인도시아닌 녹색 혈관 조영술에 의한 신생혈관 연령 관련 황반변성의 혈관 형태 특성 분석

요약

현재 형광 혈관 조영술(FA)은 맥락막 신생혈관 형성(CNV)의 동물 모델에서 누출 패턴을 식별하는 데 선호되는 방법입니다. 그러나 FA는 혈관 형태에 대한 정보를 제공하지 않습니다. 이 프로토콜은 마우스 모델에서 레이저 유도 CNV의 다양한 병변 유형을 특성화하기 위해 인도시아닌 녹색 혈관 조영술(ICGA)을 사용하는 방법을 간략하게 설명합니다.

초록

연령 관련 황반 변성(AMD)은 노인 실명의 주요 원인이며 인구 고령화로 인해 유병률이 빠르게 증가하고 있습니다. 맥락막 신생혈관 형성(CNV) 또는 습성 AMD는 모든 AMD 사례의 10%-20%를 차지하며, AMD 관련 실명의 80%-90%를 차지합니다. 현재의 항-VEGF 치료법은 환자의 약 50%에서 차선의 반응을 보인다. CNV 환자에서 항-VEGF 치료에 대한 내성은 종종 동맥 CNV와 관련이 있는 반면, 반응자는 모세혈관 CNV를 갖는 경향이 있다. 플루오레세인 혈관 조영술(FA)은 습성 AMD 환자 및 동물 모델의 누출 패턴을 평가하는 데 일반적으로 사용되지만, CNV 혈관 형태(세동맥 CNV 대 모세혈관 CNV)에 대한 정보는 제공하지 않습니다. 이 프로토콜은 레이저 유도 CNV 마우스 모델의 병변 유형을 특성화하기 위해 인도시아닌 녹색 혈관 조영술(ICGA)을 사용하는 방법을 소개합니다. 이 방법은 습성 AMD에서 항-VEGF 내성에 대한 메커니즘과 치료 전략을 조사하는 데 중요합니다. 기계론 및 치료 연구에서 CNV의 누출 및 혈관 특징에 대한 포괄적인 평가를 위해 FA와 함께 ICGA를 통합하는 것이 좋습니다.

서문

연령 관련 황반 변성(AMD)은 노인에게 심각한 시력 상실을 초래하는 흔한 질환입니다¹. 미국에서만 AMD 환자 수가 현재 1,100만 명에서 2050년까지 거의 2,200만 명에 달할 것으로 예상됩니다. 전 세계적으로 AMD 확진자 수는 2040년까지 무려 2억 8,800만 명에 이를 것으로 예상됩니다².

"습성" 또는 신생혈관성 AMD라고도 알려진 맥락막 신생혈관형성(CNV)은 중앙 망막 아래에 비정상적인 혈관이 형성되어 시력에 치명적인 영향을 미칠 수 있습니다. 이로 인해 출혈, 망막 삼출 및 심각한 시력 상실이 발생합니다. 세포외 VEGF를 표적으로 하는 항혈관내피성장인자(VEGF) 치료제의 도입은 CNV 치료에 혁명을 일으켰습니다. 그러나 이러한 발전에도 불구하고 최대 50%의 환자가 이러한 치료법에 대해 차선의 반응을 보이며, 체액 축적 및 해결되지 않은 출혈 또는 새로운 출혈과 같은 지속적인 질병 활동을 보인다 3,4,5,6,7,8,9,10,11,12,13,14.

프로토콜

이 연구에서 수행된 동물 실험은 베일러 의과대학의 IACUC(Institutional Animal Care and Use Committees)의 승인을 받았습니다. 모든 절차는 안과 및 시력 연구에서 동물 사용에 대한 ARVO(Association for Research in Vision and Ophthalmology) 성명서에 설명된 지침에 따라 수행되었습니다. 본 연구에는 영(7-9주) 및 늙은(12-16개월) C57BL/6J 수컷 및 암컷 마우스가 사용되었습니다. 동물은 상업적 출처에서 얻었다( 자료표 참조).

1. 이미징 시스템 준비

1. 이미징 플랫폼에 가열 패드를 놓고( 재료 표 참조) 이미징 중에 마우스의 체온이 유지되도록 합니다. 가열 패드를 활성화하고 온도를 35°C로 조정합니다.
2. 먼지 덮개를 제거하고 레이저 스캐닝 검안경을 켭니다. 기기에 55° 렌즈를 놓습니다.
3. 이미징 소프트웨어( 재료 표 참조)를 설정하고 유전자형, 성별, 나이 등을 포함한 필수 정보를 입력합니다. 이미징 세션이 시작되면 ICGA 이미지 캡처를 위한 IR ....

토론

이 연구는 레이저 유도 CNV가 있는 마우스 모델에서 세동맥 및 모세관 맥락막 신생혈관화(CNV)의 혈관 형태를 식별하기 위해 인도시아닌 녹색 혈관 조영술(ICGA)을 사용하는 것을 보여주었습니다. 인도시아닌 그린(ICG) 염료의 헤모글로빈 결합 및 적외선 특성은 현재 연구 커뮤니티에서 사용하는 방법인 형광 혈관 조영술(FA)을 사용하여 달성하기 어려운 CNV 형태를 검출할 수 있게 했습니다.

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
32-G Insulin Syringe	MHC Medical Products	NDC 08496-3015-01
Alexa Fluor 488 goat anti-rabbit secondary antibody	Invitrogen	A11008
Anti-α smooth muscle Actin antibody	Abcam	ab5694
Bovine Serum Albumin	Santa Cruz Biotechnology, Inc.	sc-2323
C57BL/6J mice (7-9 weeks)	The Jackson Laboratory	Strain #:000664
Fluorescein Sodium Salt	Sigma-Aldrich	MFCD00167039
Gaymar T Pump Heat Therapy System	Gaymar	TP-500	Water circulation heat pump for mouse recovery after imaging
GenTeal Gel	Genteal	NDC 58768-791-15	Clear lubricant eye gel
GS-IB4 Alexa-Flour 568 conjugate	Invitrogen	I21412
Heidelberg Eye Explorerer	Heidelberg Engineering, Germany	HEYEX2
Indocyanine Green	Pfaultz & Bauer	I01250
Ketamine	Vedco Inc.	NDC 50989-996-06
Paraformaldehyde	Acros Organics	416785000
Proparacaine Hydrochloride Ophthalmic Solution (0.5%)	Sandoz	NDC 61314-016-01
Spectralis Multi-Modality Imaging System Heidelberg Engineering, Germany SPECTRALIS HRA+OCT Tropicamide ophthalmic solution (1%) Bausch & Lomb NDC 24208-585-64 for dilation of pupils GenTeal Gel Genteal NDC 58768-791-15 clear lubricant eye gel Ketamine Vedco Inc NDC 50989-996-06 Xylazine Lloyd Laboratories NADA 139-236 Acepromazine Vedco Inc NDC 50989-160-11 32-G Needle Steriject PRE-32013 1-ml syringe BD 309659 Indocyanine Green Pfaltz & Bauer I01250	Heidelberg Engineering, Germany	SPECTRALIS HRA+OCT
Triton X-100	Sigma-Aldrich	X100-1L
Tropicamide ophthalmic solution (1%)	Bausch & Lomb	NDC 24208-585-64	For dilation of pupils
Xylazine	Lloyd Laboratories	NADA 139-236