흩뿌려진의 제목 셀 캡슐화

요약

초록

프로토콜

NIH3T3 세포 준비 :

탈출을위한 A. 셀

1. 다음 세포, 세포 매체와 희석 1시 1분, 그리고 T75 플라스크에서 15 ML 팔콘 튜브로 전송 Trypsinize
2. , centrifuging하여 펠렛으로 세포를 스핀 다운 뜨는을 기음과 DPBS로 세포를 씻어
3. 다시 펠렛으로 세포를 스핀 다운 및 뜨는을 기음
4. 미디어 Resuspend 세포
5. hemocytometer (~ 200 T75 플라스크 당 X 10 ⁴ 셀 / ML)의 세포 밀도를 결정
6. 원심 분리기 세포 솔루션은 뜨는 대기음 및 세포 농도 변화에 대한 미디어의 적절한 금액에 resuspend

B. 세포 방출

1. 방출을 위해 사용하기 전에 소용돌이 세포
2. 주사기로 세포 솔루션을 200 μL를 전송
3. 펄스 발생기에 적절한 모드를 설정
   1. 꺼내기 한 방울 여러 방울을 위해 (파열), "E. 버"모드로 펄스 발생기를 설정
   2. 연속 비말의 방출 들어, "상식을 훨씬"모드로 펄스 발생기를 설정
4. 신호 설정 변경
   1. 5 V 및 LOL 0 V 및 확인 "LIM"LED가 켜져입니다 힐러리 : 높은 수준과 낮은 수준의 출력 전압을 설정
   2. 사각형 펄스로 신호를 설정
   3. ( "의무") 솔레노이드 밸브가 '졌 그나 "에 대한 값을 변경하거나 듀티 사이클을 변경하여 비말의 방출을 위해 열려있는 시간을 변경
   4. 'PER'에 대한 값을 변경하여 배출의 주파수를 변경
   5. "버"에 대한 값을 변경하여 버스트에 탈출 방울의 개수를 변경
5. 현미경으로 영상 준비 기판에 추출 세포 솔루션

C.의 스테 이닝

1. 0.5 μL calcein - AM 및 DPBS의 ML 당 2 μL ethidium의 homodimer로 염료 용액을 만들어
2. 염색 용액에 담가 준비 기판
3. 샘플 37 10 분 동안 부화 허용 ° 이미징하기 전에 C를

실험 검증

1. 니콘 이클립스 TE - 2000 U 형광 현미경에서
   1. 스팟 고급 소프트웨어 (진단 주식 회사)
   2. 데드 / 라이브 어세이

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자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Fluorescent Microscope		Nikon Instruments	Eclipse TE-2000 U
Solenoid valve cell ejector				Operation frequency: 1 KHz, 30psi, 50nl~0.5ul. 12V Valve Driver: 2.5 Amp drive current
5-Gallon Portable air tank		Coleman	Powermate CT5	Pressurized air: 30 PSI
Pressure regulators		Marsh Bellofram
Pulse Generator			HP8112A	Actuation frequency generation: 50 MHz
XYZ-stage		Newmark Systems		With Stepping motor: 6inch travel xy-stage(NLS4-6-25), 2.5inch travel z-stage(NLS4-2.5-25), 3axis controller(NSC-G3), 0.1um resolution
NIH 3T3	Cell-line			fibroblasts
Trypsin				0.05% solution
NIH 3T3 cell medium
DPBS	Buffer
T75				Tissue culture flasks
Plastic conical tubes				15 ml, for tissue culture