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요약

쌍둥이 빈혈 다혈구증가증 염기서열(TAPS)을 가진 단융모성 쌍둥이의 경우, 기증자 쌍둥이와 그에 상응하는 태반 분담금은 창백한 반면, 수용자 쌍둥이와 태반 분담금은 다발성 측면을 가지고 있습니다. 여기에 제시된 프로토콜은 출생 후 TAPS 태반의 모계 쪽의 색상 차이를 정량화하는 프로토콜입니다.

초록

쌍둥이 빈혈 polycythemia sequence(TAPS)는 단융모성 쌍둥이의 5%에서 발생하며 쌍둥이 간 헤모글로빈 차이가 큰 것이 특징입니다. TAPS에 대한 산후 진단 기준은 혈액학적 매개변수와 태반의 특성을 기반으로 합니다. 출생 후 태반 검사는 빈혈 쌍둥이와 다발성 쌍둥이의 태반 영역 사이의 모계 쪽의 색깔이 현저하게 다르다는 것을 보여줍니다. TAPS 태반의 색상 차이는 급성 주산기 태아-태아 수혈을 받은 단융모성 태반에 비해 더 높습니다. 따라서 이는 TAPS에 대한 추가 진단 기준으로 사용됩니다. ImageJ와 같은 소프트웨어를 사용하면 TAPS 태반의 색상 강도를 컴퓨터 기반으로 측정할 수 있습니다. 그러나 TAPS 태반의 빈혈 성분과 다혈구 성분 사이의 색상 차이를 계산하는 자세한 방법은 아직 설명되지 않았습니다. 여기에 제시된 프로토콜은 ImageJ 소프트웨어를 사용하여 TAPS 태반의 모계 쪽에서 색상 차이를 분석하기 위한 단계별 방법을 제공합니다.

서문

TAPS는 태아-태아 수혈 증후군의 만성 형태이며, 올리고-다수과체증 서열의 징후 없이 쌍둥이 간 헤모글로빈(Hb)의 큰 차이가 특징이다1. TAPS의 주요 발병 기전은 독특한 태반 혈관 구조와 관련이 있으며, 몇 개의 미세한 문합만으로 공여자(빈혈 쌍둥이)에서 수혜자(다낭성 쌍둥이)까지 만성 및 저속 수혈이 가능합니다2,3,4. TAPS의 산후 진단은 혈액학적 검사에서 Hb 차이가 크고, 망상적혈구 수가 크게 차이가 나타남 및/또는 염료를 이용한 태반 주사에서 미미한 문합만 관찰하는 결과를 통해 진단할 수 있다5. 그러나 망상적혈구 수가 항상 출생 시 측정되는 것은 아니며, 대부분의 태아 의학 센터에서 태반 주사가 일상적으로 시행되지 않습니다. 추가 진단 기준은 망상적혈구 수를 측정하지 않고 태반 염료를 주입하지 않은 사례를 진단하는 데 유용할 수 있습니다. 기증자 쌍둥이의 창백한 피부와 수혜자 쌍둥이의 다혈질 피부 사이의 현저한 색상 차이는 출생 시 TAPS 쌍둥이에서 일관되게 나타납니다. 빈혈 쌍둥이와 다혈구 쌍둥이의 태반 영역 사이의 모계 쪽의 유사한 색상 차이도 전체 검사에서 감지됩니다.

최근에는 이러한 태반의 색 차이가 출생 후 TAPS 진단을 확인하는 간단하고 정확한 방법으로 사용될 수 있다는 가설이 세워졌습니다6. TAPS 태반의 색상 차이를 정량화하는 것은 태반 주사에 비해 시간을 절약할 수 있습니다. 또한 TAPS 태반의 색상 차이를 정량화하는 것은 망상적혈구 수에 비해 비용 효율적입니다. 이 방법에 사용된 재료는 임상 환경에서 쉽게 구할 수 있으므로 이 방법은 TAPS의 진단을 위한 간단하고 정확한 기준을 제공합니다. 이 프로토콜은 TAPS를 사용하여 단융모성 태반의 모계 측에서 색상 차이를 정량화하는 자세한 방법을 설명합니다.

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프로토콜

이 프로토콜은 라이덴 대학 의료 센터 윤리 위원회의 승인을 받았으며, 인간 단융모성 쌍둥이 태반에 대한 산후 검사는 라이덴 대학 의료 센터의 표준 치료의 일부입니다. 인간 단융모성 쌍둥이 태반의 산후 검사에 대한 동의 획득은 라이덴 대학 의료 센터(Leiden University Medical Center)에서 면제됩니다.

1. TAPS 태반 채취 및 총체검사

  1. 모든 인간 단융모성 쌍둥이 태반을 모든 재태 연령에 TAPS가 전달되도록 사용하십시오. 인간 단융모성 쌍둥이 태반을 가능한 한 온전하게 유지하십시오. 수동 제거가 필요한 경우 가능한 한 부드럽게 단융모성 태반을 전달합니다.
    참고: 출산 후 조산사 또는 신생아 전문의는 TAPS 태반을 플라스틱 상자에 넣은 다음 실험실로 옮겨야 합니다.
  2. 첫 번째 아기가 출산하면 하나의 클램프를 사용하여 탯줄을 고정하여 출생 순서를 첫 번째로 표시합니다. 다른 아기가 출산할 때 두 개의 클램프를 사용하여 탯줄을 고정하여 출생 순서를 두 번째로 표시합니다.
  3. 태반의 온전함, 탯줄 삽입의 유형, 탯줄 혈관의 수, 분열막의 전체적인 검사를 포함하여 태반을 거시적으로 검사하여 융모막을 확인합니다. 단융모막의 병리학적 진단을 위해 트윈 간 막을 수집합니다. TAPS 태반의 직경은 재태 연령에 따라 다릅니다.
    참고: 검사는 산모 쪽에 유착 혈전이 형성되는 것을 방지하기 위해 출산 후 1주일 이내에 수행해야 합니다.
  4. 필요한 경우 검사할 때까지 태반을 건조한 플라스틱 상자에 넣어 냉장(1-4 °C)하여 보관하십시오.

2. 태반 모계 측의 준비

  1. 가위를 사용하여 태반 가장자리를 따라 양막을 다듬습니다. 막의 혈관에 주의를 기울이고 탯줄 삽입이 있는지 확인하여 태반 덩어리에서 혈액이 흘러나오는 것을 방지하십시오.
    참고: 탯줄 삽입에서 탯줄의 혈관은 태반 덩어리에 부착되기 전에 양막 표면으로 일정 거리 이동합니다. "벌거벗은" 혈관을 절단하면 태반 덩어리에서 혈액이 흘러나와 엉망이 될 수 있습니다.
  2. 태반엽의 손상을 방지하기 위해 혈전을 조심스럽게 제거하십시오.
  3. 모체 쪽의 태반 엽을 조직하여 엽 사이의 간격을 제거합니다. 태반은 일반적으로 약 15개의 엽을 가지고 있으며 모계 쪽에서 확인할 수 있습니다.

3. 문서화 준비

  1. 모계 쪽이 위를 향하도록 플라스틱 패널에 태반을 놓습니다.
  2. 태반의 모계를 빛에 노출시킵니다(왼쪽과 오른쪽에 있는 두 개의 동일한 램프를 사용하여 균일하게 분포). 빛의 강도를 조절하는 기능이 있는 램프를 사용하십시오.
  3. 반사를 줄이려면 온화한 조명 조건에서 카메라(Table of Materials)로 디지털 사진을 촬영하고 광원에 직접 노출되지 않도록 하십시오.
  4. 태반의 모계 쪽에 수직으로 사진을 찍습니다.

4. ImageJ를 이용한 컴퓨터 측정

  1. 소프트웨어 아이콘을 클릭하여 컴퓨터에서 ImageJ를 엽니다.
  2. "파일"을 클릭한 다음 "열기"를 클릭하여 태반 사진을 엽니다. 필요한 이미지가 열리면 "이미지" | "Color", "Channels Tool"을 차례로 사용하여 드롭 목록에서 "Color"를 선택합니다.
    참고: 소프트웨어는 측정된 물체의 색상을 자동으로 식별할 수 있습니다. 태반은 빨갛습니다. 소프트웨어에서 "색상"을 클릭하면 태반 사진이 자동으로 빨간색 스펙트럼 채널로 변환됩니다.
  3. "Freehand selections"를 클릭하면 태반의 모계 쪽의 다양한 색상 강도에 대한 육안 검사를 통해 polycythemic 및 anequmic twins의 plethoric 및 pale placental share의 윤곽을 각각 그릴 수 있습니다.
  4. "분석"을 클릭하십시오 | "히스토그램". Color Intensity histogram은 plethoric area 또는 pale area를 각각 선택한 후 구합니다. 강도 히스토그램에 표시되는 모드는 선택한 태반 영역에 가장 많이 존재하는 색상을 나타냅니다.
  5. 빈혈성 쌍둥이의 색 강도 모드를 polycythemic twin의 색 강도 모드로 나누어 색 차이 비율을 계산합니다.

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결과

태반 검사는 TAPS의 진단을 위한 귀중한 정보를 제공합니다. TAPS 태반은 작은 혈관 문합이 거의 없는 것이 특징입니다1 (그림 1, 그림 2). TAPS태반의 이러한 특징은 TAPS의 발병기전과 관련이 있으며 산후 진단 기준입니다. 출생 시 신생아의 피부색과 유사하게, TAPS에서 수혜자 쌍둥이의 태반 비율은 일반적으로 어...

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토론

우리의 경험을 바탕으로 최적의 검사를 달성하기 위한 핵심 사항은 다음과 같습니다: 1) 특히 수동 제거가 필요한 경우 손상을 방지하기 위해 가능한 한 부드럽게 태반을 전달합니다. 2) 접착 혈전의 형성을 피하기 위해 출생 직후 MC 태반 검사 (바람직하게는 며칠 이내); 3) 모든 혈전을 부드럽게 제거하고 태반엽의 손상을 피합니다. 4) MC 태반의 모계 쪽을 균일한 광 조건에...

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공개

저자는 공개할 내용이 없습니다.

감사의 말

이 연구는 중국 국립자연과학재단(National Natural Science Foundation of China, 연구보조금 번호: 81801465), 선전 산밍 의학프로젝트(Sanming Project of Medicine, 보조금 번호: SZSM201512012), 중국 국가 핵심 연구 개발 프로그램(National Key Research and Development Program of China, 보조금 번호: 2018YFC1002900)의 지원을 받았다.

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자료

NameCompanyCatalog NumberComments
20 ml syringesBD Plastipak300613
Color dyeRoyal Talens Schoolverf36716010 (blue); 36715010 (green); 36712350 (yellow); 36713570 (pink)
Digital cameraCanon Inc.ixus 125 hs
ImageJNational Institute of HealthFor Windows ImageJ bundled with 64-bit Java 1.8.0_112
Umbilical cathetersVygon1270.08 (8 F)
1270.08 (5 F)
1270.04 (4 F)
1270.03 (3.5 F)
1270.02 (2.5 F)

참고문헌

  1. Lopriore, E., et al. Twin anemia-polycythemia sequence in two monochorionic twin pairs without oligo-polyhydramnios sequence. Placenta. 28 (1), 47-51 (2007).
  2. Zhao, D., et al. Placental share and hemoglobin level in relation to birth weight in twin anemia-polycythemia sequence. Placenta. 35 (12), 1070-1074 (2014).
  3. Lopriore, E., et al. Assessment of feto-fetal transfusion flow through placental arterio-venous anastomoses in a unique case of twin-to-twin transfusion syndrome. Placenta. 28 (2-3), 209-211 (2007).
  4. Lopriore, E., et al. Quantification of feto-fetal transfusion rate through a single placental arterio-venous anastomosis in a monochorionic twin pregnancy. Placenta. 30 (3), 223-225 (2009).
  5. Tollenaar, L. S. A., et al. Improved prediction of twin anemia-polycythemia sequence by delta middle cerebral artery peak systolic velocity: new antenatal classification system. Ultrasound in Obstetrics and Gynecology. 53 (6), 788-793 (2019).
  6. Tollenaar, L. S., et al. Color Difference in Placentas with Twin Anemia-Polycythemia Sequence: An Additional Diagnostic Criterion. Fetal Diagnosis and Therapy. 40 (2), 123-127 (2016).
  7. Zhao, D. P., et al. Prevalence, size, number and localization of vascular anastomoses in monochorionic placentas. Placenta. 34 (7), 589-593 (2013).
  8. De Paepe, M. E., Burke, S., Luks, F. I., Pinar, H., Singer, D. B. Demonstration of placental vascular anatomy in monochorionic twin gestations. Pediatric and Developmental Pathology. 5 (1), 37-44 (2002).
  9. Lewi, L., et al. Placental sharing, birthweight discordance, and vascular anastomoses in monochorionic diamniotic twin placentas. American Journal of Obstetrics and Gynecology. 197 (6), 581-588 (2007).
  10. Robertson, E. G., Neer, K. J. Placental injection studies in twin gestation. American Journal of Obstetrics and Gynecology. 147 (2), 170-174 (1983).
  11. Lewi, L., et al. The outcome of monochorionic diamniotic twin gestations in the era of invasive fetal therapy: a prospective cohort study. American Journal of Obstetrics and Gynecology. 199 (5), (2008).
  12. Slaghekke, F., et al. Fetoscopic laser coagulation of the vascular equator versus selective coagulation for twin-to-twin transfusion syndrome: an open-label randomised controlled trial. Lancet. 383 (9935), 2144-2151 (2014).

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