Murine Adipose-Derived Mesenchymal Stromal Cells의 이동 분석

TNF 알파 밀리리터당 10나노그램을 함유한 배지로 24시간 동안 또는 자극되지 않은 세포의 경우 TNF 알파 없이 2개의 AdMSC를 처리합니다. 4 시간 동안 혈청 자유로운 매체에 있는 세포를 세척하고 부양 한 후에, 각 삽입에 25, 000의 AdMSCs를 추가하고 섭씨 37 온도에 24 시간 동안 부화한다. 두 웰의 내용물을 흡인하고 삽입한 다음 PBS로 두 번 세척하여 각 웰에 1밀리리터의 PBS를 남깁니다.

집게를 사용하여 삽입물을 하나씩 제거하고 면봉으로 상단 챔버를 부드럽지만 철저하게 닦아 이동하지 않은 세포를 제거합니다. 나머지 PBS와 피펫 500 마이크로리터의 결정 보라색 용액을 웰과 인서트의 상단 챔버에 흡입합니다. 1시간 배양 후 삽입물의 웰과 상단 챔버에서 결정 보라색 용액을 흡입합니다.

상단 챔버를 세척하고 닦은 후 PBS 1mL가 들어 있는 새 24웰 플레이트에 삽입물을 넣습니다. 카메라가 장착된 도립 현미경을 사용하여 10배 대물렌즈 아래에서 인서트 중심을 향한 4개의 무작위 영역을 이미지화합니다. 이미지를 선호하는 이미지 처리 소프트웨어에 업로드하고 보라색 염색 세포와의 대비를 향상시키기 위해 배경을 조정합니다.

22L에 감염된 CLIA는 NBH로 치료받은 환자에 비해 염증 마커 CCL2, CCL5, IL1 베타와 성상세포 마커 S100 베타에 대한 mRNA 발현이 증가한 것으로 나타났다. AdMSC를 사용한 공동 배양은 염증성 사이토카인 CCL2, CCL5 및 IL1 베타의 발현을 감소시켰지만 MBH 및 22L 감염 세포 모두에 대한 TNF 알파는 감소시키지 않았습니다. AdMSC와 병용배양한 BV2는 NBH 및 RML 처리 세포 모두에서 염증 마커 IL1 베타, IL-6, TNF 알파 및 보체 단백질 C1qa에 대한 mRNA의 감소를 보여주었습니다.

또한 AdMSC는 M1 미세아교세포 유전자 CD16을 감소시키고 M2 미세아교세포 마커 ARG-1을 증가시켰습니다. in vitro 이동 분석은 AdMSC가 1% RML을 포함하는 배지로 상당한 이동을 보였음을 시사했습니다.