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여기 우리는 개별적으로 시간의 긴 기간 동안 동물을 추적 하는 프로토콜을 제시. 컴퓨터 비전 사례 연구, 집, 하는 방법에 정보를 제공 하는 동시에로 랍 스타의 그룹을 사용 하 여 수동으로 생성 된 태그의 집합을 식별 하는 방법을 조작 및 표시는 랍 스타를 사용 합니다.
선물이 배경 빼기와 cohoused 동물을 개별적으로 추적할 수 있게 해 주는 이미지 임계 처리 기반 비디오 추적 기술에 관련 된 프로토콜. 5 일 동안 암흑 빛 조건에서 4 개의 cohoused 노르웨이 가재 (Nephrops norvegicus)와 추적 루틴 테스트. 랍 스타는 개별적으로 태그 했다. 실험 설정 및 사용 하는 추적 기술을 완전히 오픈 소스 소프트웨어에 근거한 다. 수동 감지 추적 출력의 비교는 랍 스타 잘못 했다 나타냅니다 시간의 69%를 발견. 올바르게 감지 바닷가재 가운데 그들의 개별 태그 제대로 했다 시간의 89.5%를 발견. 프로토콜에 사용 되는 프레임 속도 랍 스타의 운동 속도, 고려 비디오 추적의 성능 좋은 품질 있으며 대표적인 결과 지원 프로토콜의 타당성 연구 필요 (개인에 대 한 귀중 한 데이터를 생성 공간 점령 또는 운동 활동 패턴)입니다. 여기에 제시 된 프로토콜 쉽게 사용자 정의할 수 있습니다 그리고, 따라서, 표본 그룹에서의 개별 추적 연구 질문에 대 한 중요 한 될 수 있는 다른 종에 게 양도할 수 있다.
지난 몇 년 동안, 자동된 이미지 기반 추적 생태학과 행동 분야1기본적인 질문을 탐구 하는 데 사용할 수 있는 매우 정확한 데이터를 제공 하고있다. 동물의 행동2,3의 정량 분석을 위해 이러한 데이터 집합을 사용할 수 있습니다. 그러나, 동물 및 행동 평가 추적 하는 데 사용 되는 각 이미지 방법론의 장점과 한계는 있습니다. 동물4,,56을 추적 하는 영화에서 이전 프레임에서 공간 정보를 사용 하는 이미지 기반 추적 프로토콜 오류 수 소개 때 두 동물의 경로. 이러한 오류는 일반적으로 가역 하지 않으며 시간을 통해 전파 합니다. 감소 또는 거의이 문제5,7을 제거 하는 진보에 대 한 계산에 불구 하 고 이러한 기술을 여전히 균질 실험 환경 정확한 동물 식별 및 추적에 대 한 필요 합니다.
동물에 고유 하 게 식별 될 수 있는 마크의 고용 이러한 오류를 방지 하 고 확인 된 개인의 장기 추적을 허용 한다. 널리 사용 되는 마커 (예를 들어, 바코드 및 QR 코드) 산업과 상업에 존재 하 고 확인할 수 있습니다 잘 알려진 컴퓨터 비전 기술을 사용 하 여와 같은 증강 현실 (예를 들어, ARTag8) 및 (예를 들어, CALTag9 카메라 보정 ). 대 한 예를 들어, 개미3 또는 꿀벌10, 하지만 이러한 이전 시스템의 일부 고립 된 태그3인식에 대 한 최적화 되어 있지 않으며 태그 동물 이전 다른 동물 종에서 높은 처리량 행동 연구에 대 한 사용 되어 왔습니다.
이 문서에 소개 된 추적 프로토콜은 단일 채널 이미지, 적외선 (IR) 빛 등 단색 빛에에서 동물을 추적 하는 데 특히 적합 (특히, 우리 블루 빛을 사용). 따라서, 개발 하는 방법 색상 신호, 또한 다른 설정에 적용 되 고 사용 하지 않는 조명에 제약 조건이 있다. 또한, 우리는 그렇게 하지 않도록는 바닷가재를 방해 하 고, 동시에 저가 카메라와 녹음을 허용 하도록 설계 된 사용자 지정된 태그를 사용 합니다. 또한, 여기에 사용 되는 방법 프레임 독립적인 태그 검색 기반은 (즉., 이전 궤도에 이미지에 각 태그의 존재를 인식 하는 알고리즘). 이 기능은 동물 일시적으로 차단 될 수 있습니다, 또는 동물 들의 궤적을 교차 수 있습니다 응용 프로그램에서 관련입니다.
태그 디자인 동물의 서로 다른 그룹에 그것의 사용을 허용 한다. 메서드의 매개 변수가 설정 되 면 다른 갑각류 (복족류) 특정 분류자를 훈련을 위한 필요 없이 다른 동물 추적 문제를 해결 하기 위해 옮겨질 수 있습니다. 프로토콜을 수출의 주요 제한 태그 및 첨부 파일 (파리, 꿀벌, 등 작은 곤충에 적합 하지 않은 게) 동물을 위한 필요 및 동물 운동에 대 한 2D 가정의 크기 이다. 이 제약은 중요 한, 주어진 제안된 방법 가정 태그 크기 일정 하 게 유지 합니다. 동물 3D 환경 (예를 들어, 물고기)에 자유롭게 이동 카메라의 거리에 따라 다른 태그 크기를 보여줄 것입니다.
이 프로토콜의 목적은 시간 2D 컨텍스트 (즉, 일 또는 주)의 오랜 기간 동안 여러 태그 동물을 추적 하기 위한 사용자 친화적인 방법을 제공 하는 것입니다. 방법 론 적 접근은 오픈 소스 소프트웨어와 하드웨어의 사용을 기반으로 합니다. 무료 및 오픈 소스 소프트웨어 허용 각 색, 수정, 및 무료 재배포; 따라서, 생성 된 소프트웨어11,12각 단계에서 향상 됩니다.
프로토콜 제시 여기 실험실을 추적 하 고 5 일 동안 탱크에서 4 수생 동물의 운동 활동 평가 설정에 초점을 맞추고. 비디오 파일은 1 s 시간 경과 이미지에서 기록 하 고 (1 기록된 일 차지 비디오의 약 1 시간) 초당 20 프레임에서 비디오에서 컴파일된. 모든 비디오 녹화는 컴퓨터 비전 방법 및 알고리즘 적용 동물 위치를 자동으로 postprocessed. 프로토콜 추적 데이터, 시간 및 이전 실험 논문13힘 드는 될 표시 되었습니다 그들의 수동 주석 피하의 다량을 얻기 수 있습니다.
우리가 노르웨이 가재 (Nephrops norvegicus)를 사용 하 여 사례 연구; 따라서, 우리는 그들을 유지 하기 위해 종의 실험실 조건을 제공 합니다. 바닷가재 수행 잘 공부 뚫 출현 리듬 circadian 시계14,15의 컨트롤 아래에 있는 그리고 cohoused 때 그들은 지배 계층16,17. 따라서, 여기에 제시 된 모델 circadian 리듬에 특정 초점 행동의 사회 변조에 관심이 있는 연구자에 대 한 좋은 예입니다.
여기에 제시 된 방법론은 쉽게 복제 하 고 개별 태그 동물 사이 구별 하는 가능성 있으면 다른 종에 적용 될 수 있습니다. 이러한 접근은 실험실에서 재현에 대 한 최소 요구는 (i) 등온 실험 설정; (2) 지속적인 물 공급; (iii) 물 온도 제어 메커니즘; (4) 조명 제어 시스템; (v)는 USB 카메라와 표준 컴퓨터.
이 프로토콜을 사용 하 여 파이썬18 과 OpenCV19 (오픈 소스 컴퓨터 비전 라이브러리). 우리는 신속 하 고 일반적인 적용 등의 작업 (구현 및 실행 둘 다), 배경 빼기20 및 이미지 임계 처리21,22에 의존 한다.
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이 연구에 사용 된 종 멸종 위기 또는 보호 종이 아니다. 샘플링 및 실험실 실험 스페인 입법 및 동물 복지에 관한 내부 기관 (ICM-CSIC) 규정에 따 랐 다. 동물 샘플링 지방 기관 (카탈로니아 지역 정부)의 허가 함께 실시 했다.
1. 동물 유지 보수 및 샘플링
참고: 다음 프로토콜 연구원23대뇌 손상을 방지 하려면 밤 동안 필드에서 명 norvegicus 샘플 수 가정 기반으로 합니다. 명. norvegicus 햇빛에 노출은 피해 야 한다. 샘플링, 후에 랍 스타 이전17,24, 냉장 된 바닷물 (13 ° C)의 지속적인 흐름에 보고 하는 것과 유사한 새 환경 순응 시설에서 지 내게 되어 있습니다. 이 연구에 사용 된 동물 43.92 ± cephalothorax 길이 (CL, 평균 ± SD) intermoult 상태에서 남성은 2.08 m m (N = 4).
그림 1 : 시설 새 환경 순응 보기. (가) 탱크 선반. (a1) 해 수 입력입니다. (a2) 형광 성 천장 조명입니다. (b) 블루 빛의 조명. (c) 동물 세포 세부입니다. (d) 격리 시설 제어판의 세부 사항. (e) 온도 설정의 입구 중 하나입니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
2. 태그의 건설
참고: 여기에 사용 되는 태그는 대상 동물 또는 다른 특정 고려의 특성에 따라 변경할 수 있습니다.
그림 2 : 4 태그는 바닷가재의 개별 태그에 대 한 사용. 원형, 원형 홀, 삼각형, 삼각형 구멍. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
3. 실험 설치
참고: 실험 분야에서 실험 챔버 독립적인 그러나 새 환경 순응 시설에 가까운 근접에서 되어있다.
그림 3 : 실험 설치. (한) 실험의 어셈블리의 탱크 및 비디오 취득. (b) 실험 탱크의 일반적인 보기. (c) 아래 인공 버 로우를 나타내는 실험 탱크의 보기. (d) 상단 보기, 실험 탱크의 바닥을 보여주는. (e) 뚫으 입구 중 하나의 세부 사항. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
4. 실험적인 시도 동물 준비
참고: 새 환경 순응 시설에서 및 노르웨이 가재25의 스펙트럼 민감도 따라 붉은 빛 조건 하에서 동물 들과 함께 모든 단계를 수행 합니다. 새 환경 순응 실험 시설 간의 동물을 이동, 빛, 랍 스타는 아이스 박스를 커버 하는 불투명 한 검은 가방을 사용 하 여 어떤 노출 하지 않도록 합니다.
그림 4 : 원시 비디오 프레임. 시간 경과 비디오 중에서 대표적인 프레임의 예로 실험 기간 동안 수집. 오른쪽 상단 모서리에서 우리는 날짜, 시간, 및 프레임 타임 스탬프를 보여줍니다. 이미지의 하단에서 탱크 조명에 차이 알 수 있습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
5. 비디오 분석 스크립트
6. 컴퓨터 비전 스크립트 비디오 분석에 대 한
참고: 실험 설정에 관련 된 오류를 소개 하지 않습니다 때문에 스크립트 fisheye 이미지 보정을 방지 합니다. 그럼에도 불구 하 고, OpenCV 카메라 캘리브레이션 기능29 벡터 및 행렬 회전 방법30,31에 따라 해결이 가능 하다.
그림 5 : 비디오 처리 하시기의 관련 단계 (1) 평가 마지막 100의 평균에 배경 빼기 모션 프레임. (2) 배경 빼기 알고리즘의 결과. (3) 적용 화이트 감지 영역에 같은데요 형태학 작업. (4) 적용 수정, 정적, 주요 투자 수익; 노란 다각형 하단 탱크 영역에 해당합니다. (5) 주요 투자 수익에서 각 화이트 감지 영역에 대 한 윤곽을 계산 하 고 각 검색 된 윤곽선에 대 한 구조적 분석을 수행. (6) 구조 속성 값을 확인 하 고, 두 번째 수준의 투자 수익 후보자를 선택 합니다. (7) Binarize; 오쓰 임계 처리 알고리즘을 사용 하 여 프레임 스크립트 2 수준 ROIs 에서만 작동합니다. (8) 각 2 차 투자 수익 binarized, 대 한 흰색 영역의 윤곽선을 계산 하 고 각 윤곽선 검출 구조 분석을 수행. (9) 확인 구조 속성 값, 내부 투자 수익 후보자를 선택 합니다. (10)는 내부 투자 수익에서에서 각 윤곽선에 대 한 설명자/순간 계산. (11) 모델과 일치 하는 검색 된 모양 형성 하 고 최고의 경기 후보에 다각형을 대략적인 검사. (12) 대략적인 다각형의 꼭지점의 수를 확인 하 고 기하학적 인 그림을 결정: 원 또는 삼각형. (13) 계산 그림 센터와 확인 검은 픽셀 발생; 그렇다면, 숨어 인물 이다입니다. (14) 프레임 분석 후 시각적 결과입니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭 하십시오.
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우리는 수동으로 자동된 비디오 분석을 확인 하기 위해 실험 데이터의 하위 집합을 건설 한다. 1,308 프레임의 샘플 크기 (샘플 오류의 여백 내에서 인구를 정확 하 게 반영 여부를 보여 주는 보안의 측정 인) 99%의 신뢰 수준 및 4%의 오차의 한계를 (는 백분율로 얼마나 가까운 설명 하는 샘플 준 응답은 인구에 있는 실제 값 이다) 무작위로 선택 했다 ROIs의 올바른 식별 및 각 R...
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비디오 추적 프로토콜 성능 및 대표 결과 사회 변조 및 cohoused 동물의 circadian 리듬에 특정 초점으로 동물 행동 분야에서 응용된 연구에 대 한 유효성을 확인 했다. 동물 검색 (69%)의 효율성 그리고 태그 차별 (89.5%)의 정확도 사용 대상 동물의 행동 특성 (즉, 이동 속도)과 함께 여기는 것이 좋습니다이 프로토콜 장기 실험 시험 (예를 들어, 일 및 주)에 대 한 완벽 한 솔루션. 또한, 프로토콜의 개발에 ?...
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저자는 공개 없다.
저자는이 작품의 출판 자금 박사 조 안 나 회사에 감사. 또한, 저자는 실험적인 작품 하는 동안 그들의 도움에 대 한 실험 수족관 영역에서의 해양 과학 연구소 (ICM-CSIC) 바르셀로나에서의 기술자에 게 감사.
이 작품은 RITFIM 프로젝트에 의해 지원 되었다 (CTM2010-16274; 연구 책임자: J. Aguzzi) 과학 스페인 교육부 및 혁신 (MICINN), 및 경제와 경쟁력의 스페인 정부에서 TIN2015-66951-c 2-2-R 그랜트에 의해 설립.
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Name | Company | Catalog Number | Comments |
Tripod 475 | Manfrotto | A0673528 | Discontinued |
Articulated Arm 143 | Manfrotto | D0057824 | Discontinued |
Camera USB 2.0 uEye LE | iDS | UI-1545LE-M | https://en.ids-imaging.com/store/products/cameras/usb-2-0-cameras/ueye-le.html |
Fish Eye Len C-mount f = 6 mm/F1.4 | Infaimon | Standard Optical | https://www.infaimon.com/es/estandar-6mm |
Glass Fiber Tank 1500 x 700 x 300 mm3 | |||
Black Felt Fabric | |||
Wood Structure Tank | 5 Wood Strips 50x50x250 mm | ||
Wood Structure Felt Fabric | 10 Wood Strips 25x25x250 mm | ||
Stainless Steel Screws | As many as necessary for fix wood strips structures | ||
PC | 2-cores CPU, 4GB RAM, 1 GB Graphics, 500 GB HD | ||
External Storage HDD | 2 TB capacity desirable | ||
iSPY Sotfware for Windows PC | iSPY | https://www.ispyconnect.com/download.aspx | |
Zoneminder Software Linux PC | Zoneminder | https://zoneminder.com/ | |
OpenCV 2.4.13.6 Library | OpenCV | https://opencv.org/ | |
Python 2.4 | Python | https://www.python.org/ | |
Camping Icebox | |||
Plastic Tray | |||
Cyanocrylate Gel | To glue tag’s | ||
1 black PVC plastic sheet (1 mm thickness) | Tag's construction | ||
1 white PVC plastic sheet (1 mm thickness) | Tag's construction | ||
4 Tag’s Ø 40 mm | Maked with black & white PVC plastic sheet | ||
3 m Blue Strid Led Ligts (480 nm) | Waterproof as desirable | ||
3 m IR Strid Led Ligts (850 nm) | Waterproof as desirable | ||
6 m Methacrylate Pipes Ø 15 mm | Enclosed Strid Led | ||
4 PVC Elbow 45o Ø 63 mm | Burrow construction | ||
3 m Flexible PVC Pipe Ø 63 mm | Burrow construction | ||
4 PVC Screwcap Ø 63 mm | Burrow construction | ||
4 O-ring Ø 63 mm | Burrow construction | ||
4 Female PVC socket glue / thread Ø 63 mm | Burrow construction | ||
10 m DC 12V Electric Cable | Light Control Mechanism | ||
Ligt Power Supply DC 12 V 300 W | Light Control Mechanism | ||
MOSFET, RFD14N05L, N-Canal, 14 A, 50 V, 3-Pin, IPAK (TO-251) | RS Components | 325-7580 | Light Control Mechanism |
Diode, 1N4004-E3/54, 1A, 400V, DO-204AL, 2-Pines | RS Components | 628-9029 | Light Control Mechanism |
Fuse Holder | RS Components | 336-7851 | Light Control Mechanism |
2 Way Power Terminal 3.81 mm | RS Components | 220-4658 | Light Control Mechanism |
Capacitor 220 µF 200 V | RS Components | 440-6761 | Light Control Mechanism |
Resistance 2K2 7 W | RS Components | 485-3038 | Light Control Mechanism |
Fuse 6.3 x 32 mm2 3A | RS Components | 413-210 | Light Control Mechanism |
Arduino Uno Atmel Atmega 328 MCU board | RS Components | 715-4081 | Light Control Mechanism |
Prototipe Board CEM3,3 orific.,RE310S2 | RS Components | 728-8737 | Light Control Mechanism |
DC/DC converter,12 Vin,+/-5 Vout 100 mA 1 W | RS Components | 689-5179 | Light Control Mechanism |
2 SERA T8 blue moonlight fluorescent bulb 36 watts | SERA | Discontinued/Light isolated facility |
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