、3の小さな垂直切開（1〜1.5 cm）の耳の基部から血管茎、約1〜2 CMで作られています。 </li><li>中心静脈は、周囲の組織から単離され、縫合糸は、撤回のためにそれを取り囲むように使用されています。中心動脈は4から0縫合糸で結紮し、分割されています。 </li><li>付随する中枢神経も切断されます。 </li><li>全体脳神経茎を結紮し、分割されています。 </li><li>尾椎弓根は保持されます。 </li><li>皮下トンネルは3つの切開部を介して行われます。これはナイフとハサミでクランプと鋭い解剖の鈍的切開することによって達成される。皮下組織、筋肉、神経、小血管の枝のすべてが中止されています。真皮の下の小さな血管系は完全に分かれています。皮下組織のすべてがブレードと軟骨のレベルまでカットされています。 </li><li>さらに、シャープと鈍い解剖は5〜10 mm程度裸の軟骨が広いまま、ベースをクリーンアップするために使用されます。 </li><li>この手順では、割り込み皮下血管の枝のすべてを迅速に担保を確立することからそれらを防ぐことができます。 </li><li>出血がある最小限の。いずれかが存在する場合、それは容易に電気焼灼を必要とせず、ガーゼの圧縮によって制御されます。 </li><li>耳の内側の皮膚は非常に血液の供給を行いませんので切開されていません。 </li><li> 3皮膚切開は4から0または5から0縫合糸を使用してクローズし、滅菌ガーゼで覆われています。 </li><li> 3つの小さな皮膚切開と被っ開腹手術よりもはるかに少ない肌のダメージの手順の結果。 </li><li> 4つの円形全層皮膚創傷は、6 mmのステンレススチールパンチで各耳の腹側に作成されます。傷の間の距離は、少なくとも20〜30 mmである。パンチの傷内部の皮膚が軟骨から削除されます。軟骨膜はまた、皮膚または別々に、削除されます。 （ 図3）造粒と上皮化が行われているベースは軟骨であるが、軟骨があきません。 </li><li>対照薬はAPPLている間に両方の耳の傷が完了したときに、試験薬は二つの傷の一方の側に適用されます反対側にある傷にiedを。密封包帯（TegaDerm、3M）は、創傷部位をカバーするために使用されています。これは乾燥になってから傷を防ぎます。 </li><li>耳の底部の傷は、通常、耳の上部に傷がより速く回復する。創傷治癒の比較研究のために、それは反対側の2つの傷を片側に2つの傷を比較する、または別々に上部と下部の傷を比較することをお勧めします。 </li></ol> 3。術後処置<ol><li> Duragesicパッチは可能な限り痛みを軽減するために2-3日間フェンタニル（25μgの/時間）解放するために背部皮膚に取り付けられています。 </li><li>ウサギは食べ物や飲み物への無料アクセスを許可されています。 </li><li>ドレッシングの変更は、毎日行われている。古い包帯が削除され、傷は滅菌綿棒で掃除されています。デジタル写真は、比較のために取られています。新しいドレッシングが適用され、傷はTegaDermにより再びカバーされています。いいえ麻酔薬は、chをドレッシング中には必要ありませんアンジェス。 </li><li>皮膚温度は、比較のためにそれぞれの耳に毎日測定されています。 </li><li>追加の耳の血液循環は、経皮酸素張力計やレーザードップラー血流計で測定することができます。 </li><li>縫合糸は1週間後に削除される可能性があります。 </li><li>非糖尿病動物のために、耳の傷のほとんどは、通常2-3週間以内に治癒する。 </li></ol> 4。潜在的な合併症とその回避方法この低侵襲手術は安全であり、合併症は稀である。過渡的な術後軽度の耳浮腫を除いて、私たちのウサギはいずれも重篤な術後合併症を持っていませんでした。それにもかかわらず、この手順のいくつかの潜在的な合併症があります。 <ol><li>出血。止血が不完全な場合または大きい血管が（例えば、主茎血管の一つとして）が破損している場合出血は切開で発生する可能性があります。これは簡単に注意して解剖することによって回避されています。三大維管束に加えて、そこに多くのマイナー皮下血管の枝を再び。皮下トンネルが行われたときに、これらの船舶はカットがない抱き合わせは必要ありませんされています。止血は、ガーゼを押すだけで達成することができます。これは簡単に数分間トンネルにガーゼのコーナーを挿入することによって行われます。切開を閉じる前に、アクティブな出血が存在しないことを確認してください。 </li><li>切開感染と裂開：切開が汚染されている場合、これらの合併症が発生する可能性があります。これは、厳格な無菌操作を使用することによって回避することができず、抗生物質は必要ありません。しかし、感染症が発生しない場合、適切な排水やドレッシングの変更が必要とされている。 </li><li>耳の浮腫：血管の結紮やリンパ循環の混乱のために、軽度の耳浮腫が数日間提示することができる。しかし、それ自体が消滅し、無治療の必要はありません。 </li></ol> 5。代表的な結果 2007年以来、我々は23糖尿病を含む、70以上のウサギでは、この手順を使用しているimals。糖尿病群では、手術は別の糖尿病の回で行われました：7ウサギは、糖尿病時の二週間は、それらの4つの12ヶ月いた10、2ヶ月を持っていた、2は糖尿病時の24ヶ月を持っていた。 すぐに手術後、虚血性の耳は軽度の浮腫で、クールとチアノーゼ登場しました。最も重要な耳動脈中央動脈いた正常な耳に強いパルスが、このパルスは虚血性の耳には存在しませんでした。耳の動きは減少したが、完全に消えることはありませんでした。皮膚がトンネルを介して明確なくぼみを示したが、全く虚血または壊死は、任意の動物（ 図4）が見つかりませんでした。 正常および虚血性の耳の皮膚温度を（オムロンヘルスケア、バノックバーン、イリノイ州、またはフィッシャー·サイエンティフィック、ピッツバーグ、PAによって赤外線スポット温度計Kタイプ別オムロン）デジタル温度計で測定した。非虚血、虚血性耳の間の温度差は1〜10°C、Wであったi番目のほとんどのウサギは2-6℃の範囲で図に該当する。 5 30ウサギの平均温度差を示しています。温度差は、手術後の早い時期に高値であった15日後に徐々に減少したが、まだ1月末に維持した。 彼らは屠殺した後、組織の高エネルギーリン酸塩の内容はいくつかの動物で測定した。六組織サンプルは、それぞれの耳から採取し、高エネルギーリン酸塩の内容は、HPLCにより測定した。 ATPと総エネルギーの濃度の両方が虚血性耳に通常より耳のほうが高かった。 図。 6は 23日、手術後に屠殺ウサギの例を示します。平均組織ATPの内容は、0.349±0.047、正常耳におけるマイクロモル/ g以下（平均±SD）対0.237±虚血性の耳の中に0.059モル/ gであり（P &lt;0.005）であった。総エネルギー（ATP + ADP + AMP）を意味すると0.882±0.137、正常耳におけるマイクロモル/ gの対0.556±ischeで0.115マイクロモル/ gであった<html>マイク耳（P &lt;0.001）。 創傷治癒時間はすべての群において非虚血性耳（非糖尿病または糖尿病）よりも虚血性の耳のために常に長かった。 図。 7は、虚血および非虚血性の耳の傷の26組の間の治癒の比較を示しています。癒しの時間は、虚血性の耳（P = 0.001）で17から27日対正常な耳（20.5平均値±3.4日）で13日から18日間（14.9を平均値±1.6日）であった。高齢者や糖尿病ウサギにおける創傷治癒時間は糖尿病の時間が12ヶ月以上であった場合は特に、はるかに長かった。 これらのウサギでは、糖尿病時の24ヶ月とウサギを含む任意の合併症もなく正常に治癒したすべての切開、 図8は、筋肉が存在せず、線維組織によって置換されている治 ​​癒皮下トンネルを示す組織サンプルです。しかし、皮膚は無傷です。 / 3341fig1.jpg &quot;/&gt; 図1ウサギの耳は3維管束によって供給されます。中央には最大である、頭蓋は小さく、尾バンドルが最小である。耳が剃られた後にこれらの船は容易に表面に見られている。 <img alt="図2" src="/files/ftp_upload/3341/3341fig2.jpg" /> 図2。背部皮膚にではなく、貫通血管を通って腹の皮膚にだけでなく、背側の耳の血液を供給する血管の3つのバンドル。矢印は軟骨を貫通する血管を示しています。挿入図に示すようにこれらの血管のセクションを渡ります。 <img alt="図3" src="/files/ftp_upload/3341/3341fig3.jpg" /> 図3 4つの6 mmの傷は耳の腹側に作成され、軟骨も削除されます。肉芽組織と上皮化が行われているベースは軟骨であるが、軟骨があきません。 Smalの3<html> lの皮膚切開は、ほとんど皮膚の混乱で閉鎖されています。 <img alt="図4" src="/files/ftp_upload/3341/3341fig4.jpg" /> 皮膚切開が閉じられた後、 図4。、皮下トンネルを介してインデントが明確に見られている。 <img alt="図5" src="/files/ftp_upload/3341/3341fig5.jpg" /> 図5 30ウサギにおける正常および虚血性の耳の間の平均皮膚温の差。手術後7°Cから10°Cに初期の差の範囲である。差は徐々に減少しますが、まだ1ヶ月の終わりに維持しています。 <img alt="図6" src="/files/ftp_upload/3341/3341fig6.jpg" /> 手術後23日間（P &lt;0.001）で、非虚血性耳に比べて、 図6耳組織の高エネルギーリン酸塩の内容は、虚血性の耳に削減されます。 41/3341fig7.jpg &quot;/&gt; 図7。創傷治癒時間は、非虚血性の耳（26傷それぞれ）よりも虚血性の耳の中に長くなります。治癒が負傷した組織への整合性の回復、すなわち、創傷部位の完全な再上皮化として定義されています。 <img alt="図8" src="/files/ftp_upload/3341/3341fig8.jpg" /> 図8。皮下トンネルを含む耳部を示す組織学的サンプル。治癒組織が正常耳よりも薄いですが、オリジナルの骨格筋は存在せず、線維性組織に置換されます。しかし、皮膚は無傷です。

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この研究に関与する利害の金融紛争はありません。

糖尿病は、米国、2,3は23.6万人に影響を及ぼし、これらの患者の15-20％以上の250億ドルの年間治療費で4,5一生の間に足潰瘍を開発しています。3,6しかしながら、利用可能な最善の糖尿病患者では66％と高い再発率と治療はわずか50％の治癒率を達成し、これはしばしば一時的なもので、7 3,6潰瘍、糖尿病患者に発生した場合は、そのような感染症と劇的に切断の?...

手術中のモニタリングのための<ol><li>正常な温度を維持するために、加熱パッド。 </li><li>経皮酸素モニター。 </li><li>温度モニター。 </li></ol>手術のための<ol><li> ＃15ブレードと第3位のナイフ。 </li><li>鉗子の2ペア（他の軟部組織、皮膚用と別のもの）。 </li><li>小さなクランプ2-3ペア。 </li><li>マイクロはさみの1つまたは2つのペア（組織切削用）。 </li><li>小さなハサミの1対（縫合糸を切断するため）。 </li><li>ニードルホルダー。 </li><li>いくつかのステンレス鋼のパンチ（傷を作るため）。 </li></ol>

a simplified technique for producing an ischemic wound model

現在の糖尿病の創傷研究の一つの大きな障害は、安全に糖尿病の動物に使用することができます虚血性創傷モデルの欠如である。血管障害は、これらの傷の治癒を妨げている一つの大きな要因であるため、非虚血性創傷でうまく薬剤は、ヒト糖尿病の傷では動作しない可能性があります。我々は、低侵襲外科技術で作成されたウサギの耳の虚血性創傷モデルを記述する2007年の記事を掲載した。それ以来、私たちはさらに簡単に操作するための手順を単純化しています。片方の耳に、3の小さな皮膚切開は、血管茎、耳のベース1〜2センチメートルで行われた。中心動脈を結紮し、神経に沿って切断した。全体脳神経バンドルのみ尾枝はそのまま残して、カットと連結した。円周皮下トンネルは皮下組織、筋肉、神経、小血管を切断し、切開部を介して行われました。他の耳は、非虚血性コントロールとして用いた。四傷は腹側Oで行われたfはそれぞれの耳。このテクニックは、4虚血性創傷とペア比較のために、1つの動物の4つの非虚血性創傷を生成します。手術後、虚血性の耳は涼しく、チアノーゼであり、減少の動きと耳動脈におけるパルスの欠如を示した。虚血性の耳の皮膚温は、1〜10℃であり通常の耳のそれより低く、この差は1ヶ月以上維持されていた。耳組織の高エネルギーリン酸塩の内容は、コントロールの耳よりも虚血性の耳に低かった。創傷治癒時間は、同じ処理が使用された非虚血性耳に比べて虚血性の耳に長かった。この技術は現在23糖尿病（2週間から2歳までの糖尿病時間）された80以上のウサギに使用されています。単一のウサギの皮膚切開でそのような出血、感染、破裂などの手術の合併症を開発していない。モデルは、少し皮膚の中断、長い虚血時間、および他の多くのモデルに比べて高い成功率など、多くの利点があります。それは約nは安全に減少された抵抗を持つ動物で使用され、また別のテストの要件を満たすように変更することができます。

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A Simplified Technique for Producing an Ischemic Wound Model

我々は、中心動脈と神経と頭蓋神経血管束を分割することによってウサギ虚血性耳創傷モデルを作成するには、低侵襲技術を開発した。皮下トンネルは、すべての皮下組織をカットします。この手順では、最小限の皮膚の中断を引き起こし、安全に糖尿病の動物に使用することができます。

虚血性創傷モデルを作製するための簡略化手法

One major obstacle in current diabetic wound research is a lack of an ischemic wound model that can be safely used in diabetic animals. Drugs that work ...

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Research

JoVE Journal

Medicine

17.1K ビュー.  University of Louisville. 我々は、中心動脈と神経と頭蓋神経血管束を分割することによってウサギ虚血性耳創傷モデルを作成するには、低侵襲技術を開発した。皮下トンネルは、すべての皮下組織をカットします。この手順では、最小限の皮膚の中断を引き起こし、安全に糖尿病の動物に使用することができます。

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Gene Transfer for Ischemic Heart Failure in a Preclinical Model

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine their efficacy and safety.
Gene therapy using viral vectors is one of the most promising approaches for treating cardiac diseases. Viral delivery of various different genes by changing the carrier gene has immeasurable therapeutic potential.
In this video, the full process of an animal model of heart failure creation followed by gene transfer is presented using a swine model. First, myocardial infarction is created by occluding the proximal left anterior descending coronary artery. Heart remodeling results in chronic heart failure. Unique to our model is a fairly large scar which truly reflects patients with severe heart failure who require aggressive therapy for positive outcomes. After myocardial infarct creation and development of scar tissue, an intracoronary injection of virus is demonstrated with simultaneous nitroglycerine infusion. Our injection method provides simple and efficient gene transfer with enhanced gene expression. This combination of a myocardial infarct swine model with intracoronary virus delivery has proven to be a consistent and reproducible methodology, which helps not only to test the effect of individual gene, but also compare the efficacy of many genes as therapeutic candidates.

A method of gene transfer for the treatment of ischemic heart failure is described using a swine model of myocardial infarction. Our simple and reproducible method enables us to readily evaluate the efficacy of various gene transfers with a very simple and reproducible way.

前臨床モデルにおける虚血性心不全のための遺伝子導入

Various emerging technologies are being developed for patients with heart failure. Well-established preclinical evaluations are necessary to determine ...

医学

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

Enucleation is the process of retrieving the ocular globe from a cadaveric donor leaving the rest of the globe undisturbed. Excision refers to the retrieval of ocular tissues, especially cornea, by cutting it separate from the ocular globe. Evisceration is the process of removing the internal organs referred here as retina. The ocular globe consists of the cornea, the sclera, the vitreous body, the lens, the iris, the retina, the choroid, muscles etc (Suppl. Figure 1). When a patient is suffering from corneal damage, the cornea needs to be removed and a healthy one must be transplanted by keratoplastic surgeries. Genetic disorders or defects in retinal function can compromise vision. Human ocular globes can be used for various surgical procedures such as eye banking, transplantation of human cornea or sclera and research on ocular tissues. However, there is little information available on human corneal and retinal excision, probably due to the limited accessibility to human tissues. Most of the studies describing similar procedures are performed on animal models. Research scientists rely on the availability of properly dissected and well-conserved ocular tissues in order to extend the knowledge on human eye development, homeostasis and function. As we receive high amount of ocular globes out of which approximately 40% (Table 1) of them are used for research purposes, we are able to perform huge amount of experiments on these tissues, defining techniques to excise and preserve them regularly.
The cornea is an avascular tissue which enables the transmission of light onto the retina and for this purpose should always maintain a good degree of transparency. Within the cornea, the limbus region, which is a reservoir of the stem cells, helps the reconstruction of epithelial cells and restricts the overgrowth of the conjunctiva maintaining corneal transparency and clarity. The size and thickness of the cornea are critical for clear vision, as changes in either of them could lead to distracted, unclear vision. The cornea comprises of 5 layers; a) epithelium, b) Bowman's layer, c) stroma, d) Descemet's membrane and e) endothelium. All layers should function properly to ensure clear vision4,5,6. The choroid is the intermediate tunic between the sclera and retina, bounded on the interior by the Bruch's membrane and is responsible for blood flow in the eye. The choroid also helps to regulate the temperature and supplies nourishment to the outer layers of the retina5,6. The retina is a layer of nervous tissue that covers the back of the ocular globe (Suppl. Figure 1) and consists of two parts: a photoreceptive part and a non-receptive part. The retina helps to receive the light from the cornea and lens and converts it into the chemical energy eventually transmitted to the brain with help of the optic nerve5,6.
The aim of this paper is to provide a protocol for the dissection of corneal and retinal tissues from human ocular globes. Avoiding cross-contamination with adjacent tissues and preserving RNA integrity is of fundamental importance as such tissues are indispensable for research purposes aimed at (i) characterizing the transcriptome of the ocular tissues, (ii) isolating stem cells for regenerative medicine projects, and (iii) evaluating histological differences between tissues from normal/affected subjects. In this paper we describe the technique we currently use to remove the cornea, the choroid and retinal tissues from an ocular globe. Here we provide a detailed protocol for the dissection of the human ocular globe and the excision of corneal and retinal tissues. The accompanying video will help researchers to learn an appropriate technique for the retrieval of precious human tissues which are difficult to find regularly.

A Simplified Technique for In situ Excision of Cornea and Evisceration of Retinal Tissue from Human Ocular Globe

The paper describes a simplified technique to excise corneal and to eviscerate retinal tissues from the ocular globe of human cadaveric donors. The technique described here will help to excise good quality tissues to be used for transplantation, surgical or research purposes without damaging other tissues of the ocular globe.

の簡略化手法<em&gt;その場</em人間の眼球から角膜と網膜組織の空洞化の&gt;切除

Enucleation is the process of retrieving the ocular globe from a cadaveric donor leaving the rest of the globe undisturbed. Excision refers to the ...

Murine Model of Wound Healing

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. Impaired wound healing, which occurs in diabetic patients for example, can lead to severe unfavorable outcomes such as amputation. There is, therefore, an increasing impetus to develop novel agents that promote wound repair. The testing of these has been limited to large animal models such as swine, which are often impractical. Mice represent the ideal preclinical model, as they are economical and amenable to genetic manipulation, which allows for mechanistic investigation. However, wound healing in a mouse is fundamentally different to that of humans as it primarily occurs via contraction. Our murine model overcomes this by incorporating a splint around the wound. By splinting the wound, the repair process is then dependent on epithelialization, cellular proliferation and angiogenesis, which closely mirror the biological processes of human wound healing. Whilst requiring consistency and care, this murine model does not involve complicated surgical techniques and allows for the robust testing of promising agents that may, for example, promote angiogenesis or inhibit inflammation. Furthermore, each mouse acts as its own control as two wounds are prepared, enabling the application of both the test compound and the vehicle control on the same animal. In conclusion, we demonstrate a practical, easy-to-learn, and robust model of wound healing, which is comparable to that of humans.

A murine model of cutaneous wound healing that can be used to assess therapeutic compounds in physiological and pathophysiological settings.

創傷治癒のマウスモデル

Wound healing and repair are the most complex biological processes that occur in human life. After injury, multiple biological pathways become activated. ...

Remote Limb Ischemic Preconditioning:  A Neuroprotective Technique in Rodents

Sublethal ischemia protects tissues against subsequent, more severe ischemia through the upregulation of endogenous mechanisms in the affected tissue. Sublethal ischemia has also been shown to upregulate protective mechanisms in remote tissues. A brief period of ischemia (5-10 min) in the hind limb of mammals induces self-protective responses in the brain, lung, heart and retina. The effect is known as remote ischemic preconditioning (RIP). It is a therapeutically promising way of protecting vital organs, and is already under clinical trials for heart and brain injuries. This publication demonstrates a controlled, minimally invasive method of making a limb &#8211; specifically the hind limb of a rat &#8211; ischemic. A blood pressure cuff developed for use in human neonates is connected to a manual sphygmomanometer and used to apply 160 mmHg pressure around the upper part of the hind limb. A probe designed to detect skin temperature is used to verify the ischemia, by recording the drop in skin temperature caused by pressure-induced occlusion of the leg arteries, and the rise in temperature which follows release of the cuff. This method of RIP affords protection to the rat retina against bright light-induced damage and degeneration.

Remote ischemic preconditioning (RIP) is a method of conditioning tissues against damaging stress. We have established a method of remote ischemia at the hind limb, by inflating a sphygmomanometer cuff for 5-10 min. The neuroprotective capabilities of RIP have been demonstrated in a model of retinal degeneration in rodents.

リモート四肢虚血プレコンディショニング：げっ歯類における神経保護技術

Sublethal ischemia protects tissues against subsequent, more severe ischemia through the upregulation of endogenous mechanisms in the affected tissue. ...

A Mouse Fetal Skin Model of Scarless Wound Repair

Early in utero, but not in postnatal life, cutaneous wounds undergo regeneration and heal without formation of a scar. Scarless fetal wound healing occurs across species but is age dependent. The transition from a scarless to scarring phenotype occurs in the third trimester of pregnancy in humans and around embryonic day 18 (E18) in mice. However, this varies with the size of the wound with larger defects generating a scar at an earlier gestational age. The emergence of lineage tracing and other genetic tools in the mouse has opened promising new avenues for investigation of fetal scarless wound healing. However, given the inherently high rates of morbidity and premature uterine contraction associated with fetal surgery, investigations of fetal scarless wound healing in vivo require a precise and reproducible surgical model. Here we detail a reliable model of fetal scarless wound healing in the dorsum of E16.5 (scarless) and E18.5 (scarring) mouse embryos.

During mammalian development, early gestational skin wounds heal without a scar. Here we detail a reliable and reproducible model of fetal scarless wound healing in the cutaneous dorsum of E16.5 (scarless) and E18.5 (scarring) mouse embryos.

瘢痕創傷修復のマウス胎児皮膚モデル

Early in utero, but not in postnatal life, cutaneous wounds undergo regeneration and heal without formation of a scar. Scarless fetal wound healing occurs ...

A Piglet Model of Neonatal Hypoxic-Ischemic Encephalopathy

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the world&#8217;s 2.9 million neonatal deaths. Animal models of HIE have contributed to the understanding of the pathophysiology in HIE, and have highlighted the dynamic process that occur in brain injury due to perinatal asphyxia. Thus, animal studies have suggested a time-window for post-insult treatment strategies. Hypothermia has been tested as a treatment for HIE in pdiglet models and subsequently proven effective in clinical trials. Variations of the model have been applied in the study of adjunctive neuroprotective methods and piglet studies of xenon and melatonin have led to clinical phase I and II trials1,2. The piglet HIE model is further used for neonatal resuscitation- and hemodynamic studies as well as in investigations of cerebral hypoxia on a cellular level. However, it is a technically challenging model and variations in the protocol may result in either too mild or too severe brain injury. In this article, we demonstrate the technical procedures necessary for establishing a stable piglet model of neonatal HIE. First, the newborn piglet (&#60; 24 hr old, median weight 1500 g) is anesthetized, intubated, and monitored in a setup comparable to that found in a neonatal intensive care unit. Global hypoxia-ischemia is induced by lowering the inspiratory oxygen fraction to achieve global hypoxia, ischemia through hypotension and a flat trace amplitude integrated EEG (aEEG) indicative of cerebral hypoxia. Survival is promoted by adjusting oxygenation according to the aEEG response and blood pressure. Brain injury is quantified by histopathology and magnetic resonance imaging after 72 hr.

Hypoxic-ischemic encephalopathy following perinatal asphyxia can be studied using animal models. We demonstrate the procedures necessary for establishing a piglet model of neonatal hypoxic-ischemic encephalopathy.

新生児低酸素性虚血性脳症の子豚モデル

Birth asphyxia, which causes hypoxic-ischemic encephalopathy (HIE), accounts for 0.66 million deaths worldwide each year, about a quarter of the ...

Demonstration of the Rat Ischemic Skin Wound Model

The propensity for chronic wounds in humans increases with ageing, disease conditions such as diabetes and impaired cardiovascular function, and unrelieved pressure due to immobility. Animal models have been developed that attempt to mimic these conditions for the purpose of furthering our understanding of the complexity of chronic wounds. The model described herein is a rat ischemic skin flap model that permits a prolonged reduction of blood flow resulting in wounds that become ischemic and resemble a chronic wound phenotype (reduced vascularization, increased inflammation and delayed wound closure). It consists of a bipedicled dorsal flap with 2 ischemic wounds placed centrally and 2 non-ischemic wounds lateral to the flap as controls. A novel addition to this ischemic skin flap model is the placement of a silicone sheet beneath the flap that functions as a barrier and a splint to prevent revascularization and reduce contraction as the wounds heal. Despite the debate of using rats for wound healing studies due to their quite distinct anatomic and physiologic differences compared to humans (i.e., the presence of a panniculus carnosus muscle, short life-span, increased number of hair follicles, and their ability to heal infected wounds) the modifications employed in this model make it a valuable alternative to previously developed ischemic skin flap models.

The rat, due to its size, availability, and rather docile behavior, has been utilized as a research model for many years. The goal of this protocol is to utilize the rat as an ischemic skin wound healing model to provide valuable insight into the pathophysiology of chronic wounds.

ラット虚血皮膚創傷モデルの実証

The propensity for chronic wounds in humans increases with ageing, disease conditions such as diabetes and impaired cardiovascular function, and ...

Murine Left Anterior Descending (LAD) Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

Ischemic heart disease (IHD), or acute coronary syndrome (ACS), is one of the leading causes of death in the United States. IHD is characterized by reduced blood supply to the heart, resulting in the loss of oxygen to and the ensuing necrosis of the heart muscle. The MI model has gained popularity for its use as a short-term ischemia-reperfusion model and a long-term permanent ligation model. Below, we describe a reliable method for the permanent ligation of the LAD. With mouse genetic engineering technology becoming more advanced, and with an increasing availability of quality murine surgical instruments, the mouse has become a popular model for MI surgeries. Our surgical model incorporates the use of an easily reversible anesthetic for the rapid recovery of the mouse; a minimally invasive endotracheal intubation without involving a tracheotomy; and a thoracentesis through the original thoracotomy site without creating an additional incision in the chest, as is done in some other methods, to effectively remove excess blood and air from the chest cavity. This method is comparatively less invasive than other methods, which dramatically reduces surgical and post-surgical complications and mortality and improves reproducibility.

Murine Left Anterior Descending LAD Coronary Artery Ligation: An Improved and Simplified Model for Myocardial Infarction

We provide a reliable method for left anterior descending artery (LAD) ligation in a mouse model. This method is comparatively less invasive than other methods, involving endotracheal intubation, a left-sided thoracotomy approach, and thoracentesis. This method can be used as a model for both acute and chronic myocardial infarction (MI).

マウス左前方降順（LAD）冠動脈結紮：心筋梗塞のための改善と簡略化されたモデル

Ischemic heart disease (IHD), or acute coronary syndrome (ACS), is one of the leading causes of death in the United States. IHD is characterized by ...

An Intact Pericardium Ischemic Rodent Model

This protocol has shown that the pericardium and its contents play an essential anti-fibrotic role in the ischemic rodent model (coronary ligation to induce myocardial injury). The majority of pre-clinical myocardial infarction models require the disruption of pericardial integrity with loss of the homeostatic cellular milieu. However, recently a methodology has been developed by us to induce myocardial infarction, which minimizes pericardial damage and retains the heart&#39;s resident immune cell population. An improved cardiac functional recovery in mice with an intact pericardial space following coronary ligation has been observed. This method provides an opportunity to study inflammatory responses in the pericardial space following myocardial infarction. Further development of the labeling techniques can be combined with this model to understand the fate and function of pericardial immune cells in regulating the inflammatory mechanisms that drive remodeling in the heart, including fibrosis.

This protocol outlines the steps for inducing myocardial infarction in mice while preserving the pericardium and its contents.

無傷心膜虚血性げっ歯類モデル

This protocol has shown that the pericardium and its contents play an essential anti-fibrotic role in the ischemic rodent model (coronary ligation to ...

A Simplified Model for Heterotopic Heart Valve Transplantation in Rodents

There is an urgent clinical need for heart valve replacements that can grow in children. Heart valve transplantation is proposed as a new type of transplant with the potential to deliver durable heart valves capable of somatic growth with no requirement for anticoagulation. However, the immunobiology of heart valve transplants remains unexplored, highlighting the need for animal models to study this new type of transplant. Previous rat models for heterotopic aortic valve transplantation into the abdominal aorta have been described, though they are technically challenging and costly. For addressing this challenge, a renal subcapsular transplant model was developed in rodents as a practical and more straightforward method for studying heart valve transplant immunobiology. In this model, a single aortic valve leaflet is harvested and inserted into the renal subcapsular space. The kidney is easily accessible, and the transplanted tissue is securely contained in a subcapsular space that is well vascularized and can accommodate a variety of tissue sizes. Furthermore, because a single rat can provide three donor aortic leaflets and a single kidney can provide multiple sites for transplanted tissue, fewer rats are required for a given study. Here, the transplantation technique is described, providing a significant step forward in studying the transplant immunology of heart valve transplantation.

This protocol describes a simple and efficient method for the transplantation of aortic valve leaflets under the renal capsule to allow for the study of alloreactivity of heart valves.