쥐에서 전염성 하품을 측정하는 실험실 방법

요약

여기에 설명된 방법은 친숙하거나 익숙하지 않은 수컷 쥐 쌍으로 하품 전염 곡선을 얻는 것을 목표로합니다. 구멍이 명확하거나 불투명한 파티션으로 구분된 케이지는 시각적, 후각 또는 두 가지 유형의 감각 큐가 하품 전염을 자극할 수 있는지 여부를 감지하는 데 사용됩니다.

초록

의사소통은 동물 사회 생활의 필수적인 측면입니다. 동물은 서로 영향을 미치고 학교, 양떼, 무리에서 함께 모일 수 있습니다. 의사소통은 또한 남녀가 구애하는 동안 상호 작용하는 방식과 라이벌이 싸우지 않고 분쟁을 해결하는 방법입니다. 그러나 여러 유형의 감각 양식이 관련될 가능성이 있기 때문에 통신 기능의 존재를 테스트하기가 어려운 몇 가지 행동 패턴이 있습니다. 예를 들어, 전염성 하품은 동물이 서로 익숙한지 여부에 따라 시력, 청각, 냄새 또는 이러한 감각의 조합을 통해 잠재적으로 발생하는 포유류의 통신 활동입니다. 따라서, 이러한 행동의 가능한 통신 역할에 대한 가설을 테스트하기 위해, 참여 감각 방식을 식별하기 위해 적절한 방법이 필요하다.

여기에 제안 된 방법은 친숙하고 익숙하지 않은 쥐에 대한 하품 전염 곡선을 얻고 시각 및 후각 감각 양식의 상대적 참여를 평가하는 것을 목표로합니다. 이 방법은 저렴한 재료를 사용하며 약간의 변경과 함께 마우스와 같은 다른 설치류 종과 함께 사용할 수도 있습니다. 전반적으로, 이 방법은 인접한 측면에 구멍이 있는 인접한 케이지에 배치된 쥐 간의 통신을 허용하거나 방지하는 불투명 한 분배기(구멍 유무)와 명확한 분배기(구멍 유무)를 대체합니다. 따라서 후각 통신, 시각적 통신, 시각적 및 후각 통신, 시각적 또는 후각 통신의 네 가지 조건을 테스트할 수 있습니다. 쥐 들 간의 사회적 상호 작용발생으로, 이러한 테스트 조건 자연 환경에서 발생할 수 있는 시뮬레이션. 이 점에서, 여기에 제안 된 방법은 생물학적 타당성이 문제를 제기 할 수있는 비디오 프리젠 테이션에 의존하는 전통적인 방법보다 더 효과적입니다. 그럼에도 불구하고, 그것은 하품 전염에서 청각의 잠재적 인 역할과 냄새와 시력의 역할을 구별하지 않습니다.

서문

전통적으로, 통신 행동은 두 가지 관점에서 연구되었습니다. 한 가지 관점에서, 병리학자들은 자연 환경에서 동물의 행동을 관찰하고 기록하고 적응값^1을인식하려고 시도합니다. 관련된 특정 감각 또는 감각은 이 연구 결과의 1 차적인 관심사가 아니었습니다. 또 다른 관점에서, 생리학자는 동물이 1을 통신하는 메커니즘을 해명하는 데 더 관심이 있습니다. 따라서, 실험실 연구는 감각 양식이 통신에서 재생하는 역할을 해결하는방법을 제공했다 2,³. 적응가치와 즉각적인 메커니즘에 대한 지식이 동물의 사회 생활에서 공동체 행동에 대한 포괄적인 이해를 얻기 위해 필요하기 때문에 이 두 관점은 참으로 상호 보완적입니다.

하품 행동은 물고기에서 영장류^5에이르기까지 척추 동물 4의 여러 종에서행동 레퍼토리의 눈에 띄는 구성 요소입니다. 그것은 입의 느린 개방 및 그것의 열린 위치의 유지 보수로 설명 될수있다, 입의 보다 빠른 폐쇄 다음 5. 전체 서열의 지속 기간은 종에 따라 다릅니다. 예를 들어, 영장류는 비 영장류 종 6보다더 긴 기간 동안 하품. 많은 종에서, 인간은 예외인, 남성은 암컷⁷보다는 더 빈번하게 하품하는 경향이 있습니다. 이 기능은 하품의 가능한 통신 기능을 뒷받침 할 수 있지만 하품의 규칙적인 패턴과 일일 빈도는 생리적 기능을 제안 할 수 있습니다. 쥐에서, 자발적인 하품은 circadian 리듬을 따릅니다, 높은 주파수의 피크와 함께 아침과 오후에 발생^8,9.

하품 행동의 한 가지 흥미로운 특징은 척추 동물^11,12의여러 종에서 전염성 이 (행동의 방출 자극이 동일한 방법으로¹⁰에서 다른 동물이 행동하는 일이 있을 때)일 수 있다는^{것입니다. 13,14,15,16,}조류¹⁷ 및 설치류^18을포함한다. 더욱이, 최근의 증거에 따르면 전염성 하품은 후각 큐(19)에 노출될 때 한 쥐의 하품이 다른 쥐의 생리적상태에 영향을 미칠 수 있기 때문에 통신적 역할을 반영할 수 있음을 나타냈다. 그러나 하품이 의사소통의 역할을 하는지 여부는 여전히 20,^21,그리고 전염성 하품을 분석하는 것이 이 문제를 해결하기 위한 필수적인 첫 번째 단계이다.

다른 한편으로는, 전염성 하품은 다른 동물의 관점으로 공감하는 동물의 능력에 연결되었습니다; 따라서, 밀접하게 관련된 개인은 전염을 표시 할 가능성이 더 높습니다⁴. 이 가설은 동물이 비디오^12,13에하품 자극으로 제시되는 실험실 조건에서 자주 테스트되었습니다; 따라서, 전염은 시각적 인 단서를 통해서만 발생할 수 있습니다. 다른 조사는 동물의 그룹을 사용하여 더 자연 조건에서 하품 전염을 평가^14,15. 이것의 중요한 문제는 사회적으로 상호 작용하는 동물이 수시로 감각 양식의 조합을 통해 전달되는 신호및 교환 신호에 반응한다는 것입니다. 그들의 결합 된 효과에서 주어진 된 행동에 관련 된 실제 감각을 disentled 항상 쉬운 작업. 전형적으로, 연구자들은 약리학적또는 외과적으로 주어진 감각의 동물의 사용을 방해하고, 그 다음 관련행동 2,^{3,18,22에서}그 감각의 역할을 추론한다. 다행히도, 물리적 장벽만 허용 하거나 동물 간의 통신을 방해 하는 다른 방법이 있다^23,24,25,따라서 더 큰 생물학적 타당성을 달성.

여기에 제안 된 방법은 특히 사회적 환경에서 친숙하고 익숙하지 않은 쥐에서 전염성 하품을 연구하도록 설계되었습니다. 공감 가설에 따르면, 이전 그룹은 전염성 하품에 더 취약해야합니다. 이 방법은 동물이 어떤 감각도 외과적으로 또는 약리학적으로 박탈될 것을 요구하지 않는다. 대신, 구멍이있는 인접한 케이지에 쥐를 배치하고 구멍이 있거나없는 명확하거나 불투명한 칸막이를 사용하여 의사 소통을 물리적으로 방해하여 작동합니다. 따라서, 네 가지 테스트 조건을 검사할 수 있습니다: (1) 후각 통신(OC, 천공 된 불투명 분할), (2) 시각적 통신 (VC, 비천공 투명 분배기), (3) 시각 및 후각 통신 (VOC, 천공 된 투명 분배기), 그리고 (4) 어느 쪽도 아닙니다. 시각적 또는 후각 통신 (NVOC, 비 확산 불투명 분배기). 따라서 연구원은 하품 전염에서 후각, 시각적 및 어느 정도 청각 단서의 상대적 기여를 비교할 수 있습니다. 이러한 접근법은^{도마뱀(23)} 및 마우스(26)와 같은 동물의 특정 통신 행동에 관여하는 감각을 분리하기 위해유사한 방법이 사용되었기 때문에 새로운 것이 아니다. 실제로 Gallup과^{동료 27은} 버저리거에서 전염성 하품시 시각적 단서의 역할을 입증하기 위해 유사한 방법을 사용했습니다. 이러한 방법의 주요 특징은 사회적 맥락의 시뮬레이션과 동물에 가해지는 최소한의 스트레스입니다. 더욱이, 상호 작용하는 동물의 사용은 결론의 생물학적 타당성을 증가시킨다.

전염성 하품을 측정하는 방법에는 여러 가지가 있습니다^25,28. Dr. Stephen E. G. Lea (개인 통신, 2015)는 이전에 원시학자^13,14에 의해 사용 된 방법을 수치적으로 적응시켜 여기에 사용되는 데이터의 이전 분석을^{위해 18}. 이 프로토콜에 제시된 응용 프로그램의 넓은 범위와이 메서드의 향상 된 버전입니다. 지정된 시간 창 안팎에서 쥐의 하품의 총 수를 시간 창 안팎에서 하품에 해당하는 관찰 시간의 비율에 의해 가중치로 구성됩니다.

예를 들어, 랫트 A와 B가 12분 동안 관찰된다고 가정하면 하품은 가장 가까운 분으로 기록되고 3분 의 시간 창은 전염성 하품을 측정하도록 설정됩니다. 다음으로, 각 랫트에 대한 하품의 다음 서열이 고려된다: 랫트 A (0,0,0,0,0,0,0,0,2,1) 및 랫트 B (0,1,1,1,0,0,0,0,0,0,0,0, 3). 각 숫자 (0-3)는 각 분에 득점 하품의 수에 해당한다는 점에 유의해야한다. 쥐 A의 경우, 분 1, 10 및 11 (굵은 유형의 숫자) 동안, 쥐 B는 이전 3 분 (선택한 시간 창) 또는 그 분 이내에 하품하지 않습니다. 그 분에서, 쥐 A는 총 2 번 하품. 따라서, 하품 자극없이 쥐 A의 하품 속도 (비 사후 하품 하품 속도) 2/3 (즉, 0.67 하품 / 분). 나머지 9 분에서, 쥐 B는 같은 분 또는 3 이전 분 중 하나에 적어도 한 번 하품. 쥐 A는 그 9 분에 총 네 번 하품. 따라서 하품 자극에 반응하는 랫트 A의 하품 비율은 4/9(즉, 0.44 하품/분)이다. 동일한 절차를 랫트 B에 적용하면 하품 후 하품 비율이 2/3(즉, 0.66)이고 하품 후 하품 비율이 5/9(0.55)입니다.

반면에 하품이 1분의 가장 가까운 소수자릿수로 기록되면 하품 전염은 하품 후 시간이 조정됩니다. 예를 들어, 랫트 A및 B에 대한 12분 관찰 기간에 걸쳐 다음 하품 시간이 기록되는 경우: 랫트 A(2.3, 5.1, 5.8, 10.4, 11.1)및 랫트 B(1.2, 2.4, 4.5, 5.1, 11.2, 11.6, 11.8). 쥐 A의 경우, 쥐 B가 지난 3분 이내에 하품을 하지 않는 기간은 0내지 1.2분, 8.1~11.2분(즉, 3.1분)이며, 이는 총 4.3분의 비하품 시간을 산출한다. 그 시간 동안 쥐 A 하품 횟수는 3 (굵은 문자의 숫자)이므로 비 사후 하품 하품 비율은 3/4.3 (즉, 0.69)이며, 하품 후 하품 비율은 3/7.7 (즉, 0.38; 12-4.3 min의 분모)입니다. 마찬가지로, 쥐 B의 경우, 쥐 A가 지난 3분 이내에 하품을 하지 않는 기간은 0내지 2.3분, 8.8~10.4분으로 총 3.9분의 결과를 낳는다. 그 기간 내의 쥐 B 하품 횟수는 1이므로 하품 후 가사 비율이 1/3.9 (즉, 0.25)입니다. 따라서 하품 후 하품 비율은 6/8.1(즉, 0.74)입니다.

행동에서 거의 동시 일치하는 것은 개인이 참석하는 것에 대한 제약, 자극에 대한 반응 시간, 시간에 따라 행동의 분포 (예 : 하품)의 존재를 입증하는 이상적인 기준이지만 에피소드에서 발생할 수 있습니다)와 실험 설정에 적응하는 시간은 모두 종 차이를 야기, 어려운 독특한 시간 창을 사용하는 만들기. 이것은 연구원이 결과^28을비교할 때 문제를 일으키는 초 5에서 몇 분^11까지변화하는 시간 창을 사용한 이유일 수 있습니다. 이 때문에, 하품 전염 곡선을 얻고 종 들 사이의 하품 전염 곡선을 비교하기 위해 시간 창의 범위에 대해 위에서 설명한 절차를 반복하는 것이 제안된다.

등가 하품 전염 곡선은 관찰 기간 동안 각 쥐에 대해 관찰된 하품수를 무작위로 분배하여 비교할 수 있다. 따라서, 제안된 하품 전염을 측정하는 방법은 (1) 하품 속도(non-post-ywn time) 및 (2) 하품 수의 무작위 분포로부터 얻어진 인공 하품 전염 곡선의 두 가지 유형의 제어를 제공한다. 따라서 하품 전염을 분석하는 이러한 접근법은 단일 시간 창 내에서 하품의 백분율 또는 빈도를 이^창(25)외부에서 발생하는 것과 비교하는 것과 같은 다른 절차로부터 한 걸음 앞으로 나아가는 방법, 고려없이 실제 시간 프레임. 이 방법은 R-기반^{프로그램(29)에} 의해 보완되어 하나 이상의 시간 창에 대한 전염성 하품의 확률을 편리하고 객관적으로 계산한다.

이 방법의 유용성 및 R 기반 프로그램의 장점을 설명하기 위해 이전에 게시된 연구^18의 데이터 세트가 사용됩니다. 실험 조건구성 144 익숙한 또는 익숙하지 않은 조건에 할당 된 남성 쥐. 각 실험 조건에서 랫트는 9쌍의 4개의 하위 그룹으로 세분화하고 전술한 4개의 시험 상황 중 어느 하나에 노출되었다. 각 실험 조건 및 시험 상황에서 쥐의 하품 거동을 60분 동안 기록하였다.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

프로토콜

실험 프로토콜 및 축산은 제도적 지침에 따라 수행되었다.

1. 재료

1. 재료 표에서 메서드를 구현하는 데 사용되는 재료의전체 목록을 찾습니다. 그림 1을 사용하여 전문가의 조언을 구하여 뒤집힌 T자형 테이블, 관측 케이지 및 케이지 분할기를 구성합니다. 날카로운 공구와 잠재적으로 위험한 물질의 사용에 대한 안전 표시를 따르십시오.
2. 두 개의 레일 모양의 나무 막대(길이 45cm, 서로 0.6cm 분리)를 상단과 나무 조각(100cm x 45cm x 1.5cm)의 중간에 접착하여 뒤집힌 T자 형 테이블을 만듭니다. 그런 다음 두 번째 나무 조각(50cm x 45cm x 0.6cm)을 레일 모양의 막대 사이에 수직으로 놓습니다. 이 두 번째 나무 조각은 한쪽에 있는 쥐 쌍이 반대쪽의 다른쌍을 보는 것을 방지해야 합니다(그림 1).
3. 유리와 아크릴을 사용하여 8 개의 관찰 케이지를 만듭니다. 각 케이지(폭 19cm, 길이 19cm, 높이 10cm, 두께 3mm)는 측면 의 중간에 세 줄로 배열된 24개의 등거리 구멍(직경 5mm)을 가지고 있는지 확인합니다. 아크릴 (3mm 두께)의이 측면을 확인하고 쥐가 호흡 할 수 있도록 0.7cm반대측의 높이를 단축.
   1. 각 관찰 케이지에는 60 분의 관찰 기간 동안 쥐가 자라나고 산만해하지 않도록 아크릴로 만든 슬라이딩 뚜껑이 있는지 확인하십시오.
4. 아크릴 (폭 19cm, 높이 30cm, 두께 3mm)에서 4 개의 칸막이만들기. 관측 케이지에 있는 구멍과 일치하는 드릴 24구멍(직경 5mm)을 각각 하나의 투명 디바이더와 하나의 불투명 한 칸막이에 놓습니다.
5. 하품 발생을 기록하기 위해 사전에 데이터 시트를 준비합니다. 각 데이터 시트의 제목에, 관찰자의 이름, 실험 조건(즉, 친숙하거나 익숙하지 않은 쥐), 관련 시험 상황(OC, VC, VOC, NVOC), 관측의 날짜 및 초기 및 최종 시간을 포함한다. 데이터 시트의 나머지 부분을 두 개의 열로 나누고, 각 열은 상부에 쓰여진 쥐의 수와 함께, 쥐의 하품 동작을 기록한다.

2. 수속

1. 집 144 플라스틱 케이지 (홈 케이지)에서 4 개의 그룹에서 그들은 나이에 2.5 개월에 도달 할 때까지 weaning에서 수컷 쥐. 그들은 호르몬 주기로 인해 행동에 큰 변화를 표시 하는 경향이 있기 때문에 여성 쥐를 사용 하지 마십시오, 테스트 상황의 효과 혼동 될 수 있습니다. 각 케이지의 쥐가 형제가 아닌지 확인합니다.
   참고 : 함께 모든 쥐를 얻기 어려울 수 있습니다. 이 경우, 각 실험 조건에서 1회 씩 모든 시험 상황이 표현되도록 적어도 8마리의 친숙한 쥐와 8마리의 익숙하지 않은 쥐의 블록을 생성한다(^30).
2. 쥐를 식별하려면 상업용 마커를 사용하여 꼬리에 기호 숫자로 표시합니다. 예를 들어 점과 선을 결합하여 숫자 1에서 4까지를 나타냅니다(예: 숫자 1의 경우 한 점, 숫자 4의 한 줄). 다른 색상을 사용하여 친숙하고 익숙하지 않은 쥐를 식별합니다.
   참고: 동물 시설 직원이 제공한 안전 지침에 따라 쥐를 처리하고 실험이 수행될 기관에서 실험실 동물의 올바른 사용에 관한 권장 사항을 준수합니다.
3. 임의로 익숙한 쥐의 그룹을 수용하고 익숙하지 않은 그룹을 수용 할 홈 케이지를 선택합니다. 예를 들어, 4개의 홈 케이지에 16마리의 사용 가능한 쥐가 있다고 가정 케이지 1에서 4번의 번호를 입력한 다음 다음과 같이 R(http://cran.r-project.org/ 다운로드)을 사용한다고 가정합니다.[프롬프트(>)] 다음.
   > 샘플 (4,4)
   【1】4 3 2 1
   1. 친숙한(또는 익숙하지 않은) 쥐를 홈 케이지 4및 3에 그룹화하고, 익숙하지 않은(또는 친숙한) 쥐를 홈 케이지 2와 1에 그룹화한다. 동물 시설 직원이 각 케이지의 신원을 유지하고 동물 시설의 다른 모든 쥐와 동일한 방식으로 쥐를 처리해야 합니다.
   2. R 프로그램을 다시 사용하고 무작위로 각 실험 조건에서 각 쌍을 형성하는 쥐를 선택합니다. 익숙한 쥐의 각 쌍의 쥐가 같은 홈 케이지에서 유래 있는지 확인하고, 그 반대가 익숙하지 않은 그룹의 쌍에 대한 사실인지 확인합니다. 무작위로 각 실험 조건에서 각 테스트 상황에 대한 쥐의 쌍을 선택합니다.
4. 시험 세션당 8개의 가능한 시험 상황 중 2개(각 친숙하고 익숙하지 않은 쥐에 대해 4개)를 가지고 하루에 두 번의 시험 세션을 수행합니다(즉, 60분 관찰 기간). 3시간 이내에 두 개의 테스트 세션을 연속적으로 실시합니다.
   참고: 모든 테스트 세션(하루에 4쌍의 쥐)을 아침이나 오후에 실시하여 혼란스러운 요인을 피하십시오. 2일 연속으로 실험의 완전한 복제(8가지 테스트 상황)를 실행합니다.
   1. 실험의 각 복제에 대해 무작위 순서로 테스트 상황을 사용해야 합니다. 예를 들어 숫자 1에서 8을 사용하여 각 테스트 상황을 식별한 다음 다음과 같이 R을 사용합니다.
      >샘플(8,8)
      [1] 8 7 4 6 5 1 2 3
   2. 테스트 상황 8과 7을 할당하여 세션 1을 테스트하고, 4 및 6을 테스트하여 세션 2를 테스트합니다. 그런 다음, 각 쥐 쌍(테스트 상황)이 배치될 반전된 T자형 테이블의 측면을 임의로 선택합니다.
5. 실험의 제2 복제(즉, 블록)에 대해 동일한 절차(단계 2.3~ 2.4.2)를 반복한다.
   참고: 연구의 목적이 하품 빈도에 대한 사회적 조건(즉, 상호 작용하는 쥐 2마리)의 영향을 테스트하는 경우, 4가지 테스트 상황 각각에 대한 대조군으로 빈 관찰 케이지 옆에 있는 관찰 케이지에 놓인 쥐 하나를 사용합니다. 8마리의 쥐의 대조군에 대해 각 시험 상황에 대해 이 실험을 2x 수행한다.
6. 처음 네 마리의 쥐를 동물 시설에서 관찰실로 옮겨 시험 세션을 설정하고, 15분 동안 남아 서 새로운 환경에 적응합니다. 개별 케이지에 쥐를 수송하고 수송하는 동안 관찰실에서 서로 분리 유지.
   참고: 동물 시설 직원이 제공한 동물 운송안전 지침을 따르고 표시된 옷을 사용하여 실험실에서 동물과 함께 작업하십시오. 쥐는 관찰실에있는 동안 음식과 물에 액세스 할 수 없습니다.
7. 적응 기간이 경과한 후 반전된 T자형 테이블을 더 큰 직사각형 테이블에 놓습니다. 관찰을 할 때 충분히 방을 조명 천장 램프가 있는지 확인합니다.
8. 각 관찰 케이지의 바닥에 필터 용지를 놓고 케이지를 뒤집은 T자형 테이블의 양쪽에 쌍으로 놓습니다. 각 케이지 쌍 사이에 해당 칸막이가 배치됩니다.
   참고: 필터 용지를 사용하면 케이지를 더 쉽게 청소할 수 있으며 쥐가 미끄러지지 않고 이동할 수 있는 거친 표면을 제공합니다.
9. 각 쥐 쌍의 하품 동작을 기록되도록 전략적으로 두 개의 디지털 캠코더를 배치합니다. 캠코더가 삼각대에 안전하게 고정되고 관찰 케이지의 방향이 올바르게 지정되었는지 확인합니다. 캠코더를 데스크톱 컴퓨터에 연결하여 쥐의 동작을 동시에 모니터링합니다.
   참고: 플래시 드라이브에 디지털 정보를 저장하여 실험 세션을 영구적으로 보관합니다. 저장 용량이 높은 플래시 드라이브를 사용합니다.
10. 적응 기간 이후에, 이전에 결정된 할당에 따라 관찰 케이지에 쥐를 놓습니다. 캠코더의 자동 초점을 설정하고 스톱워치로 비디오 녹화를 동시에 시작합니다. 60분 관찰 기간이 끝나면 비디오 녹화를 중지합니다.
    참고 : 실험자는 테스트 세션 동안 방 밖에있을 수 있으며 원격으로 관찰 할 수 있지만, 한 사람이 관찰실에있는 것이 좋습니다 (실험 설정에서 가능한 한 멀리) 쥐의 행동을 모니터링하는 동안 테스트 세션이 중단 없이 진행되는지 확인합니다.
11. 관찰이 끝나면 쥐를 동물 시설의 집 새장에 되돌려 놓습니다. 동물 시설 직원에게 쥐가 다시 음식과 물에 접근할 수 있도록 요청하십시오. 무독성 세제를 사용하여 관찰 케이지를 철저히 청소하고 하루의 두 번째 및 최종 테스트 세션을 수행하기 위해 실험 설정을 준비합니다.
    참고: 관찰 케이지에 놓일 때 쥐가 남긴 향을 제거하기 위해 나무를 청소하면 다음 쌍의 쥐의 행동에 영향을 줄 수 있습니다.
12. 1~2명의 자원봉사자를 배정된 치료법에 부분적으로 장님으로 훈련하여 모든 발생 샘플링 방법을 사용하여 하품을 식별하고 기록합니다. 참관인이 소개 섹션에 설명된 하품의 정의를 사용해야 합니다.
13. 표준 재생 시스템을 사용하여 컴퓨터 화면에서 각 비디오를 재생하고 투영합니다. 관찰자에게 각 비디오를 보고 이전에 준비된 데이터 시트를 사용하여 하품 동작을 관찰하고 기록한 다음, 하품을 관찰하고 측정하는 능력을 향상시키기 위해 느린 속도로 비디오를 검토할 수 있도록 하십시오.
    1. 관찰자에게 다음과 유사한 표기법 시스템을 사용하여 하품을 점수매기도록 요청합니다. ³ || ⁶ | ^9,분 3에서 하나의 하품, 분 6에서 두 하품, 분 9에서 하나의 하품을 나타내는.) 점수 하품 시퀀스(예: 1.2, 2.2, 3.2, 5.0, 5.8)를 더 정밀하게 기록합니다(소수점 1자리로 반올림된 분).
    2. 또는 표준 데이터 수집 프로그램을 사용하여 비디오의 데이터를 컴퓨터에 직접 입력합니다. 관찰자가 이러한 프로그램에 대해 잘 알고 있는지 확인합니다.
       참고: 필요한 경우 관찰자가 두 개 이상의 세션에서 각 비디오를 볼 수 있도록 허용합니다. 한 관찰자가 한 실험 블록에 해당하는 모든 비디오를 볼 수 있는지 확인합니다. 두 명의 관찰자가 이 비디오를 본 경우 하품을 관찰하고 기록하는 능력의 차이가 테스트 상황의 영향을 혼동할 위험이 있을 수 있습니다. 하품이 동일한 방식으로 추가되도록 하기 위해 동영상의 10%-20%에서 다른 관찰자 간의 관찰자 내 신뢰도를 점수화하는 것이 중요합니다.

3. 데이터 처리

1. 데이터 시트에서 스프레드시트로 각 쥐의 하품의 시간 순서를 기록합니다. 짧은 제목을 가진 각 쥐에 대해 하나의 열이 있는지 확인합니다(예: 왼쪽과 오른쪽에 익숙한 쥐의 첫 번째 쌍을 나타내기 위해 fr1.l 및 fr1.r). 빈 셀을 0 또는 NA로 채우면 모든 열의 길이가 동일한지 확인합니다(아래 참조).
   참고: 보조 문서로 제공된 일반 가이드를 사용하여 데이터를 처리하고, 전염성 하품을 측정하고, 전염성 하품 곡선을 얻기 위해 다음 단계를 완전히 이해합니다.
   1. 하품을 가장 가까운 분으로 기록한 경우, 각 관련 분에서 하품 수를 입력하고 0(하품 없음)을 사용하여 지정된 분에 하품이 발생하지 않은 경우 세포를 채웁니다. 워크시트를 텍스트 파일(.txt)으로 저장합니다.
   2. 하품을 분 에서 가장 가까운 소수자릿수로 기록한 경우, 순서를 하향식으로 입력하고 "NA"를 사용하여 하품(행)의 수가 열의 수(행)보다 낮은 열의 빈 공간을 채우고 r에 대해 기록된 하품의 최대 수(행)를 작성합니다. 에. 워크시트를 텍스트 파일(.txt)으로 저장합니다.
      참고: R은 빈 셀로 작업할 수 있기 때문에 워크시트를 서로 다른 길이의 열로 저장할 수 있습니다. R에서 제공하는 도움말 옵션을 사용하여 누락된 데이터를 처리합니다.
2. 시작 R. 이전에 있던 파일에서 데이터를 가져옵니다.
3. 확장 "와 프로그램 코드를 저장합니다. R"(보충 자료로 제공됨)은 하품이 정수 또는 소수로 기록되었는지 여부에 따라 특정 프로그램 코드(일반 가이드 참조)를 다운로드합니다. 쥐의 각 쌍과 시간 프레임의 원하는 수에 대한 프로그램을 실행합니다.
   1. 이제 각 쥐의 하품 수를 무작위로 분포하여 프로그램을 다시 실행합니다(일반 가이드 참조). 모든 실험 조건(예: 친숙하고 익숙하지 않은 쥐) 및/또는 모든 테스트 상황에 대해 동일한 단계(3.3단계 ~ 3.3.1단계)를 따릅니다. 일반 가이드에 표시된 대로 진행하고 결과를 Excel로 내보냅니다.
      참고: 텍스트 편집기사용으로 위에서 제안한 대로 이전에 저장된 프로그램을 가져오는 대신 프로그램을 복사하여 R의 작업 영역에 직접 붙여넣습니다.
4. 하품 전염 곡선을 만들려면 스프레드시트에 이전에 저장된 데이터를 사용합니다. 쥐, 시간 창 및 테스트 상황의 각 쌍에 대한 전염률에서 비 전염률을 뺍니다. 관찰된 데이터와 인위적(무작위로 분산된) 데이터의 분석을 분리합니다.
   1. 그런 다음 부트스트랩 프로시저를 사용하여 각 시간 창 및 테스트 상황에 대한 신뢰 구간(CI)을 계산합니다(일반 가이드 참조). 친숙하고 익숙하지 않은 쥐에 대한 분석을 분리합니다. 그런 다음 각 실험 조건에 대한 4가지 테스트 상황의 인공 데이터를 결합하고 부트스트랩 절차를 사용하여 각 시간 창에 대한 CI를 계산합니다.
   2. 그런 다음 각 테스트 상황 및 실험 조건에 대한 플롯을 작성합니다(그림 2 및 그림 3참조). 마지막으로, 테스트 상황 간의 하품 전염 강도를 비교하기 위해 다중 회귀 분석을 수행합니다(아래 참조).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

결과

쥐는 빈번한 하품(시간당 약 22하품 31)을 위해 선택된 스프라그-다울리 쥐의이전에 생산된 서브라인으로부터 선택되었다. 그러나, 익숙하지 않은 9쌍의 익숙하지 않은 수컷 쥐(2.5~3개월 생후)는 시험 상황당 평균 18회, 시간당약 12회 하품을 하였다. 따라서 하품 전염을 측정하는 시험 상황은 하품 동작을 부분적으로 억제한다.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

토론

성공적인 결과를 얻으려면 고려해야 할 메서드의 중요한 단계가 있습니다. 익숙한 쥐는 수박 후 실험을 실행하기 전에 적어도 1.5 개월 동안 홈 케이지를 공유해야합니다. 그러나, 익숙하지 않은 쥐는 별도의 홈 케이지에 살고 있어야합니다. 두 경우 모두, 쥐의 쌍은 다른 쓰레기에서 왔어야 하지만 가능한 한 나이에 유사 합니다. 관찰 케이지에 관해서는, 이 쥐 사이의 후각 접촉을 보장하는 유일?...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
Acrylic dividers	Handcrafted	Not available	Two dividers, one clear and one opaque, will have 24 holes each. The other two dividers, one clear and one opaque, will have no holes. See the main text for details of construction.
An R-based program	Benemérita Universidad Autónoma de Puebla	Not available	This is the program used to assess yawn contagion in rats. See the main text for information about the way the program is used.
Data sheets	The user can elaborate them	Not available	These forms will be used for the observer to record the frequency of yawning behaviour by viewing the video recordings. Alternatively, a notebook can be use provided you follow the suggestions given in the main text.
Desktop computer	Any maker	Not available	Make sure the computer has a video card capable of conveniently processing the video recordings of yawning behaviour.
Digital camcorders	Any maker	Not available	They will be used to video record yawning behaviour of each pair of rats; there will be 2 pairs of rats per experimental session.
Flash drive	Any maker	Not available	Each experimental session will last 60 min, and so you will require sufficient memory to store the video recording.
Glass cages	Handcrafted	Not available	Each cage (19 X 19 X 10 cm height) will have 24 holes (0.5 cm diameter) forming three rows in the middle of one of its sides. See the main text for more details about their construction. It is recommended to fabricate one extra cage in case one of them is accidentally broken.
Markers	Sharpie or any other maker	Not available	Permanent markers to number the rats. See the main text to see one way of using painting symbols on the rat's tail.
Pencils	Any maker	Not available	They are used by the observer to record the frequency of yawning. It is important that the observer has previously been trained to recognize yawning behaviour and operate the video player system.
R software	R Development Core Team	Not available	Download R at: http://cran.r-project.org/
Rail-like wooden bars	Handcrafted	Not available	They will be fixed in the middle of the rectangular wooden sheet  forming a track, where a second wooden sheet is placed. See the main text for additional instructions for construction.
Rectangular table	Any maker	Not available	This is the table (approximately 2 x 1 m) where the inverted T-shaped table will be placed for performing the observation of yawning behaviour.
Sprague-Dawley male rats	Any local supplier of laboratory animals	Not available	Nine pairs of male rats per test situation are necessary for each group, familiar and unfamiliar rats, because with this sample size the interindividual variation that might exist in yawning frequency will not severely affect the conclusions drawn from the statistical analysis performed to the data.
Spreadsheet software	Microsoft	Not available	Excel will be the software used to store the yawning recordings initially recorded on the data sheets. Revise the main text for instructions about the recommended way of doing the transcription.
Square filter papers	Any maker	Not available	They are used for covering the cage's bottom.
Tripods	Any maker	Not available	They will be used for fixing the camcorders in front of each pair of observation cages.
Wooden Inverted T-shaped table	Handcrafted	Not available	Read the instructions in the main text to see the way of constructing it. If preferred, a different material to wood can be used. Make sure any material is as resistant as possible to the transmission of ultrasounds, which the rats might use for communication.