약물 처리된 C.elegane을 이미징한 후 colocalization 플러그인을 사용하여 이미지 J 서버에서 ND 파일을 열고 대화 상자에서 이미지 분할 옵션을 선택합니다. 각 ND 파일에는 세 가지 파장과 가시광선에서 촬영한 이미지 평면이 포함되어 있습니다. 명시야, 녹색 및 빨간색 이미지로 작업합니다.
이미지를 클릭하고 복제를 선택하거나 키보드 단축키 Shift 더하기 D.Then 앞에서 설명한 대로 다른 이미지 복제본을 생성하여 배경을 줄임으로써 원본 이미지를 그대로 유지하기 위해 이러한 이미지의 복제본을 생성합니다. 롤링 반경이 100인 배경을 빼고 배경 만들기 옵션을 선택하여 주어진 이미지의 배경으로 이미지를 생성합니다. 이제 프로세스로 이동하여 이미지 계산기를 클릭하고 두 번째 복제 이미지에서 첫 번째 복제 이미지를 뺍니다.
colocalization 분석에 결과 이미지를 사용합니다. colocalization 플러그인을 사용하려면 이미지를 클릭하고 유형을 선택한 다음 8비트를 선택하여 녹색 및 빨간색 채널 이미지를 8비트로 변환합니다. 그런 다음 플러그인을 클릭하고 colocalization을 선택합니다.
미토콘드리아와 리소좀 신호의 colocalization을 측정하려면 비율을 75%로 설정하고 임계값 빨간색 채널을 80.0으로, 임계값 녹색 채널을 50.0으로 설정합니다. colocalized puncta를 포함하고 RGB 이미지에서 3개의 8비트 이미지를 결합한 8비트 이진 이미지가 출력으로 생성됩니다. 다음으로, 수동으로 영역을 선택하고 편집, 선택 및 마스크 만들기를 클릭하여 마스크를 만들어 웜의 머리 몸벽 근육에 있는 점자에 초점을 맞춰 관심 영역을 선택합니다.
관심 영역에 있는 파티클을 선택하려면 이미지 계산기를 사용하여 공국소화된 8비트 및 마스킹된 이미지를 선택합니다. 이 작업을 활용하고 관심 영역에서 푼타를 선택하여 관심 영역에서 푼타를 갖는 이미지를 생성한다. 마지막으로, colocalized 미토콘드리아와 리소좀의 면적을 분석하려면 분석을 선택한 다음 입자 분석을 선택하고 0.1625 평방 마이크로 미터에서 4 평방 마이크로 미터 사이의 반점의 합을 측정합니다.
벌레의 머리, 몸, 벽 근육의 공초점 이미지는 미토콘드리아와 리소좀의 공동 국소화를 보여주었습니다. VL-850은 벌레의 머리 체벽 근육에 강력한 미토파지를 유도하여 강력한 미토파지 유도제를 나타냅니다. VL-850의 미토파지 효능은 FCCP의 미토파지 효능과 유사했습니다.
