비 침습적 기관 내 삽관 마우스 폐의 병리학 및 생리학을 연구하는

요약

인간 폐 질환의 상태를 본뜬 모델의 사용은 특정 질환의 병태 생리학 및 / 또는 병인을 연구 및 치료 적 개입을 개발에 중요하다. 여기에 직접 마우스의 폐에 외인성 물질을 제공 할 수있는 비 침습적 인 기관 내 삽관 방법이 제시된다.

초록

인간 폐 질환의 상태를 본뜬 모델의 사용은 특정 질환의 병태 생리학 및 / 또는 병인을 연구 및 치료 적 개입을 개발에 중요하다. 함께 유전 정보의 광대 한 양의 녹아웃 및 유전자 변형 파생 상품의 증가 가용성, 마우스는 폐 질환의 병리 생리학의 기초가되는 분자 메커니즘을 연구하는 가장 좋은 모델 중 하나를 제공합니다. 흡입, 비강 내 점적, 기관 내 점안 및 기관 내 삽관 마우스 폐에 그 자료를 관리 할 수​​있는 연구자들에 의해 가장 널리 사용되는 기술이다. 연구의 목적에 따라 각각의 기술에 대한 장점과 단점이 있습니다. 여기에 직접 마우스의 폐에 외인성 물질을 제공 할 수있는 비 침습적 인 기관 내 삽관 방법이 제시된다. 이 기술은 폐 섬유증을 연구하는 모델로 마우스의 폐에 블레오 마이신을 관리하기 위해 적용되었다. </ P>

서문

폐는 많은 파괴적인 질병은 일반적으로 진단 기관이다. 그 중에서도, 폐암은 남성과 여성 모두에서 두 번째로 가장 암 진단, 암 사망의 가장 흔한 원인이다. 또한 폐기종과 만성 기관지염으로 알려진 만성 폐쇄성 폐 질환은 매우 심각한 질환과 미국에서 사망의 세 번째 주요 원인이다. 2011 년, 그것은 25900000 미국인이 18 세 미만의 710 만 어린이를 포함, 천식을 한 것으로 추정되었다. 천식은 15 일 (미국 폐 협회, 세 미만의 어린이들에게 입원의 세 번째 주요 원인이다 http://www.lung.org ). 이러한 파괴적인 질병과 그 기본 메커니즘의 병태 생리 및 / 또는 원인을 연구하기 위해, 정확한 모델의 사용은 폐 관심을 다양한 재료의 편리하고 비 침습적 인 관리와 함께 중요합니다. 쥐에게 최고의 모델 중 하나를 제공때문에 녹아웃 및 형질 전환 마우스 및 사용 가능한 유전 정보의 광대 한 양의 증가 가용성의 병리 및 폐 질환의 생리의 기초가되는 분자 메커니즘을 연구.

다양한 방법 흡입, 비강 내 점적, 기관 내 점안 및 기관 내 삽관 ^1-4를 포함하여 마우스의 폐에 그 자료를 제공하기 위해 다른 설정에서 수사관들에 의해 사용되어왔다. 이를 수행하기 다소 어려운 것으로 간주되기 때문에 후자의 과정은 일상적으로 사용되지 않았다. 여기에 기술 기관 내 삽관 법은 유전자 발현 패턴, 병리 및 / 또는 폐 ^5의 생리에 전달 물질의 효과를 연구하기 위해 마우스의 폐에 대한 관심의 자료를 제공 할 수있는 비 침습적 간단하고 빠른 방법입니다. 이 기술은 전체 폐에 외인성 물질의 전달을 보장하고 생존 수술을 포함하지 않으며, 따라서 likel 것Y는 기관 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인 된 것이어야합니다.

프로토콜

다음 프로토콜은 마우스의 폐에 그 자료를 제공 할 수있는 비 침습적, 간단하고 빠른 방법을 설명합니다. 이 절차는 국립 암 연구소 동물 관리 및 사용위원회에 의해 승인되었습니다.

1. 마취

1. 먼저, 케타민 (ketamine)과 자일 라진 (각각 100 ㎎ / kg 체중 및 10 ㎎ / kg 체중)의 혼합물을 사용하여 마우스를 마취. 이 ACUC 마취 및 복용량을 권장합니다. 이 금액으로, 마우스는 적어도 ~ 20 분에 대한 의식이 있습니다.
2. 마취 동안 눈의 건조를 방지하기 위하여 마우스 눈 수의사 연고를 적용한다.
3. 몇 분 후, 의식을 확인하기 위해 마우스의 다리를 꼬집어. 일단 의식 확인, ~ 60 °로 각도 삽관 스탠드에 마우스를 놓고 받침대의 상단에있는 작은 고무 밴드를 통해 상부 앞니를 후킹하여 제자리에 고정.

2. 기관 내 삽관

1. 부드럽게 Q-팁을 사용하여 한쪽으로 마우스의 혀를 철회.
2. BioLITE 삽관 조명 시스템을 사용하는 경우 후두가 광섬유 라이트 가이드의 도움으로 가시화 될 때까지주의 깊게 삽관 시스템을 삽입합니다.
3. 후두개와 조각으로 부서져 연골이 가시화되면 카테터의 적절한 길이가 삽입 될 때까지, 후두개에와 조각으로 부서져 연골 사이에 섬유를 삽입하고 사전.

참고 : 삽입되는 카테터의 적절한 길이를 얻기 위해서는, 처음에 사전에 유사한 크기의 연습 마우스 (도 1)를 사용하여 입과 기관지 분기점 사이의 길이를 측정한다. 길이는 크게 마우스의 크기에 따라 달라집니다. 카테터의 삽입은 분기점 위에 중지해야합니다 (~ 체중 25 ~ G와 마우스 1.5 cm). 이 삽관 물질이 모든 엽 (叶)에 갈 것이라는 점을 보증한다. 적어도 50 연습 마이크전자 기술에 숙달 될 수있는 삽관 법을 수행하는 사람을 위해 요구 될 수있다 (능숙은 삽관의 성공률이 95 % 이상임을 의미합니다).

4. 카테터가 삽입되면, 신속하게 동물이 일반적으로 숨을 쉴 수 있도록 카테터에서 광섬유 라이트 가이드를 제거합니다. 삽관 조명 시스템을 사용하지 않을 경우 직접 바와 같이 카테터를 삽입한다.
5. 카테터의 관심 물질을 함유하는 용액을 추가. 용액을 즉시 첨가 한 후 폐에 흡입되어 있는지 확인합니다. ~에 대한 쉰 마이크로 리터는 25g의 마우스 체중은 일상적으로 사용됩니다.

3. 동물 복구

1. 즉시 솔루션이 폐에 흡입 될 때 받침대에서 마우스를 내려, 원래의 케이지에 다시 넣어.
2. 이 이동 시작할 때까지 마우스를 관찰합니다.
3. 일단 마우스가 좋은 상태에 있음을 확인, 랙에 케이지를 반환합니다.

결과

처음에는 녹색으로 염색 한 솔루션은 연습을 위해 마우스를 삽관하는 데 사용되었다. 폐는 색이 폐 (그림 2)에 배포 된 방법을 균일하게 조사 할 삽관 후 즉시 절제했다. 이 기술은 C57BL / 6 마​​우스를 이용하여 블레오 마이신 유발 폐 섬유증을 연구하기 위해 적용되었다. 마우스가 intratracheally 제어 나중에 부검 삼주로 블레오 마이신 또는 식염수 1.2 U / kg으로 삽관 때, 마우스는 조직...

토론

여기에 설명 된 기관 내 삽관은 균등하게 마우스의 폐에 그 자료를 제공 할 수있는 간단하면서도 우수한 비 침습적 인 방법입니다. 이 방법은 폐의 생리 및 / 또는 병리에서 관리 물질의 효과 및 / 또는 역할의 연구를 할 수 있습니다. 관리되는 재료는 사이토 카인, 또는 생체 이물 화학 / 의약품, 발암 물질, 오염 물질, 알레르기, 또는 다양한 인간의 질병 ^{6-10 공부를위한} 모델을 나타낼 수있...

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
KetaVed	Vedco		Ketamine
AnaSed Injection 20 mg	LLOYD		Xylazine
BioLite Stand	Braintree Scientific	RIS100	For mice
BioLite Intubation Illumination System	Braintree Scientific	BIO MI-KIT	For mice
22 G, 1 inch i.v. catheter	Terumo	SR-OX2225CA	For mice below 30 g. Catheter is used only for the case where the Intubation Illumination System is not used.
20 G, 1 inch i.v. catheter	Terumo	SR-OX2025CA	For mice over 30 g. Catheter is used only for the case where the Intubation Illumination System is not used.