コロラドジャガイモカブトムシは、温帯のジャガイモの最も深刻な害虫の1つです。この害虫の免疫と病因の研究は、主に活動段階で行われます。しかし、温帯では、この害虫はライフサイクルのほとんどを冬眠状態で過ごします。
本研究では、コロラドジャガイモ甲虫の冬眠方法と冬季の甲虫採集技術について紹介する。この方法の主な利点は、冬眠の任意の期間にウイルス分析のために任意の数の越冬個体を取得できることです。ケージは、25×25×40cmの硬い木製フレームで作られたものを使用してください。
ケージのフレームを作るには、厚さ2センチ以上、幅4センチ以上の木製スラットを使います。ケージの内側を5×3ミリメートル以下のサイズのステンレス鋼メッシュで覆います。木のホッチキスでメッシュを固定します。
ケージの内側に、密度60グラム/平方メートルの黒い合成ジオテキスタイルを敷きます。高さ約60センチの合成半透明の通気性生地のチューブをケージの上部にしっかりと取り付けます。ケージの底に2本の強力なロープを交差させて固定し、必要に応じて土から引き出します。
土に40センチの深さの穴を掘ります。枯れ草や干し草を穴に置きます。干し草や枯れ草がケージの壁と土の間に来るようにケージを内側に置きます。
昆虫が集められたのと同じジャガイモ畑の土でケージを満たします。防水温度および湿度データロガーをケージ内の必要な深さに設置します。甲虫が入る3〜4週間前にケージ内にジャガイモの苗を植え、適度に水をやります。
合成繊維のチューブをケージの外側に取り付けられた素材の棒に垂直に固定します。ジャガイモの植生の終わりに向かって無農薬のジャガイモ畑で成虫のカブトムシを手作業で集めます。集めたカブトムシは、昆虫に餌を与えるためにジャガイモのてっぺんが入った20リットルのプラスチックバケツに入れてからケージに入れます。
通気性の良い布でバケツを覆います。合成繊維のメッシュで覆われたジャガイモの植物にカブトムシの200個以下の個体を配置します。ポテトトップスが消費されたら、水の入ったプラスチックの瓶にセットされた新しいものを追加し、その後毎日ポテトトップを交換します。
すべてのカブトムシが越冬のために土に穴を掘ったら、棒から合成繊維のチューブをほどき、布を置きます。ケージの表面の上の雪を取り除きます。強力なシャベルで両側のケージを緩めます。
ロープを使ってケージを土から引き出します。ケージをラボに持参します。ケージから土を少しずつ取り除き、大きな土を慎重に砕き、ピンセットを使用してカブトムシを分離します。
生きたカブトムシを死体から分離します。生きた健康なカブトムシは、周囲の土壌を圧縮して空気空洞、いわゆる揺りかごを形成するため、土壌から簡単に分離されます。真菌によって殺されたカブトムシは、ミイラ化しているか、表面に菌糸体が見えます。
バクテリアで分解する昆虫は暗いです。ふるいを通して土をふるいにかけ、すべてのカブトムシが孤立し、損傷を受けていないことを確認します。真菌感染または細菌分解の症状のある死体を、将来の識別のために個々の滅菌ファルコンチューブに入れます。
生きたカブトムシは、湿らせた綿球が入った密閉された換気容器に分析されるまで、摂氏2度の温度で冷蔵庫に保管してください。血リンパ液を採取するには、インスリン針で大動脈の下の腹部の外側部分に穿刺します。腸を分離するには、ヘッドカプセルを切り取り、リン酸緩衝液を入れたペトリ皿にすべての内容物を絞り出します。
腸を分離し、脂肪やマルピーギの血管から浄化します。前腸、中腸、後腸など、腸の目的の部分を分離します。脂肪体を分離するには、腸を分離した後、他の組織から分離します。
死体から昆虫病原性真菌を分離するには、ミイラ化した死体を滅菌湿度室に入れます。カブトムシの内部内容物からの空中分生子または菌核を使用して、0.4%乳酸でSabouraudデキストロース寒天にメッキします。細菌腐敗の症状のある死体から細菌を分離します。
カブトムシの頭を切り落とし、内部の内容物を絞り出し、チューブに集めて、バクテリアの培地にめっきします。11月末から4月上旬にかけて、水深30センチメートルのケージ内の気温が0度以下を記録しました。この期間の平均気温は摂氏3.3度0.1度でした。
最低気温は2月中旬の7.9°C。昆虫の死亡率は冬眠中に増加し、羽化前の春に最大に達しました。カブトムシの最初の数は2, 000匹で、そのうち1, 470匹が生き残りました。
したがって、冬眠中のカブトムシの生存率は61%でした530体の死体を分析したところ、冬眠期間中の53%が細菌分解の症状を特徴とし、25%が真菌感染の症状を特徴としていました。Beauveriaは昆虫病原性真菌の隔離された文化の間で支配した。Metarhizium、冬虫夏草、Lecanicilliumはあまり一般的ではありませんでした。
細菌分解の症状を呈した死体から分離された細菌の中には、バチルス属、スフィンゴバクテリウム属、ペリバチルス属、シュードモナス属、セラチア属、ラーネラ属、グルタミシバクター属に属する種が同定された。この方法を使用すると、冬に畑からコロラドポテトビートルを入手する問題を解決できます。それはあなたが昆虫の低い死亡率であなたが必要とするだけ多くの個体を得ることを可能にします。
カブトムシの冬眠のさまざまな側面の研究は、この害虫の防除へのアプローチを改善するために、基礎的および応用的観点から重要です。そしてもちろん、この技術は土壌で越冬する他の昆虫種にも適用できます。
