가임력 보존을 겪고 있는 젊은 환자의 난소 예비력을 평가하기 위한 Z-점수

요약

본 프로토콜은 난소 조직 동결보존을 통한 가임력 보존이 필요한 25세 미만 환자의 난소 예비력을 평가하는 방법을 설명합니다. 이 방법에는 (1) 대뇌 피질 샘플의 난소 예비력에 대한 조직학적 평가, (2) 참조 데이터 세트와의 비교, (3) Z-점수 계산이 포함됩니다.

초록

여성은 난소 예비력이라고 하는 재생 불가능한 난소 난포 풀을 가지고 태어납니다. 이 예비력은 난소의 원시 난포로 구성되며 유전 및 내분비 장애, 의학적 개입 및 내분비 교란 인자와 같은 많은 요인의 영향을 받을 수 있습니다. 생식선 독성 치료가 필요한 경우 생식력 보존이 권장됩니다. 여성이 선호하는 옵션은 난모세포와 배아 동결 보존입니다. 그러나 매우 어리고 성적으로 미성숙한 환자에서는 난소 조직 동결 보존이 유일한 옵션입니다. 동결 보존된 조직 샘플의 여포 밀도를 아는 것은 젊은 환자를 위한 불임 상담에 필수적입니다. 이 프로토콜은 가임력 보존을 받고 있는 25세 이하의 소녀 및 젊은 여성의 난소 조직 품질을 평가하기 위한 도구로 대뇌 피질 난포 밀도에 대한 Z-점수를 사용하는 것을 보여줍니다. 환자 샘플의 난포 밀도는 표준에서 가능한 편차를 추정하기 위해 Hassan et al.이 개발한 연령 정규화 참조 표준과 비교됩니다. 난포 밀도는 조직학적 정량화를 통해 측정됩니다. 이를 위해 난소 피질 조직의 작은 조각(~2mm x 2mm x 2mm)을 Bouin's 또는 포름알데히드 용액에 고정하고 파라핀에 삽입하고 4μm 두께로 절단하고 헤마톡실린과 에오신으로 염색하고 슬라이드 스캐너를 사용하여 디지털화합니다. 피질에 존재하는 난포 단계는 원시 난포에서 원시 난포까지 다양합니다. 대뇌 피질 영역은 조직학적 섹션의 표면 상피에서 1mm였습니다. 난포 밀도는 Schmidt et al.이 제시한 수정된 공식을 사용하여 계산되며 Z-점수는 기준 평균과 표준 편차를 사용하여 결정됩니다. Z-점수는 측정된 값이 기준 평균에서 얼마나 벗어나는지를 나타내며 감소된(<-1.7 Z-점수) 난소 예비력을 결정합니다. 이 방법을 사용하면 난포 밀도는 가임력 보존이 필요한 젊은 환자를 위한 난소 예비력의 귀중한 척도로 사용할 수 있습니다.

서문

난소는 역동적이고 내분비학적으로 활동적인 기관으로, 외부 피질과 내부 수질로 구성됩니다. 난소 내에는 이질적으로 분포하는 난포가 있으며, 난포는 기질 과립 세포로 둘러싸인 생식선 난모세포를 포함하고 있습니다¹. 모든 난포는 태아 발달 과정에서 이미 형성되어 재태 연령 20주경에 최고조에 달한 후 기하급수적으로 감소합니다. 출생 시 1-200만 개의 원시 난포가 피질 내에 남아 있으며, 사춘기까지 수십만 개의 난포만이 생존한다². 난소 예비력이라고도 하는 성장하지 않는 난포 풀은 다른 요인 중에서도 여성의 생식력에 영향을 미칩니다. 난소 예비력은 피질 내에 있으며 난포가 성장하고 성숙함에 따라 수질로 이동합니다. 일부 연구자들은 난소 예비력이 원시 난포로만 구성되어 있다고 인정하는 반면, 다른 연구자들은 모든 단층 난포(즉, 원시, 중간 및 일^차)를 포함하는 것으로 인식합니다3,4,5,6. 여성의 일생 동안 300-400개....

프로토콜

수행된 모든 절차는 스웨덴 윤리 검토 기관(Sveafertil 환자, Dnr: 2019-03802) 및 헬싱키 대학 병원 윤리 위원회(HCH 환자, Dnr 340/13/03/03/2015)의 승인을 받았습니다. 연구에 대한 서면 및 구두 정보는 연구 간호사에 의해 제공되었으며 헬싱키 선언에 따라 정보에 입각한 동의를 얻었습니다. 18세 미만 환자의 경우 법적 보호자로부터 사전 동의를 받았습니다. 모든 샘플은 유럽 일반 데이터 보호 규정(GDPR)에 따라 가명화되어 처리되었습니다. 이 연구에 사용된 시약 및 장비의 세부 사항은 재료 표에 나열되어 있습니다.

1. 난소 조직 채취 및 처리

참고: 현지 지침(예: 북유럽, 유럽 또는 국제 특정 지침)에 따라 불임 위험이 높거나 매우 높을 수 있는 징후가 있는 경우 가임력 보존에 적합한 모든 환자를 식별합니다. 유럽에서는 가임력 보존 연구 프로그램의 일환으로 미성년자 환자만 모집합니다. 불임 위험을 결정하려면 해당 국가의 가임력 보존 지침을 사용하십시오.

1. 전신 마취하에 수술을 수행합니다. 마취 유도를 위해 프로포폴....

토론

여성은 보충할 수 없는 유한한 난모세포를 가지고 태어납니다. 난소 예비력은 여성의 생식 잠재력을 결정하는 핵심 요소입니다. 이 기사에서는 난포 밀도의 조직학적 정량화 방법과 젊은 환자와 최대 25세 여성의 난소 피질 난포 밀도의 Z-점수를 사용하여 참조 표준물질과 비교하는 방법을 간략하게 설명합니다.

이 프로토콜에서 난소 조직은 가임력 ?.......

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
1x Dulbecco's Phosphate Buffered Saline	Thermo Fisher	14190144
1x Phosphate Buffered Saline w/ CaCl2, MgCl2, 1 g/L D-glucose, 36 mg/L pyruvate	Thermo Fisher	14287-080
37% Hydrochloric acid	Sigma-Aldrich	1.09057.1000
70% ethanol	Histolabs	01370.01L
95% ethanol	Fisher scientific	10572143
Absolute ethanol	Histolabs	01399.01L
Bouin's solution	Sigma-Aldrich	HT10132-1L
Eosin Y Free acid	Sigma-Aldrich	E4009-5G
Formaldehyde	Thermo Fisher	28908
Haematoxylin solution according to Delafield	Sigma-Aldrich	03971-250ML
ImageJ
Microsoft Excel
Microtome
Pertex mounting solution	Histolabs	00840-05
Propofol	Baxter Holding B.V.	N01AX10	ATC-code provided instead of catalog number
QuPath			https://qupath.github.io/
Rocuronium bromide	B. Braun Melsungen AG	M03AC09	ATC-code provided instead of catalog number
Scott's tap water substitute concentrate	Sigma-Aldrich	S5134-6x100ml
Sevoflurane	Baxter Medical AB	N01AB08	ATC-code provided instead of catalog number
Slide scanner
Sufentanil	Hameln Pharma gmbh	N01AH03	ATC-code provided instead of catalog number
Sugammadex	Baxter Holding B.V.	V03AB35	ATC-code provided instead of catalog number
SuperFrost plus white	Histolabs	06400
SuperFrost Plus White microscope slides	Histolabs	06400
Xylene	Saveen Werner	131769.1611