안정한 HeLa 세포를 함유하는 사전 준비된 HPF 및 FSF 처리된 사파이어 디스크를 취하여 PBS-A 완충액으로 5분 동안 세척하고 이 과정을 3회 반복합니다. 사파이어 디스크를 실온에서 1밀리리터의 PBS-A 버퍼가 들어 있는 35mm 배양 접시로 옮깁니다. 배양 접시 내의 PBS-A 완충액을 1밀리리터의 환원액으로 교체하고 실온에서 1시간 동안 인큐베이션한다.
환원액 1 밀리리터에 금 전구체를 준비하고 즉시 와동 처리하여 혼합하십시오. 이중 증류수에 80 밀리리터의 500 밀리몰 D- 페니실라 민을 금 전구체 용액에 첨가한다. 그리고 즉시 소용돌이.
배양 접시의 용액을 1 밀리리터의 금 전구체 용액으로 교체하고 섭씨 4도에서 2 시간 동안 배양합니다. 새로 제조된 수소화붕소나트륨 용액 20 내지 100 마이크로리터를 금 전구체 용액에 첨가하고, 즉시 잘 섞이도록 흔들어주고, 실온에서 5분 동안 배양한다. 용액을 2밀리리터의 PBS-A 완충액으로 교체하여 반응을 중지시킨다.
그런 다음 제조업체의 지침에 따라 에폭시 수지 혼합물을 준비하고 사파이어 디스크를 평평한 바닥 매립 캡슐로 옮기고 실온에서 최소 30분 동안 수지에 침투시킵니다. 시편을 섭씨 60도의 오븐에서 최소 18시간 동안 중합합니다. 사파이어 디스크를 노출시키기 위해 면도기를 사용하여 시편 블록을 조심스럽게 다듬어 중합된 시편의 초박형 부분을 준비합니다.
사파이어 디스크로 블록 팁을 액체 질소에 몇 초 동안 담그고 실온을 해동합니다. 동결-해동 작업을 여러 번 반복하여 블록에서 디스크를 분리합니다. EGFP-MTn-KDEL 단백질은 말초 ER 루멘과 핵 외피의 핵 주위 공간에 독점적으로 분포 된 2-5 나노 미터 크기의 금 나노 입자로 나타났다.
잘 보존된 울트라 구조는 태그가 부착된 단백질의 단일 분자 식별을 가능하게 하고 ER 미토콘드리아 상호 작용과 같은 세포 기관 상호 작용의 분석을 용이하게 했습니다. Ost4-EGFP-MTn 단백질의 나노 입자는 핵 외피의 외막에서 ER 막을 묘사했다. 마찬가지로, Mito-acGFP-MTn 발현 세포는 미토콘드리아 기질에서 특이적 표지를 나타내었다.
