실험실 쥐의 추구 코카인 Footshock 유발 복직을 유학을위한 절차

요약

복직 절차로 알려진 재발의 동물 모델은, 약물 추구하는 재발 스트레스의 역할을 연구하기 위해 널리 사용되었습니다. 여기, 우리는 온화, 간헐적인 전기 footshock에 급성 노출을 통해 실험실 쥐에서 찾는 코카인의 복직을 유도하는 방법에 대한 리포트입니다.

초록

약물 중독의 가장 교활한 측면은 재발에 대한 높은 성향이다. 복직 절차로 알려진 재발의 동물 모델은, 약물 사용에 재발의 신경 생물학과 현상론을 연구하기 위해 널리 사용되었습니다. 절차적 변화는 지난 몇 년간 부상하고 있지만, 가장 일반 복직 절차는 약물 자기 관리 (SA) 모델을 기반으로합니다. 이 모델에서는 동물이 약물을 얻기 위해 operant 응답을 수행하는 훈련입니다. 이후, 문제는 원천 반응을 파견 보강에 의해 소멸됩니다. 약물 추구의 복귀는 다음과 같은 훈련 약물, 약물 - 관련 단서를 다시 노출, 또는 스트레스 ¹ 노출의 주입으로 개별 이벤트에 의해 트리거됩니다.

복직 절차는 원래 쥐와 원숭이 ^{1, 2에서} 추구하는 약물을 복원하기 위해 훈련 약물로 급성 비 파견 노출의 능력을 연구하기 위해 개발되었습니다. 복직 절차부터 ^{1, 3, 4를} 찾는 약물로 재발에 마약 관련 단서 및 스트레스의 여러 형태에 노출을 포함하여 환경 자극의 역할을 연구하기 위해 수정되었습니다.

지난 15 년 동안 복직 문학의 주요 초점은 약물 재발 스트레스의 역할을하고 있습니다. 이 관계를 공부에 대한 스트레스가 가장 일반적으로 사용되는 형태 중 하나는 약한, 간헐, 전기 footshocks에 급성 노출합니다. 추구하는 약물의 복귀를 유도하기 위해 footshock 스트레스의 기능은 원래 정맥 주사 마약 SA ⁵ 역사를 가진 쥐의 Shaham 및 동료 (1995)에 의해 입증되었다. 이후, 효과는 정맥 코카인, 암페타민과 니코틴 SA뿐만 아니라 구술 에탄올 SA ^{3, 6} 역사와 함께 쥐에 일반했다.

약물 추구의 footshock 유도된 복귀가 안정적으로 견고하게 얻을 수 있지만, 그것은 특정 parametrical 변수에 민감한 경향이 효과가있다. 이들은 멸종하고 복귀 테스트 세션의 배열, footshock 스트레스의 강도와 기간, 그리고 멸종과 복직에 대한 테스트 기간 동안 마약 관련 단서의 존재를 포함합니다. 여기서 우리는 스트레스와 추구하는 코카인 사이의 관계를 연구하기 위해 일관성있는 성공과 함께 사용할 것을 추구하는 코카인의 footshock 유발 복직을위한 프로토콜을 제시한다.

프로토콜

1. 동물의 주택과 새 환경 순응 절차

1. 동식물 사육장에 도착 시간에 3백~3백25g 무게 남성 롱 에번스 쥐는, 물 병 음식을 수용 와이어 그리드 뚜껑과 재활용 종이 펠렛의 침구를 포함하는 표준 플라스틱 새장에 개별적으로 보관되어있다.
2. 쥐는 온도 및 습도 제어 동식물 사육장에서 역방향 빛을 어둠 일정 (19시에서 7시까지 불을)에 유지됩니다.
3. 음식과 물이 실험을하는 동안 가정의 새장에서 사용할 수있는 광고 libitum입니다.
4. 쥐는 수술을하기 전에 일주일 동안 동식물 사육장과 주거 조건에 순응 수 있습니다. 이 기간 동안 쥐가 먹이를, 일상적인 청소를 제외하고 그대로 남아 있으며, 체중의 모니터링.

2. 정맥 Catheterization 외과

1. isoflurane 가스 마취 및 표준 무균 수술 기법을 사용 쥐가 오른쪽 경정맥 정맥에 카테터 silastic와 준비가되어 있습니다. 두개골의 표면에 수정 정맥 (프라스틱 원) 및 정맥에 카테 테르의 출구는 보석상 '나사 및 치과 시멘트로 두개골에 마운트됩니다. 수술 절차에 대한 자세한 ^{내용은, 8 7} 참조하십시오.
2. 수술의 끝에, 카테터는 50 %의 헤파린 (1000 IU)와 50 %의 덱스 트로 오스 (25 g/50 ML)를 포함하는 솔루션의 약 0.2 ML로 플러시됩니다. 플라스틱 차단기는 외부 잔해에서 카테터를 보호하고, 카테 테르의 명백을 유지하기 위해 정맥의 개통을 통해 배치됩니다.
3. 수술 당시 다시 수술 다음날에 쥐가은 진통 케토프로펜 5 MG / kg, SC를 관리하고 있습니다.
4. 쥐는 적어도 7 일 이내에 실험을하기 전에 수술에서 회복하기 위해 사용할 수 있습니다. 이 기간 동안, 쥐는 청소와 먹이 일상의 예외, 그리고 무게 및 일반 건강 일일 모니터링과 홈 새장에 그대로 남아 있습니다. 복구 기간의 마지막 날, 카테터는 카테 테르의 명백을 확인하기 위해 헤파린 / 덱스 트로 오스 솔루션 (섹션 2.2)로 플러시됩니다.

3. 행동 절차

모든 행동 절차 메드 어소 주식 회사 (세인트 알반스, VT)가 제공하는 장비를 사용하여 수행됩니다. 전용 방에 보관되어 장비, 표준 operant 회의소, 사운드 attenuating 인클로저에 포함된 각각의 집합을 포함합니다. 각 operant 챔버는 두 개폐식 레버, 스테인리스 막대 바닥 위에 모두 높은 6.5 cm를 갖추고 있습니다. 하얀 자극 라이트는 한 레버 위에 위치하고 있으며, 그 레버 (소위 "활성"레버) 주입 펌프 (Razel 과학 계측기, 세인트 알반스의 자극 빛과 활성화의 동시 조명의 결과에 반응입니다 VT). 펌프는 단지 operant 챔버 밖에서 선반에 위치한지만, 사운드 attenuating 인클로저 내에 있습니다. 다른 레버 (소위 "비활성"레버)는 모든 실험 절차를 통해 챔버에 확장 남아,이 레버에 대한 응답 결과 않고 있습니다. 마지막으로, 각 챔버는 강철 막대 바닥에 변환기를 통해 일정한 전류, 간헐, 피할 수없는, 전기 footshock를 제공하기 위해 갖추고 있습니다. 모든 실험 조건 (예를 들어, 자극 프레 젠 테이션, 약물 혼합, 충격 전달)뿐만 아니라, 데이터 기록 및 통합은 시험 챔버와 중앙 컴퓨터 운영 메드 어소 소프트웨어 (MED - IV) 사이의 인터페이스를 통해 달성됩니다.

실험은 5 단계로 수행됩니다 : 1) 요법 이니를, 2) 코카인 SA, 3) 의약품 무료 기간, 4) 소멸, 그리고 5) 복직에 대한 테스트. 모든 단계 (마약없는 기간 제외)에서 쥐가은 주거 공간에서 operant 테스트 챔버 매일 세션에 전송됩니다. 동물은 작은 플라스틱 용기에 개별적으로 전송됩니다. 음식과 물이 operant 실에서 사용할 수 없습니다.

1. 요법 이니
   1. 첫 번째 코카인 SA 세션을 (. 섹션 3.2 참조) 앞의 스물넷 시간은, 쥐가는 단일 2 H 세션 동안 operant 방으로 길들 허용하는,이 세션 동안 활성 레버가 철회됩니다.
2. 코카인 SA 교육
   1. 각각의 일일 훈련 전에 쥐가는 주택 방에 무게입니다. 이후 그들은 operant 방으로으로 전송됩니다.
   2. operant 실, 봄, 튜브 어셈블리 (약물 주입 펌프의 확장)에 배치되는 즉시이 두개골 장착 정맥에 연결되어 있습니다.
   3. 쥐가 허용하는 매일 동안 코카인 HCL을 자체 관리 3 - H의 80~10일 총 세션 (중 연속적으로 또는 세션 5와 6 사이를 둘 다 개입 "휴일"로).
   4. 아침 (9시에서 12시까지)과 오후 (13시부터 16시까지) 사이 대체 SA 세션. 실험 (즉, 멸종과 테스트)의 후속 단계의 절차는 t 모두에서 발생하기 때문에 SA 세션의 타이밍이 가끔 해있다모든 동물들에게 하루 임즈은 (제 3.4 및 3.5 참조), 따라서이 협정 이후의 약물 추구 행동에 대한 하루 중 시간의 혼란함을 주죠 효과를 방지합니다.
   5. 각 훈련 세션은 동물 활성 레버 철회와 operant 실에 배치되는 동안 5 분 새 환경 순응 기간 앞에 있습니다.
   6. 트레이닝 세션의 시작 부분에 활성 레버는 챔버로 확장되고 자극 라이트는 (활성 레버 위에있는) 30 켜집니다 S. 또한, 집안의 조명이 시간에 활성화되며, 세션에 걸쳐 조명 남아있다. 함께, 이러한 이벤트는 코카인의 가용성을 신호.
   7. 세션 동안, 활성 레버의 반응은 강화의 고정 비율 - 1 일정에 코카인의 3 - S 주입 (0.23 mg/65 μL, IV)에 의해 강화됩니다. 주입 펌프 및 약물 전달의 활성화와 동시는 활성 레버 위에 자극 조명의 20의 활성화입니다. 이 20 S 라이트 프리젠 테이션 추가 활성 레버 응답 기록했지만 강화하지하는 동안 "시간 초과"기간에 해당합니다.
   8. 동물 3 - H 세션 당 50 혼합 최대 사용할 수 있습니다. 우리는 일상적으로 우리의 일을이 기준을 부과하고, 우리의 경험, 그것이 크게면 제거하지, 과다 복용으로 인한 사망 사건을 줄일 것으로 나타났습니다.
   9. 각 일일 세션이 끝날 때, 쥐가 '카테터는 헤파린 - 덱스 트로 오스 솔루션 0.2-0.3 ML로 플러시 아르 (섹션 2.2 참조)과 쥐들은 홈 케이지에 반환됩니다.
3. 의약품 - 무료 기간
   1. 칠일 최소 자신의 홈 케이지의 마지막 코카인 SA 세션 후, 쥐가는 (먹이, 일상적인 청소를 제외하고, 그리고 무게의 모니터링) 그대로 남아 있습니다.
4. 코카인 - 훈련된 행동의 멸종
   1. 쥐는 멸종 훈련 9시에서 10시까지 간의 operant 방으로으로 전송됩니다.
   2. 봄 튜브 어셈블리는 두개골 장착 정맥에 연결되어 있습니다.
   3. SA 교육에 대한 조건과 일치, 멸종 교육의 매일은 동물 활성 레버 철회와 operant 실에 배치되는 동안 5 분 새 환경 순응 기간 앞에 있습니다.
   4. 쥐 그런 다음 30 분 간격으로 구분하여, 넷 60 분 멸종 세션을 제공하고 있습니다. 각 60 분 세션은 교육 세션의 시작 (즉, 주택 조명 조명, 활성 레버의 확장, 그리고 활성 레버 위에 자극 빛을 30 초 조명)에서 발생하는 동일한 사건에 의해 시작됩니다. 세션 전반에 걸쳐, SA 교육 중에있었습니다 모든 조건이 해당 활성 레버 반응을 제외하고 (즉, 20 초 및 주입 펌프 3 - S 활성화를위한 자극 빛을 반응 우발 조명) 유지 코카인 혼합과 함께 더 이상 강화 아르 . 각 60 분 멸종 세션을 별도로 30 분 간격 동안, 활성 레버가 철회되고 집안 라이트는 소멸됩니다.
   5. 마지막 60 분 세션이 끝날 때, 쥐가 자신의 홈 케이지에 반환됩니다.
   6. 단계 3.4.1. 3.4.5 있습니다. 연속 3 일 동안 반복하고 있습니다.
5. footshock 스트레스 코카인 훈련된 행동의 복귀
   1. 쥐는 9시부터 10시까지 사이 operant 방으로 전송
   2. operant 실에 배치되는시, 봄 및 튜브 어셈블리는 두개골 장착 정맥에 연결되어 있습니다.
   3. 교육 및 멸종에 대한 조건과 일치, 5 분 새 환경 순응 기간 쥐가 활성 레버와 operant 실에 배치되는 동안 철회 제공됩니다.
   4. 쥐는 다음 멸종 단계 중에주는 사람에게 동일하게 30 분 간격으로 구분이 60 분 멸종 세션 (3.4.4을 참조하십시오.) 부여됩니다.
   5. 두 번째로 60 분 수업 후 이전에 활성 레버에 대한 반응의 총 개수가 15보다 적으면, 동물은 추가로 30 분 간격 후 복직에 대한 검사를받습니다. 이 30 분 간격에서 footshock 또는 가짜 footshock (예, 아니 footshock)은 (3.5.6을 참조하십시오.) 관리합니다. 활성 레버를 15 이하 반응의 기준은 두 번째 세션 후 달성되지 않을 경우, 추가적인 멸종 세션 (들)은 복직을 위해 테스트 이전에 주어집니다.
   6. 두 번째로 60 분 멸종 세션 (15 이하 반응의 멸종 기준을 수립하는 데 필요한 추가 60 분 멸종 세션 (S) 이후) 이후 10 분, 동물은 간헐적인 전기 footshock 응력의 20 분 (또는 사기에 노출되는 operant 챔버에 footshock). Footshock는 활성 레버가 철회되고 주택과 자극 광이 소멸하는 시간 동안 제공됩니다. Footshock 40 S (10-70의 범위)의 의미 간격으로 가변 시간 일정에 따라 배달됩니다. 각각의 충격은 0.9 mA의 강도에 전달하고, 기간이 0.5 S입니다. footshock 이러한 매개 변수는 광범위한 파일럿 작업을 기반으로footshock 노출의 최소 강도와 기간으로 추구하는 코카인의 안정적인 복귀를 확립하기 위해 우리가 실험실에서 실시. 이러한 매개 변수에서, 동물은 0.5의 충격을 재귀 점프 응답을 전시하고, 때때로 간단한 발성을 방출. 동물이 충격 기간에 걸쳐 관찰 있지만, 충격의 강도는 고통보다 발음이 흔적을 유발하기에 충분한 크기의 것이 아니다.
   7. 즉시 멸종 조건 (즉, 아래 footshock 세션의 다음과 같은 종료가, 활성 레버가 확장되고 쥐가 레버를 누르 수 있으며, 답변은 코카인과 철근 아니지만, 주입 펌프의 자극 조명 및 활성화의 조명으로 인해 계속 할 ). 시간이 기간은 복직을위한 시험으로 정의하고 기간이 일반적으로 1~3시간입니다. 대부분의 응답은 테스트 세션의 초기 부분 (최초 30 분 - 1 H)에서 발생하고, 이후 추가 연장 시험 기간 동안 소멸. 따라서, 1 H 테스트 긴 테스트 기간이 효과를보다 완벽하게 멸종 프로필을 제공하여, 복직 효과를 포착하기 위해 충분하다.
   8. 반복 측정 설계를 고용하면 각 쥐의는 footshock와 가짜 footshock 조건에서 테스트됩니다. 단계 3.5.1. 로 3.5.8는 후속 시험 당일 반복하고, 복직 (footshock 또는 가짜 footshock)에 대한 대체 시험은 실시됩니다.

4. 대표 결과 :

그림 1. 자기 관리 훈련, 멸종, 그리고 복귀 테스트 기간 동안 활성 및 비활성 레버스에서 활동화한 응답 프로필.

그림 1은 여기 설명된 실험 프로토콜의 다양한 단계에서 얻은 이들의 전형화한 operant 응답 프로파일을 제공합니다.

1. 액티브 레버 응답

1. 코카인 SA 교육. 그림 1 (왼쪽 패널)는 혼합 및 활성 레버 프레스의 총 수를 두 숫자를 포함하는 전형적인 마약 SA 교육 곡선을 보여줍니다. 쥐 일반적으로 동작이 설정되면 후속 세션을 통해 약물 섭취의 안정적인 속도를 (일반적으로 20 % 미만 사이의 세션 분산) 유지, 1-3 세션 내에서 코카인 SA를 취득합니다.
2. 코카인 - 훈련된 행동의 멸종. 그것은 멸종 1 일에, 응답은 처음이 아닌 철근 때, 활성 레버에 대한 응답의 총 수가 처음보다 높은 것을 (중간 패널) 그림 1에서 볼 수있다 훈련 단계 (소위 "멸종 버스트"에 해당)의 끝, 점차, 네 개의 세션을 통해 멸종, 감소 응답. 일 2 멸종의 3 (전날의 마지막 세션 동안 관찰되는 상대) 응답의 일부 복구 관찰 수 있지만, 응답은 일반적으로 일반적으로 멸종의 전날의 시작보다 적게, 그리고 멸종 그날 네 개의 세션을보다 빠르게 진행됩니다.
3. 코카인의 복귀가 추구. 그것은 간헐 footshock에 노출 20 분 이외의 철근 앞의 멸종 세션의 끝에 관찰되는 상대, 활성 레버에 대한 응답의 증가를 유도되는 그림 1 (오른쪽 패널)에서 볼 수 있습니다. Footshock은 또한 가짜 footshock가 시행되는 상황에서 관찰되는에 상대적으로 응답 증가를 유도. 따라서 footshock 스트레스에 의해 추구하는 코카인의 복귀가로 중 표현할 수 : 1) 멸종 세션에서 응답에 상대적 footshock에 노출 후 비 철근 반응의 증가 수, footshock 또는 이외의 강화 2) 증가하기 전에 번호 위장 footshock에 footshock 상대 후 반응.

2. 비활성 레버 응답

그것은 모두 실험 단계에 걸쳐, 비활성 레버와 관련된 매우 낮은 응답 수준이 있으며, 그림 1 (레드 라인)에서 볼 수 있습니다. 그러나,이 레버에 대한 응답에 겸손한 증가는 때로 footshock 스트레스 다음 노출을 관찰합니다. 에도 응답 이러한 증가가 발생하는 경우에, 응답 활성 레버의 증가는 비례 훨씬 커야하는 경향이있다.

토론

지난 몇 십년 동안, SA의 복직 절차의 3 개의 유사 콘텐츠는 실험실 쥐와 원숭이를 추구하는 약물의 복직을 연구하기 위해 개발되었습니다. 절차적 유사 정의 차이는 주로 약물 SA, 멸종, 그리고 테스트 세션 ¹ 당일 내에서 또는 다른 요일에 발생 여부를 관계. 우리가이 종이에 설명되어있는 절차는 일반적으로 멸종 및 테스트 세션에서 별도의 "내 사이"세션 변화, 약물 SA 매일 세션 동안 발생하기 때문에 (사이 세션 방식으로 즉,)로 불리는, 근데 멸종 그리고 테스트 당일 (즉, 시간 - 세션 방식으로) [예, ^{7, 9]에서} 발생합니다. 또는 "세션 사이"이른바 절차, 실험의 모든 단계가 순차적으로 발생 SA, 멸종, 그리고 시험 세션 (즉, 모든 단계는 세션 사이) 다른 일에 부여되는 등 ^{[예, 8, 10, 11].} 대조적으로, "세션 내에서"전체 절차에, SA 교육, 멸종, 그리고 테스트 세션은 모두 같은 일 이내에 [예 ^12]가 발생합니다.

복직 절차의 다른 유사 콘텐츠를 사용하고자하는 약물의 footshock 유도된 복귀의 보고서를이 출판하고 있지만, 우리는 멸종하고 테스트가 동일한에서 발생 때이 스트레스가 (적어도 코카인 SA의 역사를 가진 동물)을 가장 효과적으로 발견 일 (즉, "시간 사이에"세션 방식으로). 또한, 우리는 "세션 사이에"완전히를 사용하여 프로 시저를 추구하는 코카인의 신뢰성 footshock 유도된 복귀를 얻는 성공을했지만, 경우에만 동물 멸종하고 테스트하는 동안 실험 ⁸ 또는 적어도 전역 SA 실에서 보관되어있는 조건 하에서 ^13. 이 사이에 세션 접근, 현재 프로토콜에서 설명한 이상의 단점은, 그것이 훈련하고 한 번에 테스트할 수 과목의 수를 제한하고, 따라서, 데이터 수집의 효율성을 감소한다는 것입니다. 현재 프로토콜의 조건에서 동물의 한 그룹이 영원히 사라지지 수 있으며 주어진 시간에 테스트이지만, 더 큰 처리량은 한 주 단위로 쥐 두 그룹에 대한 SA 교육 단계의 시작 시간을 압도하여 얻을 수 있습니다. 두 번째 그룹 SA 훈련의 주 2 입력으로이 시나리오에서는 쥐의 첫 번째 그룹이 약물없는 단계를 입력할 수 있으며, 두 번째 그룹은 마약을하는 동안 이후, 멸종 및 시험은 첫 번째 그룹에서 실행 될 수 있습니다 무료 위상. 이러한 접근 방식은 자원의보다 효율적인 이용을 허용하는 매우 효과적인 그리고 신뢰할 수있는 footshock 유발 복직에 이르는 동안 데이터 수집의 속도를 가속.

중요한 것은, 우리 프로 시저에, 복직에 대해 이전에 약물 철근 행동과 테스트의 멸종은 마약 관련 단서의 존재에 발생합니다. 우리가 약물 관련 단서의 부재에서 멸종 훈련이나 테스트를 실시 적이 있지만, 그것은 (테스트 진화 단서의 부재에서 발생했을 때 스트레스가 사실에 복직을 유도에서 효과가있을 수 있습니다, 개인 통신을 기반으로, 우리의 이해는 적어도 코카인 SA의 역사를 가진 동물의 경우). 이 변수의 체계적 조사하고, 그것이 포즈 이론적 의미는 미래의 연구에 중요한 질문이다.

최종 절차적 요소가되는 보증의 댓글 복귀에 footshock 스트레스의 효과가 문맥의 조작에 매우 민감한 것으로 보인다는 점이다. 예를 들어, footshock의 스트레스가 마약 SA와 멸종이 발생하는 환경에서 시행하는 경우에는 추구하는 약물의 복직을 유도에서만 효과가있다, 즉, footshock이 소설의 맥락 속에서 스트레스에 노출이 발생하면 원하는 약물을 복원하지 않습니다, 복직 ^{14 일} 미치는 영향에 스트레스 및 약물 환경 사이의 중요한 상호 작용을 제안.

결론 footshock의 복직 절차에서이 논문에서 설명하는 것과 같은, 스트레스 및 약물 재발 사이의 관계를 지배하는 기본적인 행동 및 신경 생물학 메커니즘을 명료하게하다에 상당한 성공을 함께 사용되었습니다. 사실,이 절차는 약리 pretreatments 또는 특정의 연결 기판을 대상으로 neurochemical 조작을 수용할 수 있도록 수정하면 스트레스에 의해 추구 약물로 복직의 신경 생물학을 특성화를위한 강력한 도구로 검색할 수 있습니다.

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package		Med Associates, Inc.	MED-008-CT-B1
Deep extra tall MDF sound attenuating cubicle	Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component	Med Associates, Inc.	ENV-018MD
Standard modular test chamber with drug infusion top and waste pan	Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component	Med Associates, Inc.	ENV-008CT
Stainless steel grid floor	Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component	Med Associates, Inc.	ENV-005
House light, hooded, 28V	Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component	Med Associates, Inc.	ENV-215M
Stimulus light 1” white lens	Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component	Med Associates, Inc.	ENV-221M
Low profile retractable response lever	Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component	Med Associates, Inc.	ENV-112CM
SmartCtrl 8 Input/16 output package	Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component	Med Associates, Inc.	DIG-716P2
Single speed syringe pump, 3.33 RPM	Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component	Med Associates, Inc.	PHM-100
Rat self infusion package	Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component	Med Associates, Inc.	PHM-119B-23-D
Drug Delivery, Arm assembly	Basic Drug Self-Administration Test Package for Rat Package Component	Med Associates, Inc.	PHM-110-SAI
Square wave aversive stimulator	Footshock Stress Component	Med Associates, Inc.	ENV-414S
Patented quick disconnect harness for stainless steel grid floor	Footshock Stress Component	Med Associates, Inc.	ENV-005-QD
Shock output cable	Footshock Stress Component	Med Associates, Inc.	SG-219G-10
MED-PC IV Software	Software	Med Associates, Inc.	SOF-735