빠른 분자 탐지 및 인플루엔자 바이러스 A와 B의 차별화

요약

우리는 분자 기반 인플루엔자 A, 신속하고 B 분석에 대해 설명합니다. 인플루엔자 분석은 분자 표지 프로브와 표적 탐지 뒤에 인플루엔자 특이 프라이머를 등온 증폭을 이용하여 15 분 이내에 각 대상을 감지합니다. 인플루엔자 A와 B의 분석은 사용자 친화적이고 수행 할 최소한의 실습 시간이 필요합니다.

초록

인플루엔자는 인간 인플루엔자 바이러스 A 및 B에 의한 전염성 호흡기 질환이며 질병률과 사망률 매년 상당한시킨다. 인플루엔자 A 및 B의 분석은 제 CLIA - 면제 분자 빠른 감기 시험 유효했다. 인플루엔자 A와 B 테스트는 분자 표지 프로브와 표적 탐지 뒤에 인플루엔자 특이 프라이머를 등온 증폭을 사용하여 작동합니다. 여기에, 냉동에 인플루엔자 (A)의 성능과 B의 분석은, 호흡 패널 분석 비교 하였다 표본 바이러스 수송 배지 (VTM)에 저장된 비 인두 면봉 (NPS)를 보관.

인플루엔자 A 및 B 시험의 성능은 호흡 패널 기준있어서 결과를 비교함으로써 평가 하였다. 총 인플루엔자 바이러스 A에 대한 민감도는 67.5 % (95 % CI (CI), 56.6-78.5)이었고, 특이도는 86.9 % (CI, 71.0-100)를했다. 인플루엔자 바이러스 B 테스트에 대한 민감도 및 특이도는 90.2 %였다 (CI, 68.5-100각각)와 98.8 % (CI, 68.5-100).

이 시스템은 완벽하게 통합 된, 폐쇄, 소형 풋 프린트 시스템에서 실행되는 다른 현재 사용 가능한 분자 분석 및 간단한, 피펫없는 절차보다 훨씬 짧은 테스트 시간의 이점이있다. 전반적으로,이 연구에서 평가 된 인플루엔자 A와 B의 분석은 현장 진료 신속 인플루엔자 진단 검사의 역할을 할 가능성이있다.

서문

인플루엔자 바이러스 감염은 질병률과 사망률 매년 ^{1, 2, 3} 상당량 초래한다. 복잡하지 않은 인플루엔자는 발열, 근육통, 두통, 비 생산성 기침 ^{4, 5로} 헌법과 호흡기 증상을 특징으로한다. 기본 동반 질환과 이전 개인, 어린이, 면역 저하 환자, 환자는 폐렴, 심근염, 중추 신경계 질환 또는 사망 ^{6, 7과} 같은 심각한 합병증에 대한 높은 위험이 있습니다.

인플루엔자 감염은 질병 심각도와 길이 ^8을 줄일 수 있습니다 증상 발현 48 시간 이내에 항 바이러스 치료의 메시지 관리에 다른 호흡기 바이러스에서 유일하다. 인플루엔자의 신속한 식별도있다불필요한 항생제 ^{(9) (10)의} 사용을 줄이기 위해 도시. 또한, 인플루엔자 감염 입원 환자는 적절한 감염 관리 예방 조치와 격리 된 방에 배치해야합니다. 임상 인플루엔자 구별하기 그러나, 비 인플루엔자 바이러스로 인한 호흡기 질환이 어려울 수있다. 이러한 이유로, 인플루엔자 신속하고 정확한 진단 시험은 임상 환자의 관리를 위해 매우 중요하다.

여러 분석은 검출 및 인플루엔자 바이러스의 식별을 위해 사용할 수 있습니다. 그들이 사용하고, 15 분 ^{11 12} 30 내 결과를 제공하는 간단한 때문에 신속한 인플루엔자 항원 검출 검사 (RIDTs)은 광범위 치료 시점 시험으로 임상에서 사용된다; 그러나, 그 감도가 크게 (10-80%) 제조사 및 인구에 따라 시험되는 변화와 인플루엔자 타입 subtyPE ^{13, 14, 15.} 직접 형광 분석법 (DFAS)는 RIDTs 위에 우수한 감도를 제공하지만, 처리 시간이 더 (~ 3 시간)이며, 숙련 기술자 ^{(16), (17)에} 의해 완료되어야한다. 바이러스 성 문화는 인플루엔자 진단을위한 황금 표준되었습니다 모두 RIDTs 및 DFAS ¹⁸ 감도를 향상되었습니다. 그러나, 인플루엔자 바이러스 성 문화는 환자 관리 ¹⁹ 원조에 자사의 유틸리티를 감소, 완료 2-14 D에서 걸릴 수 있습니다. 마지막으로, 핵산 증폭 검사 (NAAT)는 인플루엔자 진단에 새로운 골드 표준으로 배양 기술을 대체하고있다. NAAT는 몇 시간 인플루엔자를 검출하는 가장 큰 감도를 갖는 것으로 간주된다. 그러나 NAAT 가장 비싼 분석하고 ^5를 수행하는 특수 장비 및 기술자가 필요 ^{20, 21, 22, 23, 24, 25.}

여기에 설명 된 인플루엔자 A와 B 분석은 쉽게 사용할 수있는 첫 번째 CLIA-면제 분자 빠른 독감 테스트입니다. 이 분석은 분자 표지 프로브와 표적 탐지 뒤에 인플루엔자 특이 적 프라이머와 등온 증폭을 사용하는 칼자국을내는 효소 증폭 반응 (NEAR)을 이용하여 작동합니다. 이 분석은, B에서 인플루엔자 A 차별화 설정하고 하나의 샘플을 처리하는 데 2 ​​분을 필요로하며, 완료하는 데 15 분 총이 필요합니다.

여기, 우리는 인플루엔자 A & B 분석을위한 프로토콜을 제시한다. 또, 샘플 데이터 (바이러스 전송 매체에 저장 보관 된 시편 인두 면봉 (NPS)의 상기 인플루엔자 A 및 B의 성능 분석을 비교 VT 세트 제공다른 호흡기 병원체 패널 분석에 M).

프로토콜

윤리 선언문 : 사용 왼쪽 위에 임상 검체 승인 기념 슬로안 케터링 암 센터 임상 시험 심사위원회의 가이드 라인을 준수합니다.

1. 분석을 실행하기 전에

참고 : 인플루엔자 A와 B의 분석은 비 인두 면봉 표본과 바이러스 성 전송 매체에 저장 인두 면봉 승인. 면봉은 키트에 포함되어 있으며 최적의 성능을 위해 사용되어야한다. 그러나, 레이온, 발포체, 또는 폴리 에스테르 솜 비강 면봉 또한 비강 면봉 샘플을 수집하기 위해 사용될 수있다 플록.

1. 비강 면봉 샘플을 수집하려면, 가장 눈에 띄는 배수가 또는 가장 혼잡 콧 구멍에 면봉을 삽입합니다. 저항이 충족 될 때까지 부드럽게 회전으로, 콧 구멍에 면봉을 누르고 천천히 콧 구멍에서 제거하기 전에 비강 벽에 여러 번 회전합니다. 면봉을 저장하고 바이러스 전송 매체 (VTM) 3 ㎖를 포함하는 유리 병에서 그들을 수송.
   참고 :주의 깊은 관심 appropr하기늦었 표본 수집은 잘못된 결과를 얻을 수 있습니다 부적절한 표본 컬렉션으로주의해야한다.
   참고 : 면봉 표본이 수집 한 후 가능한 한 빨리 테스트해야합니다. 단, 최대 2 시간 동안 실온에서 저장 또는 검사가 바로 사용할 수없는 경우에는 최대 24 시간 동안 2-8 ℃로 냉각 될 수있다. 갓 수집 된 표본은 최적의 테스트 성능에 이상적이다. 부적절한 시료 처리, 저장 및 / 또는 전송 잘못된 결과를 산출 할 수있다.
   참고 : 예방 조치로,이 테스트를 수행하는 개인 표본을 처리 할 때 보편적 인 예방 조치를 수행하여 잠재적으로 감염 모든 표본을 처리해야합니다.
2. 시험 전에 실온에 모든 샘플을 가져와.
   주 : 모든 시험 성분을 하나만 사용하기위한 다수의 테스트를 수행하는 데 사용되어서는 안된다. 다른 로트 번호의 키트 구성 요소를 함께 사용하지 마십시오. 자신의 유효 기간이지나 키트 시약을 사용하지 마십시오.
3. ROO에 파란색 샘플 수신기를 가져와시험 전에 m 온도. 오렌지 시험 기재를 실온으로 가온 할 필요없이 테스트 될 수있다.
4. 때까지 즉시 사용하기 전에 호 일 포장에있는 모든 시험편을 둡니다. 악기의 측면에있는 전원 버튼을 눌러 기기를 켭니다. 사용자 ID 입력하고 Enter 키를 누릅니다 'OK를.'

2. 테스트 실행

1. 테스트 프로세스를 시작하려면, 기기 화면에 '테스트 실행'을 누릅니다. 온 스크린 키보드 또는 바코드 스캐너를 눌러 사용하여 환자 ID를 입력 후 확인을. ' 뚜껑을 열고 오렌지 시험베이스 홀더에 오렌지 시험베이스를 삽입합니다.
2. 정확한 테스트가 화면을 누릅니다에 표시되어 있는지 확인 'OK.' 파란색 샘플 수신기 홀더에 파란색 샘플 수신기를 삽입합니다.
   참고 :이 올바른 작동 온도에 도달 용출 버퍼를 방지하고 테스트 성능에 영향을 미칠 수 있으므로 기기에 배치하기 전에 샘플 수신기를 열지 마십시오.
3. 샘플 수신기가 준비가 될 때까지 기다립니다. 악기에 연결되면, 호일 씰을 제거하고 샘플 수신기로 시험 할 환자 면봉을 배치합니다.
   참고 : 호일을 제거 할 때 제자리에 남아 있는지 확인하기 위해 샘플 수신기의 가장자리에 두 손가락을 놓습니다.
4. 적극적으로는 면봉의 표본을 제거하는 데 도움을 혼합으로 샘플 수신기가 측면에 면봉 머리를 누르면 10 초 동안 액체에 면봉을 섞는다. 를 눌러 '확인'을 진행한다. 바이러스 운반 매체에 저장된 테스트 면봉은 10 초 동안 와동 VTM 경우 샘플 수신기 200 μL를 추가한다.
5. 파란색 샘플 수신기에 흰색 전송 카트리지를 누릅니다. 주황색 표시등이 상승 할 때까지 샘플 수신기 눌러 계속합니다.
6. 들어 올린 다음 테스트베이스에 전송 카트리지를 연결합니다. 카트리지 전송이 올바르게 연결되면 주황색 표시 등을 관찰 내려. 뚜껑을 닫고 "테스트 완료"될 때까지 열지 마십시오메시지가 화면에 나타납니다.

3. 품질 관리

1. 홈 화면에서 '실행 QC 테스트'를 터치합니다. 품질 관리 테스트를 선택 실행합니다. '확인'을 터치하고 화면에 테스트를 완료하라는 메시지에 따라 시험을위한 품질 관리 샘플과 일치하도록 시험 유형을 확인합니다.

4. 결과 해석

1. 테스트 실행이 완료된 후, 인플루엔자 A, B, 알 아형의 존재를 해석하여 화면에 표시된 시험 결과를 관찰한다. 유효하지 않은 결과를 테스트를 반복합니다.

5. 유지 보수 및 청소

1. 악기와 70 % 에탄올 또는 10 % 표백제 용액으로 매일 주변 벤치 영역을 청소합니다. 청소 젖은 보풀이없는 천으로 세정 용액을 스프레이. 악기에 직접 솔루션을 붓지 마십시오.

결과

본 연구에서는 보관 NPS 표본은 2013 NPS 시편 3 ㎖에 제출 된 2012년 12월 15일 3 월 1 일 사이에 인플루엔자 발생시 메모리얼 슬론 - 케터링 암 센터 (MSKCC)에서 독감 같은 증상으로 제시 입원 환자에서 수집 VTM의 및 연구 기간 동안 인플루엔자 A, A-1, A-3, B를 포함하는 호흡기 바이러스 (RP)의 패널을 검출하는 분자 분석과 일상적인 임상 실습의 일환으로 테스트 3,675 NPS 표본은 제출...

토론

인플루엔자 바이러스는 이환율과 사망률의 중요한 세계적으로 원인입니다. 인플루엔자의 신속하고 정확한 진단은 호흡기 시즌 동안 독감 발생을 관리하는 주요 열쇠 중 하나입니다. 기타 항원 - 기반 테스트 신속하고 수행하기 쉽다; 그러나, 낮은 민감도 ^(13)를 갖는다. 한편, 기존의 분자 테스트는 감도를 향상,하지만 수행하고 더 비용이 많이 드는 더 많은 경험 실험실 기술자?...

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Alere i Instrument	Alere	NAT-000 (Global), NAT-024 (US)
Alere i Influenza A & B 24 Test Kit	Alere	425-000 (Global), 425-024 (US)
Alere i Barcode Scanner	Alere	EQ001001
Alere Universal Printer	Alere	55115 (Global), alereiprinter (US)
200 µl precision pipette
200 µl disposable pipette tips
Viral transport medium	Remel	M4-RT