전도성 탄소 테이프를 잘라 췌장 세포 절편이 장착된 실리콘 웨이퍼와 SEM 시편 스테이지 사이에 붙입니다. 다음으로, FESEM 가속 전압을 4 밀리미터의 작동 거리로 2 킬로 볼트로 설정하십시오. 상단 메뉴 표시줄에서 HL 아이콘을 클릭합니다.
그런 다음 저배율에서 대상 슬라이스 스트립의 첫 번째 단면을 정하고 HL 아이콘을 다시 클릭하여 고배율 모드로 전환합니다. 이미지 밝기, 대비 및 배율을 조정하여 관심 있는 구조에 적합한 이미지를 수집합니다. 그런 다음 프로젝트 보기를 선택한 다음 데이터 열기를 선택하고 분석할 이미지 파일을 소프트웨어로 가져옵니다.
Align Slices and Edit를 클릭하여 사진을 정렬합니다. 그런 다음 왼쪽 하단 메뉴 모음에서 이미지 투명도를 수정하여 강도 범위 값을 조정합니다. 하위 볼륨 추출 모듈을 선택하고 정렬된 데이터 세트를 클릭하여 전체 스택의 겹치는 부분의 크기에 맞춥니다.
그런 다음 세그멘테이션 하위 섹션에서 Resample을 선택한 다음 세그멘테이션을 선택하고 Save를 클릭합니다. 그런 다음 Magic Wand의 임계값과 브러시 도구의 크기를 선택하여 올바른 범위를 선택합니다. 선택 메뉴에서 추가 아이콘을 클릭하여 선택한 영역을 추가합니다.
지역 분할을 완료한 후 개체 크기 및 사진 해상도에 대한 최상의 결과에 따라 이미지 파일을 생성합니다. 자르기 편집기를 클릭하고 가상 슬라이더 상자에 숫자 6을 입력합니다. 그런 다음 왼쪽 드롭다운 메뉴에서 프로젝트 하위 섹션 아래의 회색 영역을 마우스 오른쪽 버튼으로 클릭하고 서피스 생성(Generate Surface)을 선택한 다음 생성 및 적용(Create And Apply)을 선택합니다.
생성된 파일에서 지표면 뷰 모듈을 사용하여 지표면 구조와 3D 표현을 작성합니다. 2D FESEM 이미지는 대조군에서 미토콘드리아가 규칙적인 크리스타 구조로 고르게 분포되어 있음을 보여줍니다. 대조적으로, RSL3 그룹은 증가된 막 밀도와 모호한 크리스타 구조로 수축된 미토콘드리아를 보여주었습니다.
그러나 RSL3 그룹에서 모든 미토콘드리아 크리스타가 퇴화되어 일부가 손상되지 않은 것은 아닙니다. RSL3 그룹과 비교하여, 억제제 그룹은 대부분 손상되지 않은 크리스타 구조를 가졌으며 소수만이 뚜렷하지 않았습니다. 대조군의 3D 이미지는 미토콘드리아와 그 크리스타 구조에 대한 보다 정확한 보기를 제공했습니다.
RSL3 그룹 3D 이미지는 불규칙하고 공포화된 미토콘드리아를 보인 반면, 억제제 그룹은 다양한 크리스타 모양을 나타냈습니다. 미토콘드리아 변화의 정량화는 RSL3 그룹이 대조군에 비해 미토콘드리아 길이와 부피가 유의하게 감소한 반면 억제제 그룹은 중간 결과를 보였다는 것을 보여주었습니다. RSL3는 또한 미토콘드리아 형태를 변화시키고 페롭토시스를 유발하여 미토콘드리아 기능 장애를 일으키고 세포 대사를 변화시켰습니다.
