S. Cerevisiae 에서 Nsa1의 구조화 되지 않은 영역을 모델링 하는 데 작은 각 x 선 산란 된 x-선 결정학을 결합

Yu-Hua Lo; Monica C. Pillon; Robin E. Stanley

doi:10.3791/56953

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Method Article

S. Cerevisiae 에서 Nsa1의 구조화 되지 않은 영역을 모델링 하는 데 작은 각 x 선 산란 된 x-선 결정학을 결합

DOI:

10.3791/56953

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January 10th, 2018

Yu-Hua Lo¹, Monica C. Pillon¹, Robin E. Stanley¹

¹Signal Transduction Laboratory, National Institutes of Environmental Health Sciences, Department of Health and Human Services, National Institutes of Health

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요약

이 방법은 엑스레이 결정학 및 소 각 x 선 산란 (SAXS), 복제, 표현, 및 구조 결심을 위한 재조합 Nsa1의 정화를 설명 하 고 다른 단백질의 하이브리드 구조 분석에 대 한 적용 둘 다를 포함 하는 주문 하 고 도메인을 난잡.

초록

리보솜 어셈블리 요소 Nsa1 Saccharomyces cerevisiae (S. cerevisiae) 에서 전체 길이 구조 결정은 무질서 때문에 도전 이다 고 정한 효소 단백질의 C-터미널. 이 원고는 엑스레이 결정학 및 SAXS에 의해 구조 분석에 대 한 S. cerevisiae 에서 재조합 Nsa1 정화 방법을 설명 합니다. X 선 결정학은 Nsa1의 정돈된 N 맨끝 WD40 도메인의 구조를 해결 하기 위해 활용 하 고 있다 그리고 SAXS 솔루션에서 Nsa1의 C-말단의 구조를 해결 하기 위해 사용 되었다. 솔루션 분산 데이터 솔루션에서 전체 길이 Nsa1에서 수집 되었다. 이론적인 산란 진폭 WD40 도메인의 고해상도 결정 구조에서 계산 그리고 경직 된 몸과 ab initio 모델링의 조합 Nsa1의 C-터미널. 이 하이브리드 접근 방식을 통해 전체 단백질의 제 사기 구조 개축 되었다. 여기에 제시 된 방법의 구조화 및 구조화 되지 않은 도메인의 혼합으로 구성 된 다른 단백질의 하이브리드 구조 결정에 대 한 일반적으로 적용 해야 합니다.

서문

리보솜 큰 ribonucleoprotein 기계 모든 살아있는 세포에 있는 단백질으로 번역 하는 mRNA의 필수적인 역할을 수행 하는. 리보솜 속¹^,²^,^,³⁴나 복잡 한 과정에서 생산 되는 2 개의 소 단위 리보솜 구성 됩니다. 진 핵 리보솜 어셈블리 필수 ribosomal 어셈블리 요소²^,^,³⁵의 수백의 도움에 의존합니다. Nsa1 (Nop7 관련 1)⁶큰 ribosomal 소 단위 생산에는 진 핵 리보솜 어셈블리 요소 이며 WD-반복으로 알려진 74 (WDR74) 더 높은 유기 체⁷에 포함 된입니다. WDR74 쥐⁸에서 blastocyst 형성에 필요한 것을 보여줘 왔다 그리고 WDR74 발기인은 자주 암 세포⁹에 돌연변이. 그....