설치류 모델에서 중뇌동맥 폐색 전 대뇌 혈류 모니터링을 위한 레이저 도플러 프로브의 안와 주변 배치

요약

여기에는 레이저 도플러 프로브를 쥐와 생쥐에게 적합한 안와 주위 위치인 중간 대뇌 동맥(MCA)의 원위 영역 위에 두개골에 배치하여 일시적인 MCA 폐색 중 혈류를 평가하는 것이 포함됩니다.

초록

중뇌동맥폐색(MCAO)은 설치류에서 허혈성 뇌졸중의 전임상 모델링을 위한 최고의 표준 방법입니다. 그러나 가장 숙련된 수술 손으로도 성공적인 교합이 보장되지 않습니다. 오류는 주로 필라멘트가 올바른 깊이에 배치되지 않고 경색이 없거나 혈관 천공이 있을 때 발생하여 사망을 초래할 수 있습니다. 레이저 도플러 유량계(LDF)는 MCAO 절차 중 국소 뇌혈류(CBF)에 대한 실시간 피드백을 제공하는 신뢰할 수 있는 기술입니다. 여기에서는 생쥐와 생쥐 모두에서 CBF를 측정하기 위해 레이저 도플러 프로브의 궤도 주위 배치를 위한 신속한 기술을 보여줍니다. 우리의 이론적 근거는 LDF 구현을 단순화하여 수술 신뢰성 향상을 위해 광범위한 사용을 장려하는 것이었습니다. 이 기술은 두개골 솎아내기와 특수 장비의 필요성을 없애고, 등쪽 배치가 아닌 안와 주위 부위에 배치하여 효율성과 채택 용이성을 촉진합니다. 여기에 설명된 프로토콜에는 수술 전 준비, 안와 주위 도플러 프로브 배치 및 수술 후 관리가 포함됩니다. 대표적인 결과로는 성공적인 MCAO 수술을 보여주는 대표적인 LDF 추적과 함께 절차적 요소의 시각적 묘사가 있으며, 필라멘트 배치에 실패한 사례는 합병증을 유발합니다. 이 프로토콜은 적절한 필라멘트 배치를 확인하는 LDF를 설명하고 대체 방법에 비해 간소화된 절차를 제공합니다.

서문

중뇌동맥폐색법(MCAO)은 1986년 과학계에 소개된 이래 설치류에서 널리 사용되어 왔으며,¹⁹⁹⁰년 2년에 기술된 Longa 적응법과 그 직후에 생쥐에 대한 적응이 이루어졌다.³. Longa의 간행물에는 설명되어 있지 않지만, 필라멘트 배치를 확인하기 위해 레이저 도플러 유량계(LDF) 신호를 사용하는 것이 곧 문헌⁴에 설명되었습니다. MCAO 절차 중 LDF 고용은 문헌에 두드러지게 나타나 있지만 현재 뇌졸중 전임상 평가 네트워크(SPAN) 표준 수술 절차(SOP⁾⁵에서는 선택 단계로 지정되어 있습니다.

LDF의 사용은 MCAO 절차 중 올바른 필라멘트 배치를 확인하므로 특히 약물 효능을 탐구하도록 설계된 실험에서 연구 설계 엄격성 및 후속 결과에 기여합니다. LDF를 사용하면 필라멘트가 충분히 멀리 배치되지 않았을 때 부상이 없거나 필라멘트가 너무 많이 삽입되었을 때 혈관 천공으로 인한 동물의 죽음이라는 이분법적 상황을 초래하는 잘못된 필라멘트 배치로 인한 수술 실수....

프로토콜

이 프로토콜을 설명하기 위해 성체 마우스와 랫트를 사용하였다(25g, C57BL/6J, Jackson Laboratories; 250g, Sprague Dawley, Envigo). 동물 취급 및 실험 절차는 University of Arizona Institutional Animal Care and Use Committee, 국내법 및 실험실 동물 관리 원칙에 따라 승인 하에 수행되었습니다¹¹. 쥐와 생쥐는 12 시간의 밝은 / 어두운 일정 (오전 7 시부 터 오후 7 시까 지)에 따라 음식과 물을 즉시 사용할 수 있습니다.

1. 수술 전 준비

참고: 일반적으로 설치류에 대한 MCAO 수술은 생존 수술로 수행되므로 기관별 IACUC 프로토콜에 설명된 대로 무균 또는 팁 전용 수술 기술을 사용해야 합니다. 이 경우 외과의는 멸균된 기구와 용품을 사용하여 팁 전용 기술을 사용합니다.

1. 상업용 소독제로 수술 작업 표면을 소독하고 고압멸균으로 기구, 드레이프, 거즈, 면봉, 봉합사 및 메스 블레이드로 구성된 멸균 수술 팩을 준비합니다.....

토론

MCAO는 설치류의 대뇌 동맥 폐색 및 재관류를 모델링하기 위한 표준 절차이며 전임상 뇌졸중 연구의 초석이 되어 설치류의 국소 허혈 유도를 통해 인간 뇌졸중 병태생리학을 모방할 수 있습니다. 이는 외과 의사 간 및 외과 의사 내 변동성이 상당한 엄격한 수술 절차입니다. LDF의 적용이 변동성을 줄인다는 증거는 없지만 일부 설계에서는 과학적 엄격성과 연구 결과를 향?.......

자료

Name	Company	Catalog Number	Comments
curved spring scissors	Castroviejo	1501710
forceps #5	Fine science tools	11250-20
forceps #5/45	Fine science tools	1151-35
Forcepts Cautery tool	Conmed	M18019-01
Laboratory tape	Fisherbrand Labeling Tape	15-950
Laser Doppler Monitor	Moore Instruments	MOORVMS-LDF
LDF software	Perisoft for Windows or moorSOFT	NA
Mouse clippers	Philips Norelco	MG7910
Periflux System 4000, probe 407	Perimed	equipment no longer available
plastic wrap	Glad	press n seal
Rat clippers	oster	A5 or similar
Small rodent anesthesia	JD Medical	custom order
small scissors	excelta	362 Sissors or similar
Temperature monitor system with probe	Physitemp	TCAT-2AC Controller