JoVE 비디오를 활용하시려면 도서관을 통한 기관 구독이 필요합니다. 전체 비디오를 보시려면 로그인하거나 무료 트라이얼을 시작하세요.
Method Article
Multilayer microfluidic devices often involve the fabrication of master molds with complex geometries for functionality. This article presents a complete protocol for multi-step photolithography with valves and variable height features tunable to any application. As a demonstration, we fabricate a microfluidic droplet generator capable of producing hydrogel beads.
Microfluidic systems have enabled powerful new approaches to high-throughput biochemical and biological analysis. However, there remains a barrier to entry for non-specialists who would benefit greatly from the ability to develop their own microfluidic devices to address research questions. Particularly lacking has been the open dissemination of protocols related to photolithography, a key step in the development of a replica mold for the manufacture of polydimethylsiloxane (PDMS) devices. While the fabrication of single height silicon masters has been explored extensively in literature, fabrication steps for more complicated photolithography features necessary for many interesting device functionalities (such as feature rounding to make valve structures, multi-height single-mold patterning, or high aspect ratio definition) are often not explicitly outlined.
Here, we provide a complete protocol for making multilayer microfluidic devices with valves and complex multi-height geometries, tunable for any application. These fabrication procedures are presented in the context of a microfluidic hydrogel bead synthesizer and demonstrate the production of droplets containing polyethylene glycol (PEG diacrylate) and a photoinitiator that can be polymerized into solid beads. This protocol and accompanying discussion provide a foundation of design principles and fabrication methods that enables development of a wide variety of microfluidic devices. The details included here should allow non-specialists to design and fabricate novel devices, thereby bringing a host of recently developed technologies to their most exciting applications in biological laboratories.
지난 15 년 동안, 필드와 같은 마이크로 유체는 마이크로 미터 규모 1 유체의 조작을 가능하게 새로운 기술의 폭발과 함께, 빠른 성장을 겪고있다. 처리량을 급격히 증가 및 스케일 (2, 3)의 경제를 활용하여 비용을 절감하는 동시에 작은 양 증가 속도 및 감도를 실현할 수있는 가능성이 있기 때문에 미세 유체 시스템은 습식 실험실 기능을위한 매력적인 플랫폼이다. 적층 마이크로 유체 시스템들은 단일 세포 분석 4, 5, 6, 단일 분자 분석 (예를 들어, 디지털 PCR 7) 단백질 결정학 8 전사 인자 결합 분석 높은 처리량 생화학 분석 분야에서 특히 중요한 영향을 만들었다F "> 9, 10, 11 및 세포 선별.
마이크로 유체의 중심 목표 총 생화학 분석 (12)는 단일 장치 내에 유체 복잡한 조작을 수행 할 수있는 장치 "칩의 실험실 '을 개발하고있다. 다층 소프트 리소그래피 기술의 발달은 온 - 칩 밸브 믹서의 생성을 가능하게함으로써 이러한 목표를 실현하는 데 도움 적극적 소량 13, 14, (15) 내의 유체를 제어하기위한 펌프 하였다. 자신의 장점과 증명 응용 프로그램에도 불구하고, 이러한 미세 유체 기술의 대부분은 비 전문가 사용자가 크게 unharnessed 남아있다. 광범위한 채택으로 인해 미세 시설에 제한된 액세스 부분에 도전하고 있지만 인해 제조 기술의 부적절한 통신에있다. 이 FO 특히 그러하다연구 밸브 또는 복잡한 형상에 대한 구조를 갖춘 다층 미세 유체 장치 : 중요한 설계 매개 변수 및 제조 기술에 대한 자세한, 실용적인 정보의 소수가 종종 이러한 장치의 설계 및 제작을 포함하는 프로젝트에 착수하기위한 새로운 연구를 방지 할 수 있습니다.
이 문서에서는, 밸브 및 가변 높이 기능 다층 미세 유체 장치를 만드는 설계 매개 변수에서 시작하여 모든 제조 단계를 통해 이동을위한 완벽한 프로토콜을 제시하여이 지식 격차를 해결하는 것을 목표로하고있다. 제조의 초기 포토 리소그래피 단계에 초점을 맞춤으로써,이 프로토콜은 금형에서 장치를 주조 및 특정 실험을 실행하는 다운 스트림 단계를 설명하는 다른 미세 유체 프로토콜 16을 보완한다.
모 놀리 식 온 - 칩 밸브와 마이크로 유체 장치는 두 개의 층으로 구성되어 있습니다 : 관심의 유체가 마이크로에서 조작하는 "흐름"층을,채널, 공기 또는 물을 포함하는 마이크로 채널을 선택적으로 유동 층 (14)의 유체 흐름을 조절할 수있는 "권한"층. 이 두 층은 각각의 후속 호출 과정에서 폴리 디메틸 실록산 (PDMS) 복제 성형에 사용되는 별도의 실리콘 몰딩 마스터 상에 제조되는 "소프트 리소그래피 (17)." 적층 장치를 형성하기 위해 PDMS 층 각각은 각각의 성형 마스터에서 주조 한 다음함으로써 각 층의 채널을 시청할 수있는 복합 PDMS 소자를 형성하고, 서로 정렬. 밸브는 유동 제어 채널이 서로 교차 만 얇은 막에 의해 분리 된 위치에 형성된다; 제어 채널의 가압이 유로를 폐색이 막 편향 로컬 유체 (도 1)를 대체.
액티브 온 - 칩 밸브를 원하는 최종 용도에 따라 여러 가지 방법으로 제조 될 수있다. 밸브제어 층 (도 1) (15) 위 또는 유동 층 아래에 있는지에 따라 "밀어", "아래로 밀어"또는 구조 중 하나로 구성 될 수있다. 유동 채널 접합 기판과 직접 접촉 할 수 있도록 형상이 허용하는 "푸시 다운"상태에서 기판 표면을 선택적으로 기능화 또는 패터닝의 이점을 부여하는, 기하학 하부 폐쇄 압력과 박리에 대해 더 높은 장치의 안정성을 허용 "밀어" 나중에 기능 18, 19.
밸브는 유로의 단면 형상에 따라 의도적 누설 "시브"밸브 또는 완전히 밀봉 될 수있다. 체 밸브 구슬, 세포 또는 다른 macroanalytes 1을 포착하는 데 유용하며, 전형적인 네거티브 포토 레지스트 (즉, SU-8 시리즈), 하의 사용을 통해 제작된다직사각형 프로필을했습니다. 제어 채널은 이들 밸브 영역 위에 가압시, 제어 흐름 층의 PDMS 막 (그림 1)의 모서리를 밀봉 유체 흐름을 허용하지만, 거시적 입자들을 트래핑하지 않고 밸브의 직사각형 프로파일로 등방성으로 편향시킨다. 반대로, 완전 밀봉 미세 유체 밸브는 밸브 위치에서 둥근 포토 레지스트의 작은 패치를 포함하여 제조된다. 이 구조에 의해, 제어 채널의 완전 가압 유체 흐름을 정지, 채널을 밀봉하기 위하여 둥근 유동 층에 대해 막 편향. 흐름 층에서 둥근 프로파일은 일반적인 포토 리소그래피 단계 후 용융 및 긍정적 인 포토 레지스트 (예를 들어, AZ50의 XT 또는 SPR 220)의 리플 로우를 통해 생성된다. 우리는 이전에 밸브 지역의 후 리플 로우 높이가 선택한 기능 치수 (21)에 달려 있음을 증명하고있다. 이 프로토콜은 두 밸브 형상의 제작과를 보여줍니다비드 합성 장치이다.
그림 1 : 다층 미세 유체 밸브 기하학. 체에 대한 일반적인 "밀어"장치 아키텍처와 (위)과 후 (아래) 가압 전에 완전히 밀봉 밸브. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
장치는 또한 하나의 흐름 층 내에서 여러 다른 높이의 기능을 필요로 저항 (20) 혼란 믹서 (13)와 온 - 칩 복잡한 수동 기능을 포함 할 수있다. 가변 높이 흐름 층을 달성하기 위해, 다른 그룹은 인쇄 회로 기판 에칭 (22), 다층 PDMS 릴리프 배향 (23) 또는 다단계 (P)을 포함한 여러 방법을 채용 한hotolithography 24. 우리 그룹은 효과적이고 재현 가능한 방법으로 단일 성형 마스터 다단계 포토 리소그래피를 발견했다. 이를 위해, 각 층의 도포 사이에서 발달하지 층에 네가티브 포토 레지스트 (예를 들면, SU-8 포토 레지스트 계)의 두께 채널 구축의 간단한 포토 리소그래피 기술이 이용된다. 각 층은 실리콘 마스터에 두께 사용하여 제조 지침 (25)에 따라 네가티브 포토 레지스트에 방사된다. 이 높이의 특징은 특정 투명 마스크 (도 2) 유리 마스크 판에 부착하고 노광 전의 이전 방사 층 정렬을 사용하여 층상에 패터닝된다. 다단계 포토 리소그래피에있어서, 층간 정밀한 정렬은 전체 높이가 가변 유동 채널을 형성하는데 중요하다. 정렬 후에, 각 층의 두께 의존성 노광 후 베이킹을 실시한다. 현상없이, 다음 층은 SIM이고ilarly 패턴. 이러한 방식으로, 키의 기능은 다수의 마스크의 사용을 통해 단일 유동 웨이퍼 층별을 구축 할 수있다. 각 단계 사이에 개발을 스킵함으로써, 기존의 포토 레지스트 층 (24) (즉, 두 개의 25 ㎛의 층이 50㎛의 기능을 할 수있다) 복합 높이는 기능을 생성하기 위해 사용될 수있다. 또한, 이러한 혼란 믹서 헤링본 홈 (13)의 채널 층의 기능은 이전에 노출 된 기능을 가진 층을 사용하여 제조 될 수있다. 최종 개발 단계는 변수 높이 (그림 3)의 기능을 하나의 흐름 웨이퍼를 만드는 과정을 완료합니다.
여기에서, 온 - 칩 밸브를 복수의 높이와 유체 채널을 제조하는 데 필요한 모든 절차의 예를 포함하는 다단계 포토 리소그래피를위한 완전한 프로토콜이 제공된다. 이 제조 프로토콜 밸브 variab을 필요로하는 다중 층 미세 비드 합성의 문맥에서 제공된다르 높이의 기능을 제공합니다. 이 장치는 Poiseuille 저항 액적 성분을 균질화 혼돈 혼합기 제어를 통해 유량을 조절하기 위해, 오일 시스 내에 온 - 칩 저항기 물방울을 생성하기위한 T-접합부를 포함하며, 모두 완전히 밀봉하고 자체 밸브는 다수의 시약을 포함하는 자동화 된 작업 흐름을 활성화 입력. 다단계 포토 리소그래피를 사용하여, 이러한 기능은 각각의 높이와 포토 레지스트에있어서 상이한 층 상에 제조되며 다음 층이 프로토콜로 구성된다 : (1) 흐름 라운드 밸브 층 (55 μm의, AZ50 XT) (2) 흐름 낮은 층 (55 μm의, SU-8 2,050) (3) 흐름 높은 층 (85 μm의, SU- 8 2025 30 μm의 첨가제 고도), 및 (4) 헤링본 그루브 (125 μm의 2025 SU-8, 40 μm의 첨가제 높이) (도 3).
하이드로 겔 비드 선택적 하류 분석 용 표면 기능화 약물 캡슐화, 라디에이터를 포함한 다양한 용도에 사용될 수있는otracing 및 이미지 분석, 세포 결합; 우리는 이전에 란탄 nanophosphors (20)를 포함하는 분광 엔코딩 PEG 하이드로 겔 비드를 제조하기 위해 이러한 장치의보다 복잡한 버전을 사용했다. 원하는 경우 어떤 실험실 연구 활동에 사용할 수 있도록 여기서 설명하는 디자인은 추가 자료에 포함되어 있습니다. 우리는이 프로토콜은 전문가와 마이크로 유체의 진입 장벽을 낮추고 제조 성공의 기회를 증가하는 밸브 또는 복잡한 형상과 다층 미세 유체 소자 제작에 모두 관심이 비전문가를위한 개방형 자원을 제공 할 것으로 예상된다.
1. 멀티 레이어 장치 설계
참고 : 다른 높이 및 / 또는 포토 레지스트의 특징은 최종 복합 기능을 만들 수있는 다른 제조 단계에서 웨이퍼에 순차적으로 추가해야합니다. 웨이퍼가 자신의 마스크 (그림 4)에 인쇄해야합니다에 따라서 각각 별도의 높이와 포토 레지스트를위한 디자인 포함한다.
표 1 : 설계 매개 변수 및 제안. 마이크로 유체 장치의 디자인을 CAD 공정 동안 일반적인 실수를 방지하도록 설계 고려 사항. 이 테이블을 보려면 여기를 클릭하십시오. (다운로드 마우스 오른쪽 버튼으로 클릭합니다.)
(2) 포토 리소그래피 웨이퍼를 준비
참고 :이 단계를 추가로 표 2에 테이블 형식으로 표시됩니다.
둥근 밸브 제조
3. 직렬 변수 신장 기능의 제조
4. 제어 웨이퍼 제조
쉬운 PDMS 리프트 - 오 5. 실란 웨이퍼 처리FF
6. PDMS 복제 성형
물방울에서 하이드로 겔 비즈 7. 생산
여기서는 액적으로부터 폴리 에틸렌 글리콜 (PEG) 하이드로 겔 비드를 생성 할 수있는 장치를 만들어 판막 가변 높이 미세 다층 형의 제조를 증명 (그림 2). 전체 제조 공정의 개요는도 전작으로부터 설계 요소를 이용하여 (3)에 포함되는 비드의 합성 (1) 층류 변조 (55 μm의) (2) 유동 AZ50의 XT 밸브 둥근 포함한 흐름 층 (4)의 ?...
이 작품은 우리의 온라인 도구 (26)와 제조업체 지침 25을 기반으로 제작 매개 변수에 대한 간단한 수정을 모든 응용 프로그램에 맞게 조정 할 수 있습니다 밸브 및 가변 높이 구조와 다층 미세 유체 소자를위한 완벽한 여러 단계의 포토 리소그래피 프로토콜을 보여줍니다. 이 프로토콜은 단순한 수동적 하나의 계층 형 이상 미세 유체 장치를 구성하고자하는 연?...
The authors declare that they have no competing financial interests.
The authors thank Scott Longwell for helpful comments and edits to the manuscript and Robert Puccinelli for device photography. The authors acknowledge generous support from a Beckman Institute Technology Development Grant. K.B. is supported by a NSF GFRP fellowship and the TLI component of the Stanford Clinical and Translational Science Award to Spectrum (NIH TL1 TR 001084); P.F. acknowledges a McCormick and Gabilan Faculty Fellowship.
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Materials | |||
Mylar Transparency Masks, 5" | FineLine Plotting | ||
5" Quartz Plates | United Silica | Custom | |
4" Silicon Wafers, Test Grade | University Wafer | 452 | |
SU8 2005, 2025, 2050 photoresist | Microchem | Y111045, Y111069, Y111072 | |
Az50XT | Integrated Micromaterials | AZ50XT-Q | |
SU8 Developer | Microchem | Y020100 | |
AZ400K 1:3 Developer | Integrated Micromaterials | AZ400K1:3-CS | |
Pyrex 150 mm glass dish | Sigma-Aldrich | CLS3140150-1EA | |
Wafer Petri Dishes, 150 mm | VWR | 25384-326 | |
Wafer Tweezers | Electron Microscopy Sciences (EMS) | 78410-2W | |
Trichloro(1H,1H,2H,2H-perfluorooctyl)silane (PFOTS) | Sigma-Aldrich | 448931-10G | |
2" x 3" glass slides | Thomas Scientific | 6686K20 | |
RTV 615 elastomeric base and curing agent PDMS set | Momentive | RTV615-1P | |
Tygon Tubing, 0.02" O.D. | Fischer Scientific | 14-171-284 | |
Capillary PEEK tubing, 510 μm OD, 125 μm ID | Zeus | Custom | 360 μm PEEK is readily available by Idex (catalog number: 1571) |
Cyro 4 ml tube | Greiner Bio-One | 127279 | |
Epoxy, 30 min | Permatex | 84107 | |
Metal Pins, 0.025" OD, .013" ID | New England Small Tube | NE-1310-02 | |
Poly(ethylene glycol) diacrylate, Mn 700 | Sigma-Aldrich | 455008-100ML | |
Lithium Phenyl(2,4,6-trimethylbenzoyl)phosphinate photoinitator | Tokyo Chemical Industry Co. | L0290 | We typically synthesize LAP in-house. |
HEPES | Sigma-Aldrich | H4034-25G | |
Light mineral oil | Sigma-Aldrich | 330779-1L | |
Span-80 | Sigma-Aldrich | 85548 | |
ABIL EM 90 | UPI Chem | 420095 | |
Name | Company | Catalog Number | Comments |
Equipment | Equivalent equiptment or homebuilt setups will work equally as well | ||
Mask Aligner | Karl Suss | MA6 | |
Profilometer | KLA-Tencor | Alpha-Step D500 | |
Spin Coater | Laurell Technologies | WS-650-23 | Any spincoater can be used that accepts 100 mm wafers |
Vacuum Dessicator, Bell-Jar Style | Bel-Art | 420100000 | |
Oven | Cole-Palmer | WU-52120-02 | |
UV Spot Curing System with 3 mm LLG option | Dymax | 41015 | UV LEDs, Xenon Arc Lamps, or other UV sources of the same intensity work equally as well |
MFCS Microfluidic Fluid Control System | Fluidgent | MFCS-EZ | Syringe pumps, custom pneumatics or other control systems can also be used |
Automated control scripting | MATLAB | ||
Hotplate | Tory Pines Scientific | HP30 | Any hotplate with uniform heating (i.e., aluminum or ceramic plates) will suffice. |
JoVE'article의 텍스트 или 그림을 다시 사용하시려면 허가 살펴보기
허가 살펴보기This article has been published
Video Coming Soon
Copyright © 2025 MyJoVE Corporation. 판권 소유