우수한 Colliculus의 표면에 플루오로 - 골드의 응용 프로그램에 의해 망막 신경절 세포의 퇴보 라벨링

요약

이 동영상은 우수한 colliculus (SC)의 표면에 플루오로 - 금 (FG)를 적용하여 RGC의 역행 라벨링 방법을 설명합니다. 기술은 두개골을 시추 피질을 aspirating와 SC의 전체 등의 표면 위에 젤라틴 스폰지를 적용 포함됩니다.

초록

망막 신경절 세포 (RGC) 집계 특히 녹내장에서 망막 변성을 평가하는 것이 필수적입니다. 신뢰성 RGC 라벨은 치료 효과를 평가하기 위해 필수적입니다. 쥐에서 RGCs의 98 % 정도는 contralateral 우수한 colliculus (SC) (포레스터와 피터스, 1967)에 프로젝트에 알려져 있습니다. 우리가 녹내장이 가장 취약한 망막 신경 세포에 집중할 수 있도록 SC의 표면에 플루오로 - 금 (FG)를 적용은 거의 모든 RGCs 레이블을하실 수 있습니다. FG는 망막 신경절 세포의 축삭 터미널 의해 촬영 및 양자 망막에서의 somas에 retrogradely 이송됩니다. 2 일 가로 시신경의 그루터기에서 FG를 넣어 RGC의 역행 라벨과 비교, RGC 생존의 간섭이 최소화됩니다. 얼룩의 RGCs, amacrine 세포와 망막 신경절 세포 레이어에있는 혈관의 내피,이 분류 방법은 RGC에보다 구체적인 것을 cresyl 보라색 얼룩과 비교합니다. 이 비디오는 SC의 표면에 적용하여 FG RGC의 역행 라벨링 방법을 설명합니다. SC을 폭로하는 피질을 aspirating와 SC의 전체 등의 표면 위에 젤라틴 스폰지를 적용 표시되며 수술 절차는 두개골을 천공 있습니다. SC의 대규모 intracranial 출혈과 뜻을 피하에 대한 유용한 팁을 제공하고 있습니다.

프로토콜

1. 케타민 (80mg/kg)과 xylazine (8mg/kg) (2시 1분에서 볼륨 비율)의 내부 복막 주사로 쥐 마취시키다. 수술 중 각막의 건조 방지하기 위해 무균 눈 윤활유 연고를 적용합니다.
2. 머리 털이 (안구의 귀 수준)를 면도하고 앞니 표시줄에 해당 incisors을 클램프 및 설정 머리로 머리를 무대에서 머리를 수정.
3. 소독 작업 70 % 알콜 다음 10 % povidone의 요오드 솔루션 공간이 있습니다.
4. 피부와 두개골과 봉합 (화살, 코로나와 가로 봉합) (그림 1) 노출 근육을 잘라. 절개 영역으로 스플래시 (2 MG / kg을 초과하지 않는)과 같은 진통제, bupivicaine을 적용합니다.
5. 화살 봉합사의 양쪽에 두개골 구멍을 (ø 2x2 mm, 화살 및 가로 봉합 양쪽에서 0.5 ㎜) 드릴. meninges의 파열과 봉합 아래 누워있는 부비동을 피한다.
   
   
   그림 1. 살아있는 쥐 두개골에 특징.
   
   
6. 스프링 가위로 meninges를 열고 잘라 찢어하지 마십시오.
7. 진공 펌프와 세 체크 포인트를 볼 수 있습니다하여 조심스럽게 우수한 colliculus의 등의 표면을 통해 거짓 대뇌 내용을 대기음 :
   1. 회색으로 회색에서 흰색으로 뇌 조직 변경의 색상
   2. 무색 뇌척수가 올 때 aspirating 중지
   3. 조심스럽게 두라이 적용 노란 우수한 colliculus를 노출 수평 가장 낮은 흡입 수준 확대
8. SC 네 가지 가장자리 직접 현미경으로 관찰 할 수있을 때까지 SC 통해 두뇌 내용을 대기음. 삭제 대뇌 피질의 부분은 바람직하지 않은 부작용 (예, 모터 장애) 피하기 위해 최소화되어야합니다. 부비동 만지지 않도록주의하십시오.
9. 가능한 SC의 표면이 건조하기 위해 미세 무균 면화 줄무늬가있는 구멍에서 액체를 흡수. 그런 다음, 젤라틴 스펀지의 얇은 레이어를 장소 사전 절어 SC의 표면에 6 % 플루오로 - 골드 (FG가 망막 신경절 세포의 축삭 터미널 의해 촬영 및 양자 망막에서의 somas에 retrogradely 수송 임).
10. gelfoam로 입구를 기입하고 봉합 클립과 피부 상처를 닫습니다.
11. 동물 보온 백열 전구 아래에서 복구할 수있었습니다. 진통, buprenorphine (100mcg/kg)는, SC 라벨 후 5 일 동안 마시는 물 속에 구두 적용됩니다.

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토론

1. 왜 망막 신경절 세포 개수이 수술 방법을 사용합니까?
   
   쥐의 망막 신경절에 세포의 98 % 정도는 (RGC) contralateral 우수한 colliculus (SC)에 프로젝트로 알려져있다. 우리가 녹내장이 가장 취약한 망막 신경 세포에 집중할 수 있도록 SC의 표면에 플루오로 - 금을 적용은 RGCs의 거의 모든 라벨 수 있습니다. 2 일 가로 시신경의 그루터기에서 FG를 넣어 RGC의 역행 라벨과 비교, RGC 생존의 간섭이 최소화됩니다. 망?...

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