마우스의 전신과 간장 혈 역동 학적 파라미터의 모니터링

요약

이 영화는 생쥐의 조직 및 간 혈류 역학을 취득하는 방법을 보여줍니다. 전체의 모니터링은 중요한 파라미터, 전신 혈압, 중심 정맥압, 간동맥 유량 및 포털 정맥 압력뿐만 아니라 마우스에서 포털 유량의 획득을 포함한다.

초록

실험적 연구의 마우스 모델의 사용은 생리학 및 병리학 적 간 장해에 대한 막대한 연구 중요하다. 그러나, 마우스의 작은 크기로, 마우스에 적합한 수술 모니터링 절차의 기술적 상세 설명은 거의 없었다. 이전에 우리는 쥐에 대한 혈역학 적 매개 변수를 얻을 수있는 모니터링 절차를보고있다. 이제, 우리는 생쥐에서 체계적이고 간 혈역학 적 파라미터를 획득하는 절차, 쥐보다 작은 열이 배 종 적응. 이 필름은 동물의 계측뿐만 아니라 마우스에서 전신성 및 간 혈류 역학을 평가하는 데 필요한 데이터 수집 프로세스를 설명한다. 체온, 호흡과 심장 박동을 포함하여 중요한 매개 변수는 전체 과정에 걸쳐 기록되었다. 전신 혈역학은 경동맥 동맥 압력 (CAP) 및 중심 정맥압 (CVP)로 구성되어 있습니다. 간 관류 매개 포털 V를 포함EIN 압력 (PVP), 포털 유량뿐만 아니라 간동맥 (표 1)의 유량. 계측 및 데이터 수집은 일반 값은 1.5 시간 이내에 완료되었다 기록합니다. 전신 및 간 혈역학이 절차를 수행하는 동안 정상 범위 내에서 유지했다.

이 절차는 도전 만 가능하다. 우리는 이미 실험을 클램핑 정상 마우스뿐만 아니라 70 % 부분 간 절제술시 간 엽에서 간 혈류 역학을 평가하기 위해이 절차를 적용했습니다. 절제 (N = 20), 절제 (6.87 ± 2.39 CMH ₂ O) 이전보다 유의하게 높았다 _CMH이 O (P <0.05) 11.41 ± 2.94 후 PVP를 의미한다. 실험 클램핑 간 로브의 결과는이 모니터링 절차는 포털 압력과 포털 유량의 작은 변화를 검출하기위한 민감하고 적합한 것으로 나타났다. 결론적으로,이 절차는 숙련 된 마이크로 외과 의사의 손에 신뢰할 수 있지만 특급으로 제한해야eriments 마우스는 절대적으로 어디 필요합니다.

서문

이 동영상의 전반적인 목적은 전신 및 간 혈역학 파라미터를 획득하기위한 실시간 모니터링 절차를 입증하는 것이었다. 이 절차를 개발하기위한 이론적 근거는 체계적이고 간 혈류 역학적 매개 변수를 얻는 필요로 쥐 실험 개입에 대한 가장 큰 값입니다. 절차는 부분 간 절제술, 포털 정맥 결찰 및 간 이식으로, 순진한 동물과 중 또는 주어진 간담 담도 실험적인 수술 적 치료 후 적용 할 수 있습니다.

설치류 간 혈역학 데이터의 수집은 제안 침략 절차가 필요합니다. 간 관류 비 침습적으로 얻을 수 없다. 그러나, 전신 혈압의 획득을위한 대안이있다. 이러한 꼬리 커프 기법 ^8로서 모니터링 기술은 래트 및 마우스 모두에서 혈압을 획득에 이용되어왔다. 꼬리 커프 기술은 consci에 적용 할 수 있습니다OU에 동물. 혈압을 측정 할 때, 동물은 특정 불편한 위치에 배치되어 고정 될 필요가있다. 꼬리 즉석 기기의 사용 설명서에서, 제조자는 마우스 긴장되고 꼬리의 순환을 감소 할 수있는 스트레스를 수 있다는 것을 말한다. 그 상황에서, 꼬리에서 취득한 말초 혈압 중앙 혈압보다 훨씬 낮을 수있다.

전체 모니터링 절차는 데이터 수집을위한 일련의 센서를 이용하여 통합 된 다중 - 채널 모니터를 수행 하였다. 혈압 현미경 조심 미세 해부 및 노출 후 각 용기 내에 카테터를 삽입하여 얻었다. 유량은 각 용기 주위 천음속 유동 탐침을 배치하여 측정 하였다.

우리는 이미 자장에 비교 생리 학적 혈역학 데이터의 포괄적 인 일련의 결과로 쥐를 위해 유사한 수술 모니터링 절차를보고다른 그룹 ^{7에서보고} 된 전자 데이터입니다. 따라서 우리는 마우스, 쥐보다 작은 10 배 종에 적응하기위한 좋은 기초를 표현하기 위해이 절차를 고려했다. 쥐 절차 주요 차이점은 혈압 데이터 대신에 유체 도관 기반 시스템을 취득 밀라 카테터의 사용이다. 데이터 흐름은 또한 천음속 유동 프로브 대응 쥐 혈관보다 단지 더 작은 것들로 획득 하였다.

때문에 동물의 작은 크기로, 마우스의 계측 기술적 도전하지만 가능하다. 계측이 완료되면 미리 정의 된 설정 파일이 사용될 수 있기 때문에, 데이터 수집 및 기본 수명 데이터의 분석은 간단하다. 설정 파일은 일련의 실험의 시작시에 한 번만 정의 될 저장 및 모든 후속 실험에 사용될 수있다.

지금까지 우리는 급성 실험에서 간 혈류 역학적 효과를 평가하기 위해이 절차를 적용했다. 우리는 CA를 측정P와 PVP 전에 즉시 70 % 부분 간 절제술 (PH) 후 및 / 드 클램핑 실험을 클램핑한다. 우리는 간 질량의 완전히 90 %를 나타내는 질량 중간의 개요 (5 분) 클램핑과 왼쪽 측면 엽 다음에 간 20 %를 나타내는 우엽의 간담 - 십이지장 인대를 고정. 드 - 클램핑은 중간과 왼쪽 측면 로브를 해제 한 다음 오른쪽 엽에서 클램프를 해제와 함께 시작했다. 클램핑 최대 시간은 10 분 미만이었다.

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프로토콜

주택 및 수행 모든 절차는 독일어 동물 복지 규정에 따라했다.

1 센서 교정 (센서 교정에 대한 제조업체의 지침에 따라)

1.1) 밀라 카테터 교정. 30 분 전에 균형을 위해 (제로) 및 교정에 대한 멸균 생리 식염수에 카테터의 끝을 미리 담가.

1. 브리지 앰프의 millar1 채널에 밀라 센서를 연결하고 물 열에 밀라 센서 팁을 삽입합니다.
2. 0 CMH ₂ O.에 물 열 값을 설정합니다 데이터 분석 소프트웨어 창에서 증폭 브리지를 선택하고 그것을 제로. 기준값 0 CMH ₂ O가 설정 될 수있다.
3. 20 CMH ₂ O.에 물 열 값을 설정합니다 데이터 분석 소프트웨어 창 진행을 실행하고 중지합니다. 증폭 브리지의 창에서 "단위"를 _선택,이 O에 따라 0과 20 CMH의 기준을 설정합니다. 2 O.
4. 동일한 방식으로 CAP 측정 millar2를 보정 (베이스 라인이 90, 110 _CMH이 O을 설정).

1.2) 혈류 프로브 교정

1. 탈 이온수로 프로브를 넣습니다. 천음속 흐름 프로브 시스템과 프로브를 연결합니다.
2. 데이터 분석 소프트웨어 창에서 입력이 플로우 프로브를 제로로 증폭 선택. 단위를 조정합니다.
3. "테스트 채널"신호를 수집하기 위해 버튼을 누르면 : 신호가 3-4 막대가있는 경우,이 신호가 좋은 것을 의미한다. 좋은 신호를 얻는 경우에, 절차는 계속 될 수있다.
4. 값이 교정되었는지의 여부를 "제로 채널"및 규모의 채널을보고 버튼을 누릅니다.
5. 나중에 측정 용 "측정 채널"에있는 버튼을 누릅니다.

2 수술을 위해 마우스를 준비합니다

1. 유도 챔버에 마우스를 넣고 2 % 이소 플루 란으로 마취하고 마우스0.3 ㎖ / 분의 산소. 마우스의 발가락 핀치 금단 휘어진이 존재하지 않는 경우는 연산이 수행 될 수있다.
2. 왼쪽 목과 복부를 포함 외과 영역의 털을 면도.
3. 작업 테이블에 마우스를 놓고 테이프를 사용하여 고정한다. 작업 기간 동안 건조를 방지하기 위해 눈에 수의사 연고를 사용합니다.
4. 목의 동작 필드의 최적의 노출을 목 아래에 거즈 쿠션을 배치합니다.
5. 작업 필드를 소독 만 열어 수술 부위를 떠나 마우스를 충당하기 위해 멸균 거즈를 배치합니다.

3 바이탈 파라미터 측정

1. 피하 마우스의 발에 ECG 바늘을 삽입합니다.
2. 마우스의 뒷면에서 호흡 센서를 놓습니다.
3. 마우스의 직장에 온도 프로브를 놓습니다.
4. 기록 온도, ECG 및 데이터 분석 소프트웨어에 마우스 호흡.

S에 대한 4 목 운영ystemic 심장 혈관 모니터링

4.1) 선박 해부

1. 목의 중간 라인, 쇄골의 중간 점, 하악의 각도를 확인합니다.
2. 중간 라인의 왼쪽에 0.5cm 정도입니다 쇄골의 중간 지점에 하악의 각도에서 2cm 세로 절개를합니다.
3. , 악하선을 해부 뒤집 식염수 적신 거즈로 덮어.
4. , 경정맥을 확인을 해부하고 나중에 결찰 및 고정 용 정맥에서 세 6-0 실크 봉합사를 배치합니다.
5. , 목 빗근 근육을 확인 digastric 근육의 omohyoid 후방 배의 우수한 배에서 분리하고, 경동맥 쉽게 노출 트랙터로 당깁니다.
6. 경동맥을 해부하고 나중에 결찰 및 고정 용 동맥에서 세 6-0 실크 봉합사를 배치합니다.

4.2) 경동맥 혈류 측정

1. 천음속 배치, 경동맥 주위 프로빙 안정을 유지하고, 초음파 겔 또는 식염수를 사용하여 접촉을 최적화.
2. 데이터 분석 소프트웨어를 사용 천음속 장치의 작은 스크린에 표시된 바와 경동맥 기록 혈류 속도
3. 측정을 마친 후 프로브를 제거

4.3) 경동맥 압력 측정 (CAP)

1. 경동맥을 결찰 말단부 및 근위 단부 클램프.
2. 경동맥 주변이 고정 봉합을 놓습니다. 숙박 봉합에 10-0 prolene을 사용합니다.
3. 선박의 앞쪽 벽에 작은 절개를합니다.
4. 밀라 카테터를 삽입하고 사전 배치 봉합사로 고정한다.
5. 데이터 분석 소프트웨어의 CAP를 기록합니다.

4.4) 경정맥 혈류 측정

1. 경정맥 리프트 및 유량을 측정하는 유량 천음속 프로브를 배치했다.
2. 데이터 분석 소프트웨어의 유량을 기록한다.

4.5) 중심 정맥 압력 측정 (CVP)

1. 경정맥의 근위 단부 클램프와 선단부를 결찰.
2. 선박의 앞쪽 벽에 microscissors를 사용하여 작은 절개를 잘라.
3. 유체 가득한 카테터를 삽입하고 사전 배치 봉합 라인을 수정합니다.
4. 데이터 분석 소프트웨어의 CVP를 기록합니다.

간 혈류 역학의 취득을위한 5 복부 운영

5.1) 선박 식별

1. 복부에 횡 절개를합니다.
2. 왼쪽으로 장을 Eventerate 젖은 거즈 커버.
3. 하대 정맥, 문맥, 간동맥 적절한 간동맥을 확인합니다.
4. 전체 모니터링 절차를 수행하는 동안 복부와 장마다 5 분의 표면에 약간의 따뜻한 식염수를 삭제합니다.

포털 혈류 5.2) 측정

1. 문맥을 해부하다.
2. 플로우 프로브를 배치 할 때 용기의 승강을 용이하게하기 위해 문맥 하에서 6-0 실크를 배치했다.
3. 문맥 주위 천음속 유동 탐침을 놓고 그 혈류 속도를 측정한다.
4. 문맥의 혈류 속도를 기록한다.

일반적인 간동맥의 흐름 5.3) 측정

1. 조심스럽게 간동맥을 해부하다.
2. 선박의 해제를 용이하게하기 위해 혈관 주위에 한 6-0 실크 봉합사를 놓습니다.
3. 동맥 주위의 흐름 프로브를 놓습니다.
4. 그것의 혈류량을 측정하고 데이터를 획득.

문맥 압력 5.4) 측정 (PVP)

1. 바로 포털 정맥에 배수 몇 가지 측면 분기 장간막 정맥의 한 지점을 선택합니다.
2. 선택된 장간막 정맥의 선단부를 결찰. 결찰이 장 관에 가까운 있는지 확인합니다. 작은 가지를 결찰
3. 이 F를 배치정맥 주위에 6-0 prolene을을 사용하여 봉합을 ixing. 이 절차의 핵심은 혈관을 결찰 할 때 장간막 동맥에 손이 닿지 않도록하는 것입니다.
4. 문맥의 근위 단부 클램프.
5. 10-0 prolene을을 사용하여이 숙박 봉합을 놓습니다. 숙박 봉합이 잘 장간막 정맥의 혈관 벽을 통과해야하기 때문에 약간의 출혈이 발생합니다.
6. 45도 각도로 비스듬하게 microscissor를 사용하여 정맥에 작은 절개를합니다.
7. 포털 정맥에 장간막 정맥을 통해 밀라 카테터를 삽입하고 그것을 해결
8. 간문맥의 압력을 기록한다. 프로 시저의 끝에서, 마취 하에서 일어난 과다 출혈로 생쥐를 희생.

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결과

이러한 호흡과 심장 박동으로 마우스의 중요한 매개 변수는 분명히 쥐보다 훨씬 더 높다. 평균 전신 혈압과 경정맥 압력은 쥐 값과 유사한 인간 데이터에도 유사하다.

간 혈류 역학 데이터는 분명히 다르다. 우리는 8 생쥐에서 정상 값을 얻을. 정상 마우스에서 포털 혈류는 1.6-2.3 ㎖ / 분 사이이었다. 간동맥에 흐름은 0.10에서 0.35 ㎖ / 분였다. 정상 동물 간문맥 압력은 8.09 ± 2.4...

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토론

간 혈류 역학의 모니터링은 간 장학 및 간담도 수술에서 중요한 연구 도구입니다. 간 혈역학 데이터 취득 순환계에 간담 절차의 효과를 특성화하는 데 도움. 혈관 활성 약물을 평가하는 연구에서 필요에 따라 간 혈역학 데이터의 수집은, 예를 들면 포털 압력과 포털 흐름에 영향을 미치는 약물의 효과를 연구 할 필요가있다.

작은 크기에도 불구하고, 전신 중요한 매개 ...

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자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
PowerLab 16/30	ADInstruments	PL3516
Quad Bridge Amp	ADInstruments	FE224	Bridge amplifier
Animal Bio Amp	ADInstruments	FE136
Needle Electrodes for FE136 (3 pk)	ADInstruments	MLA1213
Perivascular Flowmeter Module	Transonic	TS420
Flowprobe MA0.5PSB/MA1PSB	Transonic	MA0.5PSB/MA1PSB
SPR-1000 Mouse Pressure Catheter	Millar instruments	841-0001
fluid filled catheter	Terumo	SR+DU2619PX	26G, 0.64×19mm
micro scissors	F·S·L	No. 14058-09
micro serrefine	F·S·L	No.18055-05
Micro clamps applicator	F·S·L	No. 18057-14
Straight micro forceps	F·S·L	No. 00632-11
Curved micro forceps	F·S·L	No. 00649-11
needle-holder	F·S·L	No. 12061-01
6-0 silk	ethicon
6-0 prolene	ethicon
7-0 prolene	ethicon
10-0 prolene	ethicon
Tail cut-off device	Kent Scientific		www.kentscientific.com
LabChart7	ADInstruments		data  analysis software