이 연구에서는 벼 묘목에서 자란 작은 갈색 화분 호퍼 또는 SBPH를 사용합니다. 배양이 준비되면 성장한 SBPH를 원심분리기 튜브에 넣고 10-30분 동안 얼음 욕조에 넣습니다. 그런 다음 실체 현미경으로 유리 슬라이드에 얼어붙은 SBPH를 놓고 복부가 위를 향하도록 하고 6개의 다리에 초점을 맞춥니다.
초미세 팁이 있는 고정밀 핀셋 2개를 준비합니다. 핀셋 하나를 사용하여 곤충의 몸을 눌러 제자리에 고정하고 다른 핀셋으로 한쪽 다리를 조심스럽게 잡아당깁니다. 그런 다음 곤충의 가슴을 부드럽게 눌러 혈림프가 상처를 통해 흐르도록합니다.
체액 림프를 수집하려면 하나의 마이크로 리터 모세관 튜브를 피펫 전구에 넣어 마이크로 피펫을 준비하십시오. 모세관을 곤충 상처 가까이에 놓고 마이크로피펫 피펫 전구를 잡습니다. 모세 혈관 끝을 삼출 혈 림프에 대고 수집하십시오.
모세관이 원하는 스케일 라인에 도달하면 손가락으로 피펫 전구의 작은 구멍을 약간 막아 흡수 과정을 중지합니다. 이어서, 수집된 체액림프를 100 마이크로리터의 PBS 완충액으로 배출한다. SDS-PAGE를 통해 체액 채취의 정확성을 확인하였으며, 별도로 채취한 3개의 체액 림프 샘플 모두에서 유사한 단백질 함량을 보였다.
유충의 경우 총 단백질 농도는 밀리리터당 약 3.7mg이었습니다. 성인 여성 및 남성 SBPH에서, 단백질 농도는 각각 밀리리터당 약 3.5 및 3.6 밀리그램이었고, 3개의 샘플 간에 유의한 차이를 나타내지 않았다. 유충 혈림프는 2 내지 20 나노미터 크기의 혈구를 나타내었다.
또한, 세포 농도는 3개의 수집된 혈림프 샘플에서 비슷하였다.
