상업용 커피 그라인더는 약 30-50g의 드라이아이스를 매번 30초 동안 두 번 갈아서 냉각을 시작합니다. 드라이아이스 가루를 버리고 냉동 효모 세포 스파게티 3g과 약 30-50g의 드라이아이스를 예식된 커피 그라인더에 넣고 섞습니다. 캡과 그라인더 사이의 접합부를 Parafilm으로 밀봉합니다.
효모 세포 드라이아이스 믹스를 각각 30초씩 10회 혼합하고 매 라운드 사이에 30초 간격을 둡니다. 생성된 효모 세포 드라이아이스 분말을 깨끗하고 건조한 주걱을 사용하여 플라스틱 비커에 옮깁니다. 드라이아이스 증발 후 2.25mL의 마그네틱 비드 또는 MB 완충액을 프로테아제 및 인산가수분해효소 억제제가 함유된 효모 세포 분말에 첨가합니다.
세포 완충액 혼합물을 세게 피펫팅한 후 세포 현탁액을 15밀리리터 원뿔형 튜브로 옮깁니다. 다음으로, DNA용 조세포 추출물의 0.1% 샘플과 단백질 분석용 0.05% 샘플을 섭씨 영하 20도에서 보관합니다. 나머지 세포 현탁액을 결합이 적은 2밀리리터 반응 튜브로 옮기고 튜브를 원심분리하여 세포 파편을 분리합니다.
완료되면 모든 상층액을 하나의 15밀리리터 원뿔형 튜브로 당깁니다. 다시 말하지만, DNA의 경우 상층액의 0.1%를 섭씨 영하 20도에서 보관하고 단백질 분석을 위해 상층액의 0.05%를 저장합니다. 다음으로, 500 마이크로 리터의 면역 글로불린 G 결합 마그네틱 비드 슬러리를 프로테아제 및 인산 분해 효소 억제제를 함유 한 500 마이크로 리터의 차가운 MB 완충액과 함께 섭씨 4 도에서 20 RPM으로 회전하여 각각 5 분 동안 두 번 세척합니다.
마그네틱 랙을 사용하여 비드에서 상층액을 제거하기 전에 마그네틱 랙을 사용하여 비드에서 상층액을 제거하기 전에 섭씨 4도에서 섭씨 4도에서 1시간 동안 마그네틱 비드를 배양합니다. 평형 마그네틱 비드 슬러리를 이전에 얻은 셀 용해물과 혼합하고 15밀리리터 원뿔형 튜브로 끌어당깁니다. 섭씨 4도, 20RPM에서 2시간 동안 배양한 후 완전한 마그네틱 비드 세포 용해물 현탁액을 결합이 낮은 반응 튜브로 옮깁니다.
마그네틱 랙을 사용하여 세포 용해물에서 관심 크로마틴 고리를 운반하는 마그네틱 비드를 분리합니다. DNA 및 단백질 분석을 위해 일부 샘플을 섭씨 영하 20도에서 보관하기 전에 각 튜브의 나머지 플로우스루를 새 15밀리리터 원뿔형 튜브로 옮깁니다. 다음으로, 300 마이크로 리터의 차가운 MB 완충액에 각 15 밀리리터 원뿔형 튜브에서 마그네틱 비드를 매달고 비드를 하나의 반응 튜브로 결합합니다.
프로테아제와 인산가수분해효소 억제제가 함유된 750마이크로리터의 차가운 MB 완충액 750마이크로리터를 사용하여 섭씨 4도에서 20RPM으로 회전하면서 각각 10분씩 5회 세척합니다. 다음으로, 프로테아제 및 인산가수분해효소 억제제 없이 750마이크로리터의 차가운 MB 완충액으로 최종 세척을 수행합니다. 준비된 비드를 프로테아제 및 인산가수분해효소 억제제 없이 40마이크로리터의 차가운 MB 완충액에 현탁시킵니다.
